佟桂芝 韩永胜 李信涛 宋斌

(1，黑龙江省农业科学院畜牧兽医分院 161005；2，吉林省农科院畜牧分院 130000)

选用良种母牛通过激素的处理，使其卵巢上有多个卵泡生成（超数排卵），用优秀的种公牛精液进行人工授精，然后将受精后的早期胚胎从子宫里取出，分别移植到多头生理状态相同的仅有一般生产性能的母牛子宫内让其怀孕，最后产出多头优良后代，这就是通常所说的 “借腹怀胎”。充分发挥优良母牛的繁殖潜力；缩短时代间隔，及早进行后裔测定；诱发肉牛产双胎；代替种畜的引进；保存品种资源；作为研究手段；通过胚胎移植进行奶牛品种改良；利用胚胎移植进行纯种奶牛和良种肉牛扩繁。

1 供 (受) 体的选择

1.1 供体的选择

供体牛指的是能提供胚胎的母牛。胚胎数量与质量是由供体牛决定。供体应选择健康强壮，性周期正常的个体。在对供体选择时，首先要考虑其能否提供优质的卵母细胞，这样才能获得优质的早期胚胎，提高母系遗传物质与受体之间建立信号通路的成功率，进而提高后期着床率；青年牛的超排效果好于成母牛。

1.2 受体牛的选择

受体牛指的是接受胚胎的母牛。影响胚胎移植效果的因素包括受体年龄、同期发情处理方法、营养状况、黄体酮水平及黄体质量等。排除有遗传疾病牛；淘汰有生殖疾病的受体母牛，如子宫内膜炎、卵巢囊肿、子宫颈畸形等；淘汰过胖或过瘦的牛。购买的受体牛做进一步兽医检查，净化子宫，加强饲养管理，检查生理状况，受体牛同期化处理。

2 同期发情

（1）一次前列腺素法：对处于发情周期第10 天左右的供、受体牛一次肌肉注射氯前列烯醇 2～4ml（0.32～0.64mg，按牛体重大小）诱导发情。

（2）二次前列腺素法：注射一次氯前列烯醇 2～4ml 后 11d左右再次肌注氯前列烯醇2～4m1。

（3）阴道栓加前列腺素（CIDR+PG）法：在任意 1d 放入含有黄体酮的阴道栓，10d 左右取出阴道栓，同时肌注4ml 氯前列烯醇。

3 超数排卵

3.1 影响超数排卵的效果的因素

（1）排卵季节，最好选择在秋冬季节。

（2）选择 2～6 胎的供体母牛。

（3）一般最合适的时期在发情期后的第10～12 天。

（4）正确使用生殖激素处理超排母牛。

（5）进行 2 次输精，每次使用 2～3 剂的精子。在超速排卵时要严格按照正规规则操作。

3.2 人工授精

（1）动作温和，不要过于用力。

（2）输精过程可分为两步。先将输精枪送到子宫颈口，第二步将子宫颈套在输精枪上。

（3）通过子宫颈后将精液释放在子宫体内。

（4）操作过程中不要着急。

4 胚胎采集

冲胚一般在输精后6～7d 进行。

（1）牛麻醉要合适，用2%普鲁卡因或利多卡因 5ml，在荐椎与第一尾椎结合处或第一尾椎与第二尾椎结合处施行硬膜外腔麻醉，以防止子宫颈紧缩及母牛努责不安。

（2）洗净外阴部并用酒精消毒。

（3）用扩张棒扩张子宫颈，用黏液抽吸棒抽吸子宫颈黏液。

（4）通过直肠把握法，将冲胚管的前端送达子宫角前1/3处。向子宫角注入冲胚液，每次 20～50ml，冲洗 5～6 次，冲胚液收集在集卵杯内。为充分回收冲胚液，在最后1～2 次时可在直肠内轻轻按摩子宫角。最后一次注入冲胚液的同时注入适量空气有利于液体排空。

（5）两侧子宫角冲完后将空气放掉，把冲卵管抽回至子宫体，直接从冲卵管灌注稀释好的抗生素和前列腺素，拔出冲胚管。

5 胚胎捡出

将培养皿放置在体视显微镜下，用玻璃棒清除胚胎外围的黏液杂质，将胚胎移至另一个培养皿内保存。用吸胚管先吸入少许清洗液，再吸入胚胎，在培养滴的不同位置冲洗胚胎3～5次，对检出的胚胎按级别和标准加以评级。方法是将培养皿静置5～10min，待胚胎沉底后，在实体显微镜下先用低倍镜下检查胚胎数量，再用高倍镜观察胚胎质量。最后装管进行鲜胚移植或冷冻保存。

6 胚胎鉴定

正常发育胚胎透明带完整，形态规则，色调均匀一致，透明度适中.根据胚胎发育阶段及发育状况划分，胚胎质量分为A、B、C 和 D4 个等级。只有 A、B 级胚胎可用于胚胎切割。

7 胚胎分割

牛胚胎分割技术是在牛胚胎移植技术的基础上发展起来的，牛胚胎分割技术是增加胚胎数目和生产同卵双胎或多胎、获得更多牛犊、扩大优良畜种繁殖后代缩短育种间隔的有效方法。该技术对牛育种、选种及其遗传疾病的早期诊断均具有十分重要的意义。奶牛胚胎移植时，为了增加奶牛受孕率，通常需要移植两枚胚胎，但如果移植的两枚胚胎性别不同，可能出现不育母犊的情况，造成一定损失。

（1）不同发育阶段的胚胎分割方法不相同。处于2 一细胞到8 一细胞期胚胎，采用机械法和酶辅助机械法卵裂球分离方式。分割桑葚胚和囊胚，利用玻璃针的分割法，将胚胎内细胞团均匀分割。可利用80 或者100 倍的显微镜采用徒手分割法。

（2）分割后的胚胎经过体外培养或体内培养，细胞数增加后，再移植可以提高妊娠率。

8 胚胎移植

移植胚胎一般在发情后第6～7 天。移植前用2%普鲁卡因或利多卡因5ml，在荐椎与第一尾椎结合处或第一尾椎与第二尾椎结合处施行硬膜外腔麻醉，防止子宫颈紧缩及母牛努责不安。将装有胚胎的吸管装入移植枪内，用直肠把握法通过子宫颈插入子宫角深部，注入胚胎。应将胚胎移植到有黄体一侧子宫角的上1/3～1/2 处，如有可能越深越好。要求操作人员在短时间内将胚胎移植到位，移植冻胚原则上不超过10min。

胚胎分割移植技术是继胚胎移植后的一次技术创新，它提高了良种母畜的繁殖率，缩短了育种工作中的世代间隔。加速了良种化进程，具有巨大的发展前景。