李杰 刘保国 宁春妹 杭柏林*

（1，河南省新乡市畜产品质量监测检验中心 453003；2，河南科技学院动物科技学院 453003）

新城疫（Newcastle Disease）是鸡和鸽常见的一种病毒性传染病，发病率和死亡率高，是世界动物卫生组织（OIE）规定的动物A 类疫病，也是我国的I 类动物疫病[1]。常用疫苗免疫进行预防新城疫的发生。新城疫病毒抗体的检测常采用血凝抑制试验进行检测，测定的抗体常称为血凝抑制（HI）抗体。当鸽体内新城疫病毒HI 抗体效价高，可有效降低鸽新城疫的发生。鸽群新城疫病毒HI 抗体的合格率高可有效保护鸽群不受鸽新城疫的影响。疫苗免疫后，检测新城疫病毒HI 抗体效价时常常发现不同个体之间的HI 抗体效价不整齐，表现出一定的离散性[2,3]。为了了解鸽新城疫病毒HI 抗体效价合格率与离散度之间的相关性，本研究检测了免疫鸽血清中新城疫病毒的HI 抗体，分析了HI 抗体效价的合格率和离散度，借助软件分析了合格率和离散度之间的相关性，希望为鸽新城疫的防控提供一些帮助。

1 材料与方法

1.1 试验材料

1.1.1 试剂

柠檬酸钠（分析纯）和氯化钠（分析纯）购自天津市天力化学试剂有限公司，健康公鸡购自新乡市洪门镇中心菜市场，碘伏购自山东利尔康医疗科技股份有限公司，乙醇（75%）购自新乡市三伟消毒剂有限公司，鸡新城疫活疫苗（La Sota 株）购自哈药集团生物疫苗有限公司。其他为实验室常用试剂与耗材。

1.1.2 仪器

离心机（型号为TG16-WS）购自湘仪离心机仪器有限公司，生化培养箱（型号为GNP-9270）购自上海精宏实验设备有限公司）购自，电子天平（型号为 LT202B）购自常熟市天量仪器有限责任公司，移液器（Research plus）购自德国 Eppendorf 股份有限公司，高压蒸汽灭菌器（型号为MJ-78A）购自施都凯仪器设备（上海）有限公司，冰箱（型号为 BCD-325WKY1DPM）购自广东容声电器股份有限公司。

1.2 试验方法

1.2.1 血液样本的采集

199 份鸽血液样本采集自鹤壁市某鸽场的21 栋鸽舍，样本采集鸽均曾用新城疫病毒疫苗免疫过。采集时用碘伏擦拭，再用75%乙醇脱碘，然后用一次性无菌注射器从鸽翅部静脉采集0.5～1ml 血液，4℃保存 2～4h。

1.2.2 血清样本的制备

采集的血液于4000 转/min 离心10min，将上清转移至另一个无菌离心管中，-20℃保存。

1.2.3 鸡红细胞悬液的制备

按照鸽子血液样本的采集方法从鸡翅静脉采集血液，用3.8%柠檬酸钠抗凝，按照文献[4]的方法制备1%鸡红细胞悬wHI 抗体效价的测定，按照文献[4]方法进行制备。当HI 抗体效价≥5log2 时，认为个体的免疫合格，HI 抗体效价＜5log2 时，认为个体的免疫不合格；当HI 抗体效价≥7log2 时，群体免疫合格[2]。抗体的离散度用变异系数来表示，变异系数=（标准差/平均值）×100%，抗体的离散度≤10%为佳[2]。

1.2.5 相关性分析

鸽血清抗体效价合格率和离散度之间的非参数相关性（Spearman）利用GraphPad Prism 软件中的统计工具进行分析，p 值为两尾检验，置信区间为95%；同时利用该软件中的线性回归分析绘制回归线，置信区间为95%。

2 结果与分析

2.1 鸽新城疫病毒HI 抗体效价的合格率与离散度

抽检鸽的新城疫病毒HI 抗体检测结果如附表所示。从附表中可以看出，新城疫病毒HI 抗体效价合格率最高为100%，共有8 栋鸽舍，占采样总栋数的38.09%；合格率低于70%的鸽舍有8 栋，占采样总栋数的38.09%；合格率最低为20%，有2栋鸽舍，占采样总栋数的 9.52%；HI 抗体效价平均值大于7log2 的有7 栋鸽舍，群体免疫合格率为33.33%。从抗体离散度来看，所抽检的21 栋鸽舍鸽新城疫病毒HI 抗体的离散度均大于10%，均不是很好，仅7 栋鸽舍鸽新城疫病毒HI 抗体的离散度小于20%。结果说明，部分鸽舍中某些鸽的新城疫病毒免疫发生了失败，部分鸽舍可能发生新城疫病毒野毒的感染。因此，需要进行新城疫病毒的紧急免疫和再次加强免疫。

2.2 鸽新城疫病毒HI 抗体效价合格率与离散度的相关性

鸽新城疫病毒HI 抗体效价合格率与离散度之间的相关性如附图所示。从附图中可以看出，鸽新城疫病毒HI 抗体效价的合格率与离散度之间的相关系数r=-0.99136，P＜0.0001，呈极显著性负相关。

3 讨论

随着疫苗的应用，禽群爆发典型新城疫的几率大大降低，但免疫禽群常常出现非典型新城疫。禽群中长期存在新城疫病毒强毒是免疫禽群出现非典型新城疫的重要原因之一。当免疫禽只的抗体效价下降，导致禽群群体免疫水平下降，不能抵抗强毒的攻击，禽群将可能发生新城疫。因此，需要经常检测免疫禽只的抗体效价，以确定再次免疫的时间。

免疫后新城疫病毒HI 抗体效价是否合格的判定主要根据抗体效价的保护临界值，高于临界值时认为是合格的，低于临界值时认为是不合格。但有人认为新城疫的保护性HI 抗体效价的临界值为4log2[5]，但也有参照 《高致病性禽流感诊断技术》（GB/T 16550-2008）认为 5log2 是保护临界值[2]。本着严格的要求，在本研究中以5log2 为合格的判定临界值。一般认为群体中有70%～80%的动物有抵抗力，不会发生大规模的爆发性流行[1]。在本研究中，有1/3 鸽舍的抗体合格率低于70%，同时个体间抗体离散度高。这可能与免疫方法有关。经询问得知，鸽场主要采用饮水方法进行新城疫疫苗的免疫。而不同鸽的饮水量不同，导致摄入的疫苗量不同，最终机体产生的抗体量也不同，在鸽舍间出现出不同的抗体效价合格率和抗体效价离散度。本研究分析发现，鸽新城疫病毒HI 抗体效价的合格率与离散度之间呈显著的负相关。这提示，正确免疫，确保每羽鸽接种相同剂量的疫苗，可以降低抗体效价的离散度，同时提高抗体效价的合格率。因此，我们建议鸽场进行免疫时应严格按照疫苗使用说明书进行每羽鸽的皮下注射灭活苗或点眼滴鼻弱毒苗，同时加强抗体效价监测，及时加强免疫，以确保免疫效果。