覃 亮，彭梅妃，吴坚毅，张清杰，冯 娟

(1 肇庆学院食品与制药工程学院，广东 肇庆 526061；2 茂名市食品药品检验所，广东 茂名 525000；

鼻通丸，由苍耳子、辛夷、白芷、鹅不食草、薄荷、黄芩、甘草七味中药加工制成。清风热，解热毒，通鼻窍之功效[1]。本品主要用于外感风寒而引起的风寒风热、感冒，鼻塞流涕，头痛流泪以及慢性鼻炎[2]。方中黄芩虽为臣药，但其药理作用非常重要，药典标准没有黄芩的定量指标.本方法参照《中国药典》2010年版一部[3]，对鼻通丸中黄芩苷进行含量测定。为了使其内在的质量得到更好地控制，本试验采取高效液相色谱法对本品中黄芩的有效成分黄芩苷的含量进行了研究和分析，以更好地控制产品质量。

1 仪器与试药

1.1 仪 器

LC-20AT高效液相色谱仪，日本岛津司；BT125D电子天平(十万分之一)，瑞士梅特勒-托利多公司；KQ-500DA数控超声波清洗器，昆明市超声仪有限公司；UV-2450紫外分光光度计，日本岛津；HY-5回旋式振荡器，上海一恒科学仪器有限公司；HH-6数显恒温水浴锅，常州澳华仪器有限公司；UPW-20NE超纯水纯水器，沃特尔有限公司。

1.2 试 剂

鼻通丸，北京同仁堂科技发展股份有限公司制药厂；黄芩苷对照品，中国药品生物制品鉴定所；HPLC所用试剂为色谱纯，其他试剂均为分析纯。

2 方法与结果

2.1 溶液制备

2.1.1 对照品溶液的制备

精密称定含量为93.3%的黄芩苷对照品6.11 mg，置于200 mL的容量瓶中，加入70%的乙醇适量，使其溶解，并稀释至刻度，制成每1 mL中含有30.55 μg黄芩苷的溶液，摇匀，用0.45 μm滤头滤过，作为对照品溶液。

2.1.2 供试品溶液的制备

取本品大蜜丸适量，约1.0 g，剪碎，精密称定，置于100 mL含塞锥形瓶中，精密加入70%乙醇90 mL，密塞，称定整体重量，进行超声处理(功率250 W，频率40 kHz)，经过30 min处理后，放置回旋式振荡器上振荡(使冷却，振摇使溶解均匀)，再称定其重量，用70%乙醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤3 mL置于10 mL的容量瓶中，用70%乙醇稀释至刻度，用0.45 μm的滤头滤过，续滤液作为供试品溶液。

2.1.3 阴性溶液的制备

按照处方配比，取除了黄芩以外的其他六味药材，粉碎成细粉，过筛，混匀备用。按照供试品溶液的制备方法，制成缺少黄芩的阴性样品溶液，用0.45 μm滤头滤过，即得。

2.2 色谱条件

色谱柱：十八硅烷键合硅胶为填充剂[4]；流动相：甲醇-0.4%磷酸溶液=45:55；流速：0.9 mL/min；柱子：Diamonsil C8(250 mm×4.6 mm，5 μL)色谱柱；柱温：35 ℃；泵压不大于25 MPa；定量方法：外标法；进样量：10 μL；检测波长为277 nm。理论塔板数按黄芩苷峰计算应不低于2000。

2.3 方法学考察

2.3.1 专属性实验

吸取鼻通丸供试品溶液、黄芩苷对照品溶液以及阴性对照品溶液各10 μL，分别注入色谱仪，验证阴性是否有干扰。经测定，鼻通丸中黄芩苷在拟定的色谱条件中检测出黄芩苷峰，阴性溶液无干扰，表明该法专属性良好。结果见图1。

图1 A黄芩苷对照品(tR=7.200, n=5405)；B供试品(tR=7.298,n=5197)；C阴性对照

2.3.2 线性关系考察

精密量取黄芩苷对照品(30.5500 μg/mL)溶液2、4、6、8、9、10 mL，分别置于10 mL的容量瓶中，加70%乙醇稀释至刻度，摇动均匀，即得6个浓度(6.1100 μg/mL、12.2200 μg/mL、18.3300 μg/mL、24.4400 μg/mL、27.4910 μg/mL、30.5500 μg/mL)的对照品溶液，各进样10 μL，注入液相色谱仪中测定[5]。以对照品浓度(μg/mL)为横坐标(x)，峰面积为纵坐标(y)，绘制标准曲线，得y=36080x-1890.9，R2=0.9998回归方程，结果表明黄芩苷在6.1100～30.5500 μg/mL范围内呈现良好的线性关系。

2.3.3 精密度试验

取同一浓度(30.5500 μg/mL)的对照品溶液，按拟定的色谱条件连续进样6次，测得黄芩苷的色谱图峰面积。实验结果显示样品峰面积大小接近，RSD=0.15%(n=6)，小于3%，精密度良好,结果见表1。

表1 精密度试验结果

2.3.4 稳定性试验

取同一份供试品溶液，按照含量测定方法，分别在0、4、8、12、16、24 h进样10 μL进行测定，记录色谱图峰面积。实验结果显示不同时段测得黄芩苷的峰面积平均值是1425062，RSD%=1.16%(n=6)，(见表2)说明本品制备后24 h内稳定。

表2 稳定性试验结果

2.3.5 重复性试验

取同一批号样品，按照“2.3.2”项下的方法制备供试品溶液6份，平行地进行6次试验测试，记录色谱图峰面积。实验结果显示，6份鼻通丸中含有黄芩苷的量均在10.8154～10.9575 mg/g之间，平均值为10.8867，RSD=1.05%，相对标准偏差较小，不超过规定范围RSD%=3%，结果表明本方法重现性良好(见表3)。

表3 重复性试验结果

2.3.6 加样回收试验

取同一已知含量(含量10.8867 mg)的供试品6份，每份取样量是供试品(1 g)的50%，分别精密加入黄芩苷对照品6.0010 mg，按“2.3.2”项下供试品溶液的制备方法制备溶液，再按照上述相同的色谱条件进行含量测定，记录色谱图，按外标法计算黄芩苷的平均加样回收率。结果表明，6次同一供试品溶液中测得黄芩苷的平均回收率为98.70%，RSD%=0.2%，所测得结果不超过规定的平均回收率95%～105%范围，表明该方法可行(见表4)。

表4 加样回收试验结果

2.3.7 样品含量测定

取三个不同批号的样品，每一个批号的供试品平行取两份，根据“2.3.2”项下的方法制备供试品溶液，分别吸取已有的对照品和供试品各10 μL注入液相色谱仪中进行测定，记录测定的图谱数据。结果显示，三个批号的鼻通丸中黄芩苷的含量略有不同，但是RSD%都较小，表明该方法稳定，且可行(见表5)。

表5 鼻通丸含量测定结果

3 结 论

经过试验，确立了利用高效液相测定鼻通丸中黄芩苷含量的方法。本法采用Diamonsil C8(250 mm×4.6 mm，5 μL)色谱柱，甲醇-0.4%磷酸溶液=45:55作为流动相，277 nm为检测波长，流速为0.9 mL/min，测定鼻通丸中黄芩苷的含量，黄芩苷的线性关系良好，精密性，重现性，稳定性试验结果良好。