周兴卓，刘洪玲，丁媛媛

(青岛大学附属医院，山东 青岛 266000)

两头尖，又名竹节香附，系毛茛科银莲花属植物多被银莲花的干燥根茎。多夏季采挖，除去须根，洗净，干燥。辛，热，有毒[1]。具有祛风湿，消痈肿之功效[2]，有抗肿瘤、抗惊厥、抗炎等作用[3-5]，主要含有三萜皂苷、挥发油等成分，其中竹节香附素A是发挥抗肿瘤活性的主要成分[6-9]。

《中国药典》(2015版)中记载两头尖药材具有一定的毒性，每次用量为1～3 g。据报道[10]，小鼠灌胃毒性实验表明，两头尖水提物LD50为104.50 g/kg，按照中药毒性分级，两头尖药材毒性介于“中毒”和“小毒”之间。鉴于有毒中药经过合理炮制后可降低毒性，提高药用的安全性。本文以竹节香附素A为测定成分，建立两头尖药材中竹节香附素A的含量测定方法，并采取酒制、盐制、醋制等不同方法对两头尖药材进行炮制，比较炮制前后竹节香附素A含量的变化，为后续降低两头尖药材毒性，提高药用安全的研究提供依据。

1 仪器与试药

1.1 仪 器

Agilent液相色谱仪；CPA225D型电子天平；KQ-500DE型超声波清洗机。

1.2 试 药

竹节香附素A(批号20162416)对照品，两头尖药材(批号20130710)；炮制品由实验室自制。

2 方法与结果

2.1 色谱条件

以Hanbon-C18(4.6 mm×250 mm，5 μm)为色谱柱，以206 nm为检测波长，流速1.0 mL·min-1，柱温30 ℃，流动相为乙腈-0.1%的甲酸水(53:47)溶液，进行等度洗脱，进样量均为10 μL。结果见图1和图2。

图1 高校液相色谱图(1-竹节香附素A)

图2 不同炮制品HPLC色谱图

2.2 溶液的制备

2.2.1 对照品的制备

精密称取5.12 mg对照品竹节香附素A，置于5 mL容量瓶中，加入甲醇，定容至刻度，摇匀，得1.024 mg·mL-1的对照品溶液。

2.2.2 供试品的制备

取两头尖及其不同炮制品药材，粉碎。精密称取2.0 g两头尖及其不同炮制品药材，分别置于100 mL的锥形瓶中，分别加入70%的乙醇溶液50 mL，超声提取30 min后过滤，蒸干，残渣加甲醇溶解，定容至10 mL，即得供试品溶液。

2.3 方法学考察

2.3.1 线性关系

精密吸取0.25、0.5、1.0、2.5、5.0、10 mL的“2.2.1”项下对照品溶液，分别置于10 mL的容量瓶中，用甲醇定容至10 mL，即得不同浓度的对照品溶液。再按“2.1”项色谱条件吸取10 μL进行进样分析，以峰面积Y对进样浓度X进行回归方程计算，结果竹节香附素A在质量浓度为25.60～1024 μg·mL-1内与峰面积呈良好的线性关系：Y=336.07X-10.85，r=0.9998。

2.3.2 精密度试验

取“2.2.1”项下溶液，按“2.1”项下色谱条件连续进样6次，测定峰面积。结果峰面积RSD为0.85%，表明仪器精密度良好。

2.3.3 重复性试验

按“2.2.1”项下方法制备6份平行供试品，按“2.1”项下色谱条件测定，测定峰面积。结果峰面积RSD为2.08%，表明方法重复性较好。

2.3.4 稳定性试验

取供试品溶液分别于0、2、4、6、8、12、24 h下进行测定，结果峰面积值RSD=1.94%。表明溶液在24 h内稳定。

2.3.5 加样回收率试验

精密称取1.0 g两头尖药材，6份，按1:1的比例加入对照品，按“2.2.1”项进行测定，计算回收率。结果见表1。

表1 加样回收实验(n=6)

2.3.6 样品含量测定

按“2.2.1”项下方法制备两头尖及其不同炮制品的供试品溶液，每批均平行制备3份，按“2.1”项下色谱条件对其进行含量测定，结果见表2。

表2 样品的含量测定(n=3)

3 结 论

两头尖有效成分竹节香附素A的含量随炮制而变，其中酒制品和醋制品中竹节香附素A的含量明显升高，由两头尖原药材的0.223%升至酒制品的0.349%和醋制品的0.657%。而炒黄品中竹节香附素A的含量则略有降低，由0.223%降至0.139%。虽然经过不同炮制，毒性降低了，但其中含有的有效成分含量也会发生变化，不同的炮制方法其所含有的成分不尽相同，其临床配伍使用也有所差异。本实验通过建立简便的竹节香附素A含量测定方法，比较炮制前后两头尖的竹节香附素A含量差异，为后续加选择使用两头尖药材提供较好选择依据。