吴雪敏 林海丽 林晓 陈瑾

[摘要] 目的 分析抑制素B（INHB）、Makorin环指蛋白3（MKRN3）、成纤维生长因子受体2（FGFR2）对女童中枢性性早熟的预测价值。 方法 选取2018年1月至2021年1月期间于我院就诊中枢性性早熟女童100例作为中枢性性早熟组、健康体检的健康女童80名作为健康组。测定血清INHB水平、MKRN3、FGFR2相对表达量，比较三者在健康组、中枢性性早熟组中的表达及与疾病类型的关系，分析三者对此病的预测价值。结果 与健康组比较，中枢性性早熟组INHB水平升高，MKRN3、FGFR2相对表达量降低，差异有统计学意义（P<0.001）。进展型中枢性性早熟INHB水平高于缓慢进展型，MKRN3、FGFR2相对表达量低于缓慢进展型，差异有统计学意义（P<0.001）。Pearson相关性分析显示，INHB与MKRN3呈负相关（r=-0.420，P<0.001）;INHB与FGFR2呈负相关（r=-0.218，P=0.029）;MKRN3与FGFR2呈正相关（r=0.586，P<0.001）。与INHB、MKRN3、FGFR2单项预测比较，三项联合对女童中枢性性早熟的预测价值较高，差异有统计学意义（P<0.05）。 结论 中枢性性早熟女童血中INHB升高，MKRN3、FGFR2降低，且与疾病类型相关，三者联合对此病的预测价值较高。

[关键词] 抑制素B;Makorin环指蛋白3;成纤维生长因子受体2;女童中枢性性早熟

[中图分类号] R729          [文獻标识码] A          [文章编号] 1673-9701（2021）33-0023-04

[Abstract] Objective To analyze the predictive value of inhibin B （INHB）， makorin ring finger protein 3 （MKRN3）， and fibroblast growth factor receptor 2 （FGFR2） on central precocious puberty （CPP） of girls. Methods A total of 100 girls with CPP attending our hospital from January 2018 to January 2021 were selected as the CPP group and 80 healthy girls with health checkups as the healthy group. The relative expressions of serum INHB， MKRN3， and FGFR2 were measured， and the expressions of the three were compared between the healthy group and the CPP group. The correlation between the expressions of the three and the type of disease was analyzed， and the predictive value of the three for this disease was analyzed. Results Compared with the healthy group， the INHB level was increased and the relative expressions of MKRN3 and FGFR2 were decreased in the CPP group， with statistically significant differences（P<0.001）. The INHB level in progressive CPP was higher than that in slowly progressive CPP， and the relative expressions of MKRN3 and FGFR2 in progressive CPP were lower than those in slowly progressive CPP， with statistically significant differences（P<0.001）. Pearson correlation analysis showed that there was a negative correlation between INHB and MKRN3 （r=-0.420， P<0.001）， and between INHB and FGFR2 （r=-0.218， P=0.029）， and there was a positive correlation between MKRN3 and FGFR2（r=0.586， P<0.001）. Compared with INHB， MKRN3， and FGFR2 alone， the combination of the three had a higher predictive value for CPP of girls， with statistically significant difference（P<0.05）. Conclusion The increase of INHB level and the decrease in relative expressions of MKRN3 and FGFR2 in the blood of girls with CPP are correlated with the type of disease， and the combination of the three can achieve a higher predictive value for this disease.

[Key words] Inhibin B; Makorin ring finger protein 3; Fibroblast growth factor receptor 2;Central precocious puberty of girls

中枢性性早熟属小儿内分泌疾病，女童发病率明显高于男童，研究认为，此病的发生可影响着患儿的正常发育[1-2]。因此早期的诊治对此病的治疗和预后具有重要的意义，目前临床上对于此病的預测较为困难，且相关报道较少，因此寻找特异性预测此病的指标具有重要的意义。抑制素B（Inhibin B，INHB）属于卵巢的直接产物，其在围青春期中的水平变化可反映卵泡活性，可用于女性青春期进展的评估[3]。研究显示[4]，下丘脑-垂体-性腺轴活化可促进性早熟的发生，而此轴活化受到多种基因的调控，其中以Makorin环指蛋白3（Makorin ring finger protein 3，MKRN3）研究最为广泛，研究认为此基因与性早熟相关。成纤维生长因子受体2（Fibroblast growth factor receptor 2，FGFR2）与骨骼发育相关，而骨骼发育异常为性早熟的表现之一，推测其可能与性早熟有关[5]。鉴于上述研究背景，在本研究中分析INHB、MKRN3、FGFR2在女童中枢性性早熟中的表达情况，并研究三者对此病的预测价值，以早期预测此病，促进患儿正常发育，现报道如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料

于2018年1月至2021年1月期间选取符合纳入、排除标准的中枢性性早熟女童100例作为中枢性性早熟组、健康体检的健康女童80名作为健康组。两组一般资料比较，差异无统计学意义（P>0.05），具有可比性。本研究所有研究对象家属对相关事项均知情同意，且获得我院医学伦理委员会批准。纳入标准：①中枢性性早熟组均符合《女性性早熟的诊治共识》[6]中对疾病的诊断标准，在8岁前出现第二性征或10岁前出现月经初潮，线性生长加速，骨龄≥实际1岁的骨龄，经影像学检查显示卵巢、子宫形态变化，卵巢容积≥1 mL，可见有多个卵泡直径>4 mm者;②促性腺激素释放激素刺激实验显示黄体生成素反应增强，峰值≥5 IU/L者;③健康组无性早熟特征，卵巢、子宫形态正常，促性腺激素释放激素刺激实验显示黄体生成素<0.1 IU/L者;④两组均自愿参与本研究。中枢性性早熟组排除标准：①其他因素所致的性早熟者;②非外周性性早熟者;③合并其他内分泌疾病者;④合并重要脏器功能不全者;⑤精神障碍者;⑥沟通障碍者。健康组排除标准：①有内分泌遗传代谢性疾病、肾上腺素、垂体等器质性疾病史者;②精神障碍者;③沟通障碍者。

1.2 方法

INHB、MKRN3、FGFR2检测方法：所有研究对象入组次日清晨抽取3 mL空腹静脉血，以离心半径5 cm、转速3000 r/min离心处理10 min，分离上层血清，-80℃保存待检。采用酶联免疫吸附试验法（ELISA）对所有研究对象血清INHB水平进行测定。

所有研究对象入组次日清晨抽取3 mL空腹静脉血，采用实时荧光定量PCR法（RT-PCR）测定MKRN3、FGFR2相对表达量，加入Trizol提取血清总RNA，将RNA反转录后行PCR法测量ABCC4的相对表达量。采用Veriti7500实时荧光定量PCR仪行PCR反应，反应体系：0.4 μL上下游引物、1 μL cDNA模板、10 μL SYB Green，加蒸馏水至20 μL。反应条件：95℃预变性30 s、95℃ 5 s、60℃ 31 s，共进行40个循环。采用2-△△Ct方法计算出需要检测的MKRN3、FGFR2相对表达量，每组数据各测3次，取平均值。MKRN3上游引物序列：5-GTGGGACTTGCTTCATTAT-3，下游引物序列：5-CATTTACTCTTGAGGGTCTTC-3;FGFR2上游引物序列：5-ACAAATGGCGACTTCC-3，下游引物序列：5-TGGGCTTGTCCATCCTGT-3;内参β-actin引物序列：上游：5-CTGGCACCACACCTTCTA-CAATGAGC-3，下游：5-GAGGATCTTCATGAGGT-AGTCAGT-3。

1.3 观察指标

①分析INHB、MKRN3、FGFR2在两组研究对象中的表达差异;②分析INHB、MKRN3、FGFR2在不同中枢性性早熟组疾病类型中的表达差异;③分析INHB、MKRN3、FGFR2之间相关性;④ROC曲线分析INHB、MKRN3、FGFR2对女童中枢性性早熟的预测价值。

1.4 统计学方法

采用SPSS 26.0统计学软件进行数据分析处理。应用Kolmogorov-Smirnov检验数据是否符合正态分布，符合正态分布的计量资料采用均数±标准差（x±s）描述，levene法进行方差齐性检验，三组间比较采用方差齐性检验，两组间比较采用独立样本t检验，不符合正态分布的运用中位数、四分位间距[M（Q1，Q3）]，组间采用Wilcoxon比较。计数资料采用频数和百分比表示，组间比较采用χ2检验，采用Pearson相关性分析INHB、MKRN3、FGFR2之间相关性。ROC曲线分析INHB、MKRN3、FGFR2对女童中枢性性早熟的预测价值。P<0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 两组一般资料比较

两组平均年龄、身高、体重、BMI、卵巢体积、有无家族早熟史等一般资料比较，差异无统计学意义（P>0.05）。与健康组比较，中枢性性早熟组平均骨龄较高，乳房发育年龄较低，差异有统计学意义（P<0.001）。见表1。

2.2 两组INHB、MKRN3、FGFR2表达比较

中枢性性早熟组INHB水平高于健康组，MKRN3、FGFR2相对表达量低于健康组，差异有统计学意义（P<0.001）。见表2。

2.3 不同中枢性性早熟组疾病类型INHB、MKRN3、FGFR2表达比较

进展型中枢性性早熟INHB水平高于缓慢进展型，MKRN3、FGFR2相对表达量低于缓慢进展型，差异有统计学意义（P<0.001）。见表3。

2.4 INHB、MKRN3、FGFR2之間相关性分析

Pearson相关性分析显示，INHB与MKRN3呈负相关（r=-0.420，P<0.001）;INHB与FGFR2呈负相关（r=-0.218，P=0.029）;MKRN3与FGFR2呈正相关（r=0.586，P<0.001）。见图1。

2.5 ROC曲线分析INHB、MKRN3、FGFR2对女童中枢性性早熟的预测价值

与INHB、MKRN3、FGFR2单项预测相比，三项联合对女童中枢性性早熟的预测价值较高，差异有统计学意义（P<0.05）。见表4。

3 讨论

性早熟包括多种类型，其中以中枢性性早熟最为常见，中枢性性早熟缩短了儿童正常的生长年限，且早初潮为女童中枢性性早熟的主要特征表现，此表现的出现在一定程度上影响着患儿的心理和生活[7-9]。目前临床对于女童中枢性性早熟的诊断多以促性腺激素释放激素刺激实验为主，但随着其应用发现此实验诊断价值并不理想，且目前缺乏简便有效的敏感指标，鉴于此，在本研究中分析INHB、MKRN3、FGFR2预测女童中枢性性早熟的价值，以期望造福于更多的患儿。

INHB属转化生长因子β家族，为一种糖蛋白，研究显示，在女性中INHB由卵泡膜细胞、黄体细胞以及卵巢颗粒细胞等所分泌，且其水平变化与卵巢功能变化密切相关[10]。在青春期前，INHB在正常女童血清中无表达或者极低表达，而在进入Tanner Ⅰ～Ⅲ期时其在血清中的表达明显升高，但在Tanner Ⅳ～Ⅴ期时其在血清中的水平降低，提示着其与生长发育相关[11-12]。有学者认为，缓慢进展中枢性性早熟女童血中INHB升高，且与卵泡活性相关。本研究结果发现，INHB在中枢性性早熟中表达水平明显升高，且进展型中枢性性早熟表达水平高于缓慢进展型，此结果提示着，INHB在女童中枢性性早熟中表达升高，且进展型升高加剧，提示着其可能参与此病的发生发展。

研究发现，诱导中枢性性早熟发育相关的下丘脑-垂体-性腺轴活化机制尚不完全明确，此轴活化与基因位点相关，全基因组分析显示，多个位点为发育时间相关，其中包括MKRN3[13-14]。MKRN3属一种无内含子的基因，既往研究显示，其之后在父本等位基因所表达，但近年来有研究发现，其在母本的印迹突变在家族性性早熟中较为常见[15]。MKRN3与卵巢发育、乳房发育相关，其可经锌指结构与RNA相结合，调控卵巢和乳房发育或雌激素相关受体RNA而发挥其抑制性腺轴活化的作用。目前已有研究发现，MKRN3在性早熟中表达降低[16-17]。鉴于上述背景，在本研究中进一步验证，结果显示，与健康女童比较，中枢性性早熟女童血中MKRN3表达降低，且与疾病类型相关，进展型降低更为显著，此结果提示着，MKRN3可能参与女童中枢性性早熟的发生进展，本研究推测其降低可能与下丘脑-垂体-性腺轴活化相关。

另外在性早熟发生过程中，儿童机体内的激素分泌紊乱，骨骼发育异常，进而影响正常生长发育[18]。FGFR2属于络氨酸激酶受体家族，研究显示，FGFR2可与FGF发生特异性结合作用激活胞内信号，而发挥其作用，包括骨骼发育、颅骨发育等，且可负性调节软骨发育，参与人体骨骼发育的过程[19]。目前临床上已有研究显示[20]，FGFR2表达异常与性早熟相关，其在一方面经作用于骨骼发育影响患儿生长发育，还与机体激素水平相关，可能经过与激素的相互作用影响骨骼发育，最终影响机体正常的生长发育。本研究发现，FGFR2在女童中枢性性成熟血中表达异常，提示其可能与女童中枢性性成熟相关，分析其原因可能与FGFR2异常表达与激素共同作用，导致骨骼发育异常，进而影响患儿生长发育和性成熟相关。

本研究分析三者之间的相关性发现，三者线性相关，分析其原因可能与三者均经激素轴发挥作用相关，但本研究并未进一步分析三者共同作用的具体机制，且本研究所纳入的样本量较少，因此上述研究结果还需后续研究进一步分析验证。另外本研究进一步采用ROC曲线分析三者对此病的预测价值，结果显示，三项联合对此病的预测价值较高，提示临床可根据三者水平高低早期预测此病，并尽早采取针对性措施干预，以促进患儿正常生长发育。

综上所述，本研究显示，女童中枢性性早熟中INHB表达升高，MKRN3、FGFR2表达降低，且三者线性相关，三者联合可用于此病的预测。

[参考文献]

[1] Soriano-Guillén L，Argente J. Central precocious puberty，functional and tumor-related[J]. Best Pract Res Clin Endocrinol Metab，2019，33（3）：101 262.

[2] Eugster EA. Treatment of central precocious puberty[J]. J Endocr Soc，2019，3（5）：965-972.

[3] Corvest V，Lemaire P，Brailly-Tabard S，et al. Puberty and inhibin B in 35 adolescents with pituitary stalk interruption syndrome[J]. Front Pediatr，2020，8（1）：304.

[4] 陈占峰，赵培伟，蔡晓楠，等. MKRN3基因rs2239669多态性与中枢性性早熟易感性的相关性研究[J]. 临床儿科杂志，2018，36（5）：372-375，380.

[5] 陈虹，罗丽，周旭. 性早熟儿童血清FGFR2和FGFR3表达与骨龄指数的相关性[J].中国妇幼保健，2021，36（7）：1539-1542.

[6] 中华预防医学会妇女保健分会青春期学组. 女性性早熟的诊治共识[J]. 中国妇幼健康研究，2018，29（2）：135-138.

[7] Li L，Gong C. Central precocious puberty as a prelude of gonad dysplasia[J]. Pediatr Investig，2019，3（1）：50-54.

[8] Heras V，Castellano JM，Fernandois D，et al. Central ceramide signaling mediates obesity-induced precocious puberty[J]. Cell Metab，2020，32（6）：951-966，e8.

[9] De Sanctis V，Soliman AT，Di Maio S，et al. Long-term effects and significant Adverse Drug Reactions （ADRs） associated with the use of Gonadotropin-Releasing Hormone analogs （GnRHa） for central precocious puberty：A brief review of literature[J]. Acta Biomed，2019，90（3）：345-359.

[10] 孙娜，高树苓，安朗，等. 卵巢早衰患者血清抑制素B、抗苗勒管激素及性激素水平与子宫动脉血流参数的相关性研究[J]. 现代生物医学进展，2021，21（5）：992-995.

[11] 牛曉兵，唐静，王恒兵，等. 抑制素B在青春期前精索静脉曲张患者睾丸功能评价中的作用[J]. 中华男科学杂志，2018，24（7）：618-621.

[12] 周学红，张华，张春涛. 血清抗苗勒氏管激素和抑制素B预测女童缓慢进展中枢性性早熟的临床价值[J]. 中国性科学，2020，29（10）：89-93.

[13] 刘靓，王婷. 中枢性性早熟与KISS1、MKRN3系统的关系研究进展[J]. 天津医科大学学报，2018，24（3）：274-276，封3.

[14] 石玉兰，贵子豪，郭冰冰，等. MKRN3基因与儿童中枢性性早熟[J]. 中南医学科学杂志，2019，47（6）：566-570.

[15] 许天友，留佩宁，徐仁福，等. 人胰岛素生长因子BP3、makorin环指蛋白3在特发性中枢性性早熟女童诊断中的应用价值[J]. 中国卫生检验杂志，2021，31（1）：86-89，97.

[16] 唐家彦，黄娟，黄连红，等. 血清 makorin 环指蛋白3基因在中枢性性早熟女童诊断中的意义[J]. 广东医学，2016，37（11）：1648-1650.

[17] Meader BN，Albano A，Sekizkardes H，et al. Heterozygous deletions in MKRN3 cause central precocious puberty without prader-willi syndrome[J]. J Clin Endocrinol Metab， 2020，105（8）：2732-2739.

[18] 戴艺，黄雪艳，覃佩云，等. 7～9岁特发性中枢性性早熟女童的骨骼营养情况[J]. 广西医学，2020，42（8）：954-956.

[19] McKenzie J，Smith C，Karuppaiah K，et al. Osteocyte death and bone overgrowth in mice lacking fibroblast growth factor receptors 1 and 2 in mature osteoblasts and osteocytes[J]. J Bone Miner Res，2019，34（9）：1660-1675.

[20] 章建伟，张涛，吴满武. 生长激素改善GnRHa干预后性早熟大鼠生长减速的作用机制[J]. 浙江临床医学，2021，23（2）：159-161.

（收稿日期：2021-06-28）