薛运波│文 李志勇│图

1.雄蜂捕捉

（1）标记雄蜂日龄：在种用父群里，当雄蜂羽化出房时，用带有颜色丙酮胶在其胸部背板上点上标记（图1），出房12 天后雄蜂达到性成熟，可以捕捉采精。使用不同颜色的丙酮胶标记雄蜂好处有：一是可以识别不同日龄的雄蜂；二是在培育近交系时，可以区分同一品种、不同蜂群的雄蜂，实现母×子交配、兄×妹交配等近交目的。用丙酮胶标记雄蜂的数量要大，因为雄蜂没有明显的群界，极易飞散到其他蜂群中。在点标记时，切勿把丙酮胶点到雄蜂头部及翅膀上，以免影响正常生理功能和行为。

图1 多种颜色标识不同来源雄蜂

（2）雄蜂的捕捉

蜂巢内捕捉雄蜂：进行非近亲繁育时，在一个蜂场饲养的只有一个品种条件下，一般不需要给雄蜂点标记来区分某些事项，这样进行选择性成熟雄蜂前要了解雄蜂性成熟的一些特征表现。性成熟的雄蜂一般是聚集在边脾、隔板、箱壁及隔王板上（图2）；雄蜂腹部环节收缩的比较紧，腹部显得坚硬，翅与腹部的比值略大于未成熟的雄蜂，行动比较灵敏。因此，在箱内捕捉雄蜂时选择具有上述特征表现，性成熟的比较多。捕捉时间在8～11 时，13～17 时。

图2 巢内捕捉雄蜂

巢门口捕捉雄蜂：在晴朗的日子里，雄蜂出巢飞翔一般在每天10～17 时，大量出巢飞翔的时间在12～16 时。巢门口捕捉雄蜂最好选择在下午，捕捉者蹲在蜂箱侧面，选择归巢、行动比较敏捷、腹部坚实的雄蜂进行捕捉，这样的雄蜂基本上是性成熟的雄蜂（图3）。

图3 巢门口准备婚飞的雄蜂

（3）幽闭饲养雄蜂：为了减少捕捉性成熟雄蜂所消耗时间，可以把刚出房不久的雄蜂幽闭在雄蜂饲养笼里，不让其出巢飞翔，待出房12 天以后性成熟时，从蜂群中取出雄蜂饲养笼，将雄蜂放到飞翔笼内，在60～100 瓦的灯光照射下充分飞翔排泄15～20 分钟，然后进行采精。雄蜂饲养笼的长×宽×高为10cm×8cm×3cm，两面是隔王栅，工蜂可以自由通过隔王栅饲喂雄蜂，每个笼内饲养雄蜂25 只左右，每10 个饲养笼装在一个特制的巢框内，放在12 框以上的蜂群中饲养，这样饲养雄蜂群内要有充足的蜜粉饲料和大量青幼龄饲喂蜂，确保雄蜂的正常发育。

2.强迫排精

左手在雄蜂飞翔笼中捉取飞翔有力、腹部坚实的雄蜂，拇指、食指、中指轻轻的对其胸部向后施加压力，并使尾部朝上，性成熟的雄蜂此时腹部收缩变得更加坚硬；右手的拇指或食指按在雄蜂腹部背面1～3 节，与左手的拇指、食指同时向腹部尾端施加压力，使腹腔的血淋巴挤压内阳茎，迫使阳茎渐次外翻，首先翻出的是阳茎基板，然后是一对角囊和羽状突，最后是阳茎球，射精管开口于阳茎球，当阳茎球末端冒出淡黄褐色精液时，停止挤压。加压时用力要稳，勿操之过急，如果用力太大，容易导致精液飞溅或阳茎球破裂，使精液混入体液。在雄蜂阳茎外翻过程中，切勿使外翻的阳茎球及精液接触到雄蜂体表面及操作者的手指，以免造成污染（图4～6）。

图4 性成熟雄蜂阳茎外翻，示精液

图5 雄蜂阳茎外翻，无精液

图6 雄蜂阳茎外翻，示精液污染

3.雄蜂精液采集

采集精液前，先将已灭菌的注射器安装好，然后用精子生理液冲洗注射器及采精针头3 次，最后注射器及授精针头内注满加有抗菌素的生理液。把注射器固定到授精仪上，针尖移到体视显微镜的视野内，调整显微镜焦距至针尖清晰，接着进行采集精液。采集精液时，授精针头先吸入一小段空气，约1.0～1.5μl 的空间，使生理液与精液有气泡相隔，以免精液混入大量生理液。吸入的空气量不能太大，如果吸入空气量较大，在采集精液或以后授精过程中受到阻力时，空气会膨胀和压缩变型，给采集精液或授精带来不便（图7）。

图7 针头内采集的精液和气泡

采集精液时，针尖要贴紧精液的表面，以免吸入空气。但是针尖又不能深入精液深层，由于每只雄蜂只有1.5～1.7μl 的精液附在粘液表面，实际上只能采集1.0μl 左右，很容易吸入粘液。因此，在采集下一只雄蜂精液时，将采集的前一只雄蜂精液推出针尖外一部分，使其与准备采集的精液面相接触后再吸入，这样既可以防止采精时吸入空气，又可以减少吸入粘液的机会。一旦发现吸入粘液时要尽快排出，哪怕是稀粘液也不可以混进精液吸入授精针头。因为粘液不仅会堵塞授精针头，如果注射到蜂王侧输卵管后会凝固而堵塞输卵管，这样不仅影响精子进入受精囊，而且会造成蜂王死亡。采集精液结束时，授精针头内仍然要吸入一段空气，然后用生理液封口，以免授精针头因精液凝固而堵塞（图8）。

图8 雄蜂精液采集

4.精子活力的检测

采精当时授精，污染机会少，精子在体外滞留时间短，活力较强，一般不需要检查精子活力情况。如果利用贮存的精液进行授精时，在授精前有必要对精子活力进行检查。检查方法是：置于27℃～30℃的室温下，取精液1μl 置于凹玻片上，用稀释液进行20 倍以上的稀释，放上盖玻片。将显微镜调至400 倍观察，在视野中精子呈圆周运动或原地摆动，说明活力较强，可以利用此精液进行授精。如果精子运动较慢，活率在60%以下，应放弃使用该精液进行授精。