勾新磊，徐双双，赵 婷，张 梅，刘伟丽，高 峡，赵新颖，胡光辉

(北京市理化分析测试中心，有机材料检测技术与质量评价北京市重点实验室， 北京 100089)

硫酸氢氯吡格雷是一种具有抑制血小板聚集作用的药物，临床上主要用于预防或者治疗中风及心肌梗死、外周动脉疾病等心血管系统疾病[1-3]。硫酸氢氯吡格雷的合成方法中会使用到对甲苯磺酰氯，若没有在工艺中完全除去，会与后面使用的甲醇或乙醇发生反应，生成对甲苯磺酸甲酯和对甲苯磺酸乙酯[4]。对甲苯磺酸酯类物质均具有潜在的遗传毒性，与人体的DNA有直接作用，导致DNA的损伤，会产生致癌、致畸或致突变等后果，因此有必要建立硫酸氢氯吡格雷中对甲苯磺酸酯类物质的检测方法。

目前报道的检测方法主要有液相色谱法，气相色谱质谱联用法，液相色谱质谱联用法等[5-8]。液相色谱质谱联用技术具有分析速度快、灵敏度高、结果准确可靠的特点，能够满足遗传毒性杂质的检测[9]。本文建立了硫酸氢氯吡格雷中对甲苯磺酸甲酯和对甲苯磺酸乙酯的超高效液相色谱-串联质谱法(UPLC-MS/MS)检测方法，为硫酸氢氯吡格雷在生产监控过程中提供技术支持和数据支撑。

1 仪器与耗材

超高效液相色谱串联质谱仪，美国沃特世公司； Milli-Q 超纯水器，美国Millipore公司； XPE105电子天平，瑞士梅特勒托利多公司；ACQUITY UPLC BEH C18色谱柱(100 mm×2.1 mm，1.7 μm)，沃特世公司。

对甲苯磺酸甲酯(纯度>99.7%)、对甲苯磺酸乙酯(纯度>99.8%)，均购于Alfa Aesar；乙腈、甲酸均为色谱级，默克公司；硫酸氢氯吡格雷原料药。

2 方法与结果

2.1 色谱质谱条件

2.1.1 质谱条件

采用电喷雾正离子化(ESI+)测定2个遗传毒性杂质，优化后的参数如下：毛细管电压3.0 kV，离子源温度150 ℃，脱溶剂气温度350 ℃，脱溶剂气流速650 L/h，锥孔气流速20 L/h，萃取电压：5.0 V。多反应监测(MRM)模式检测，实验参数见表1。

表1 杂质的质谱条件

2.1.2 色谱条件

液相色谱柱：Waters ACQUITY UPLC BEH C18(100 mm×2.1 mm，1.7 μm)；0.1%甲酸水溶液为流动相A，乙腈溶液为流动相B；梯度洗脱(0～4 min，20%B → 80% B；4～6 min，80% B； 6～6.5 min，80%B → 20% B；6.5～8 min，20% B)；流速0.2 mL/min；柱温35 ℃；进样体积5 μL。总离子流图见图1。

图1 对甲苯磺酸甲酯(A)和对甲苯磺酸乙酯(B) 对照品溶液总离子流图

2.2 溶液配制

2.2.1 杂质对照溶液配制

分别准确称取适量上述2种杂质标准品，乙腈溶解定容，制得质量浓度均为1000 mg/L 的储备液。准确移取各标准储备液，混于100 mL 容量瓶中，用乙腈定容，配制成目标物浓度为1 mg/L 混合对照品储备液。所有标准溶液在4 ℃下保存。

2.2.2 供试品溶液

取硫酸氢氯吡格雷原料药约100 mg，置于10 mL 量瓶中，加入乙腈10 mL溶解，并稀释至刻度，摇匀均匀，作为供试品溶液。

2.3 专属性试验

在所建立的色谱和质谱条件下，2种遗传毒性杂质的保留时间分别为4.20和4.55 min，2种物质完全分离。供试品溶液、空白稀释剂和杂质对照溶液中各杂质的检查无干扰。

2.4 检测限和定量限

取2种杂质对照品储备液，稀释至各杂质峰高约为基线噪音的10 倍，测得对甲苯磺酸甲酯和对甲苯磺酸乙酯的定量限浓度均为5.0 ng·mL-1。连续进样6 次，对甲苯磺酸甲酯和对甲苯磺酸乙酯峰面积的RSD 分别为2.4%和1.8%，表明定量限具有一定的精密度。

取定量限溶液，稀释后进样测定至各杂质峰高约为基线噪音的3 倍，测得对甲苯磺酸甲酯和对甲苯磺酸乙酯的检测限浓度为1.667 ng·mL-1。

2.5 标准曲线

精密量取“2.2.1”项下杂质混合溶液适量，稀释后制成各杂质的质量浓度均分别约为20、50、100和200 ng·mL-1的系列溶液，与定量限溶液参照“2.1”项下条件进样测定，记录色谱图。以质量浓度X(ng·mL-1)为横坐标，主峰面积Y 为纵坐标，进行线性回归。对甲苯磺酸甲酯线性回归方程分别为Y=72.6X+68.4，r=0.997；对甲苯磺酸甲酯线性回归方程分别为Y=101.5X+83.1，r=0.998。结果表明，各杂质线性关系良好。

2.6 回收率试验

取硫酸氢氯吡格雷原料药样品各9份，每份约100 mg，分别置于10mL容量瓶中，精密加入杂质混合溶液，稀释至刻度，配置80 ng·mL-1、100 ng·mL-1、120 ng·mL-13个浓度的供试品溶液各3份，进样分析，根据“2.5”项下线性方程计算，对甲苯磺酸甲酯的平均回收率分别为94.1%～100.5%，RSD分别为1.7%～3.7%，对甲苯磺酸乙酯的平均回收率分别为96.9%～105.3%，RSD分别为2.1%～4.4%，所以本方法回收率良好。

2.7 进样精密度和重复性试验

取“2.2.1”项下杂质对照溶液，连续进样6 次，计算得对甲苯磺酸甲酯和对甲苯磺酸乙酯峰面积的RSD分别为1.7%、1.9%，表明进样精密度良好。

取硫酸氢氯吡格雷原料药样品适量，按“2.2.2”项下方法平行制备6 份供试品溶液，样品均未检出杂质；另配制含杂质均约为100 ng·mL-1的供试品溶液6 份，进样测定，计算得对甲苯磺酸甲酯和对甲苯磺酸乙酯峰面积的RSD分别为2.1%和1.8%，表明方法重复性良好。

2.8 样品检测

取3 批硫酸氢氯吡格雷原料药样品，按外标法计算硫酸氢氯吡格雷中杂质的含量。结果显示，3 批样品中均未检出对甲苯磺酸甲酯和对甲苯磺酸乙酯。

3 结 论

本方法经方法学试验验证，方法专属强，灵敏度高，能够满足硫酸氢氯吡格雷中的对甲苯磺酸酯类遗传杂质测定要求，可作为硫酸氢氯吡格雷遗传毒性杂质的质量控制方法。