陶翎 周翔 戎春燕 宋博 黄涛 郭睿

(常州千红生化制药股份有限公司，江苏 常州 213125)

0 引言

肝素是从猪、牛、羊等动物的肠粘膜或肺提取的具有抗凝血作用的粘多糖硫酸酯类物。原料药可能存在多个来源的元素杂质，由于元素杂质通常没有治疗作用，因此原料药生产中元素杂质含量应被控制在可接受的限度。国际人用药物注册技术协调会议(ICH)Q3D元素杂质指南和美国药典(USP)，都提出对于潜在存在于药物中的元素杂质需进行定性和定量分析评估，并基于进行风险评估以限制最低元素杂质含量[1-2]。因此我们采用电感耦合等离子体发射光谱法(ICP-OES)进一步控制肝素原料药中元素杂质水平，从而有效保障药品质量。

1 测试部分

1.1 主要仪器

电感耦合等离子体发射光谱仪(ICP-OES)：Avio 200(珀金埃尔默公司)。

微波消解仪：Multiwave 3000(安东帕有限公司)。

1.2 试剂与试药

Cd、Pb、Hg、Co、V、Ni、Li、Sb、Cu、Ba、Cr、As元素标准物质由国家有色金属及电子材料分析测试中心提供；肝素钠由常州千红生化制药股份有限公司生产；硝酸(分析纯)由国药集团化学试剂有限公司提供。

1.3 测试方法

1.3.1 溶液配制

2%硝酸溶液：先放30mL的纯化水，再取3.1mL的浓硝酸加入瓶内定容至100mL。

混标溶液：吸取Cd、Pb、Co、V、Ni、Li、Cu、Ba、Cr、As(混合溶液100μg/mL)10mL，Hg(单 元 素1000μg/mL)1mL，Sb(单 元 素1000μg/mL)1mL，加2%硝酸溶液定容至100mL。

标准溶液：根据仪器的工作浓度区间，定义J=0.1μg/mL，将混标溶液用2%硝酸稀释成0.5J、0.75J、1J、1.25J、1.5J的混合溶液。

样品溶液：称取肝素钠供试品约0.4g，置聚四氟乙烯消解罐内，加2%硝酸6mL，置适宜的微波消解。消解完全后，用2%硝酸定容至100mL。

混合溶液(0.5J)：称取肝素钠供试品约0.4g，加混标溶液0.5mL，置聚四氟乙烯消解罐内，加2%硝酸6mL，置适宜的微波消解。消解完全后，用2%硝酸定容至100mL。

混合溶液(0.75J)：称取肝素钠供试品约0.4g，加混标溶液0.75mL，置聚四氟乙烯消解罐内，加2%硝酸6mL，置适宜的微波消解。消解完全后，用2%硝酸定容至100mL。

混合溶液(1J)：称取肝素钠供试品约0.4g，加混标溶液1.0mL，置聚四氟乙烯消解罐内，加2%硝酸6mL，置适宜的微波消解。消解完全后，用2%硝酸定容至100mL。

混合溶液(1.25J)：称取肝素钠供试品约0.4g，加混标溶液1.25mL，置聚四氟乙烯消解罐内，加2%硝酸6mL，置适宜的微波消解。消解完全后，用2%硝酸定容至100mL。

混合溶液(1.5J)：称取肝素钠供试品约0.4g，加混标溶液1.5mL，置聚四氟乙烯消解罐内，加2%硝酸6mL，置适宜的微波消解。消解完全后，用2%硝酸定容至100mL。

空白溶液：即2%硝酸溶液。

微波消解仪升温程序：5min由室温升至120℃，维持3min；6min由120℃升至150℃，维持2min；6min由150℃升至180℃，维持20min。

1.3.2 光谱系统

仪器：ICP-OES。

Delay Time：30～60s。

流速：1.5mL/min。

波长：仪器默认元素波长(Cd=228.802、Pb=220.353、Hg=253.652、Co=228.616、V=292.464、Ni=231.604、Li=670.784、Sb=206.836、Cu=327.393、Ba=233.527、Cr=267.716、As=193.696)。

2 结果分析

2.1 标准曲线

取标准溶液0.5J、0.75J、1J、1.25J、1.5J，混合溶液0.5J、0.75J、1J、1.25J、1.5J分别进样，结果见表1和表2。

从表1和表2可以得出，各浓度下标准溶液峰面积与混合溶液近似，呈现良好的线性关系。

2.2 回收率

取样品溶液、混合溶液1.5J、1J、0.5J分别进样3次，结果见表3。

表1 混合溶液线性

表2 标准溶液线性

表3 准确度

续表3

从表3可得，各元素在各浓度下回收率均在70%～150%之间，平均回收率为97.8%。

2.3 检出限

用空白溶液进样11次，计算标准偏差SA，根据线性项下斜率QL=3SA/S，计算出各元素的检出限，结果见表4。

表4 各元素检出限

续表4

从表4可得，各元素检出限在0.005～2μg/g之间，能满足这些金属元素的检测需求。

3 结语

利用ICP-OES仪检测肝素中金属杂质具有良好的线性关系、回收率、检出限，可以用于肝素元素杂质的检测，且实现了可同时检测Cd、Pb、Hg、Co、V、Ni、Li、Sb、Cu、Ba、Cr、As共12种元素，缩短了试验时间。随着本方法使用的深入，将继续开发改进本方法，以满足更多杂质元素检测的质控要求。