产妇宁颗粒质量标准的研究

2020-12-21袁绍莉徐宁宁

安徽化工 2020年6期

关键词：甲苷批号黄芪

袁绍莉，徐宁宁

（徐州生物工程职业技术学院，江苏徐州 221006）

有关文献[1-5]利用HPLC-UV 联用测定黄芪甲苷含量。经紫外扫描，黄芪甲苷在203 nm 波长处有最大吸收，但处于末端，吸收值较弱，检测结果不明显，易受溶剂及杂质因素影响。本研究拟用HPLC-ELSD 联用的方法测定黄芪甲苷的含量。

1 仪器与试剂

高效液相色谱仪，Agilent1260，C18-ODS（4.5 μm）色谱柱。

乙腈、甲醇，色谱纯；水为重蒸馏水；黄芪甲苷，中国药品生物制品检定所；产妇宁颗粒和不含黄芪的阴性对照品，徐州生物工程职业技术学院。

2 实验部分

2.1 色谱条件的选择

（1）色谱柱的选择

C18-ODS 反相柱，填充剂为十八烷基硅烷键合硅胶。

（2）流动相的选择

①甲醇-水（75∶25）时，出峰时间4 min，峰形分离不好；②乙腈-水（25∶75）时，出峰时间过长，相对浪费时间；③乙腈-水（32∶68）时，分离度良好，峰形对称，拖尾因子在规定范围内，出峰时间约在16 min。理论板数以黄芪甲苷峰计不低于4 000，积分定量准确。所以，确定了乙腈-水（32∶68）的流动相较为适宜。

（3）检测器的选择[6]

蒸发光散射检测器具有专属性强，灵敏度高，不受杂质成份干扰等优点，并且在文献中有较成熟的测定方法。所以，确定采用高效液相色谱法-蒸发光散射检测器测定黄芪甲苷的含量。

（4）供试品溶液的制备

精密量取本品1 g，用水饱和的正丁醇振摇提取3次，每次 20 mL，合并正丁醇液，用 1% 氢氧化钠溶液20 mL 洗涤，弃去氢氧化钠液，继续用正丁醇饱和的水洗涤至中性，弃去水液，正丁醇液蒸干，残渣加甲醇溶解并转移至5 mL 量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，即得。

（5）对照品溶液的制备

取黄芪甲苷对照品适量，精密称定，加甲醇制成每1 mL 含 0.24 mg 的溶液，即得。

（6）阴性对照溶液的制备

取产妇宁颗粒阴性样品（按本制剂处方比例及制备工艺，不加入黄芩，制得不含黄芩的空白样品），按供试品溶液的制备方法制成阴性样品溶液。

2.2 方法学考查

2.2.1专属性试验（图1）

分别精密吸取黄芪甲苷对照品溶液、供试品溶液和阴性对照溶液各10 μL，分别进样测定，可见：黄芪甲苷峰位在16 min左右，供试品溶液有同样的吸收峰，而阴性对照溶液在相应位置无吸收，不影响黄芪甲苷定量。

图1 高效液相色谱图谱

标准曲线的制备：取11.707 mg的黄芪甲苷，加甲醇制成每1 mL 含 0.468 3 mg 的对照品溶液，分别精密吸取上述对照品溶液2 μL、6 μL、10 μL、14 μL、20 μL 注入液相色谱仪，按上述色谱条件测定，以峰面积对数为纵坐标，黄芪甲苷进样量对数为横坐标，绘制标准曲线，如图2。计算回归方程为 Y = 1.650 7 X+5.405，相关系数R2=0.999 9，表明黄芪甲苷进样量在0.937～9.366 μg之间两者线性关系良好，见图2和表1。

图2 标准曲线

表1 线性试验

2.2.2精密度试验

取0.252 9 mg/mL 的黄芪甲苷对照品溶液，精密吸取该对照品溶液10 μL注入液相色谱仪，连续进样6次，分别测定其峰面积，结果见表2。

表2 精密度试验

结果表明，系统精密度良好，符合规定。

2.2.3重复性考查

精密称取同批号样品（200301）共6份，分别按供试品溶液制备方法制备成供试液。按上述色谱条件进样测定，重复性良好，详见表3。

表3 重复性实验（批号：200301）

稳定性试验：按供试品溶液制备方法制得供试品溶液，精密吸取供试品溶液20 μL，注入液相色谱仪，分别于供试品放置 0 h、4 h、8 h、12 h、16 h、20 h、24 h 后测定一次。结果表明，供试溶液至少在 24 h 内稳定，见表4。

2.2.4加样回收率试验

釆用加样回收试验方法，取已知黄芪甲苷含量的样品（批号：200301，含量 1.107 mg/g），取约0.5 g，精密测定，分别加入取样量中黄芪甲苷含量的50%、100%、150%的对照品，并平行 3 份样品，按供试品溶液制备方法处理，制得供试品溶液，依法测定，计算回收率，结果见表5，试验方法的回收率高，符合含量测定要求。