陈琴

【摘要】目的：建立注射用胸腺法新含量的UPLC法并进行方法学验证。方法： 色谱条件：UPLC仪器，进样量2μl，柱温为50℃，检测波长为210nm，流速0.20 ml/min。结果：空白溶剂无干扰;定量限为1.0ng;重复性RSD为0.2%，中间精密度RSD为0.2%;溶液的稳定性实验RSD为0.4%;准确度RSD为0.73%;平均回收率为100.10%;耐用性实验结果显示各条件检测结果RSD在1.0%以内;在0.5μg～1.5μg范围内与主峰面积呈良好的线性关系;采用HPLC与UPLC对3批样品的含量测定进行对比，两法相对偏差未超过0.8%。结论：UPLC法快速、高效、简便、准确、专属性强，适用于注射用胸腺法新含量测定。

【关键词】注射用胸腺法新;UPLC;含量

【中图分类号】R927.2            【文献标识码】B                 【文章编号】2096-7225（2020）02-0001-01

注射用胸腺法新作为免疫增强剂广泛用于恶性肿瘤、感染性疾病的辅助治疗以及免疫功能低下的免疫增强^[1～2]。胸腺法新能够提高慢性乙型肝炎患者对干扰素的生化学、血清学应答率，二者联合是一种较好的抗HBV治疗方法^[3～4]。目前中国药典2015年版采用HPLC检测其含量测定、含量均匀度和有关物质。其方法检测时间长，车间等待周期久，化学试剂用量大。本文参照HPLC法建立其含量UPLC法。

1 材料与方法

1.1样品与对照品

注射用胸腺法新（20180303B，20180401A，20180401B），工作对照品（S00620171001），海南中和药业股份有限公司制。

1.2主要试剂及仪器

ACQUITY UPLC H-Class型超高效液相色谱仪，ACQ TUV紫外检测器;waters C18柱（2.1×50mm，1.7μm）;硫酸铵（广州化学试剂厂，AR）磷酸（成都市克隆化学品有限公司，AR），乙腈（上海星可高纯溶剂有限公司，HPLC级）

1.3色谱条件

以硫酸铵缓冲液（取硫酸铵26.4g，磷酸25ml加水溶解并稀释至2000ml）-乙腈（90：10）为流动相A，以硫酸铵缓冲液-乙腈（50：50）为流动相B;柱温为50℃;检测波长为210nm;流速0.20 ml/min;进行梯度洗脱。理论板数按胸腺法新峰计算不低于2000。取本品或对照品适量，加0.02mol/L磷酸盐缓冲液（pH7.0）制成每1ml中约含胸腺法新0.5mg的溶液。按外标法以峰面积计算，即得。

2 结果

2.1专属性

配制空白溶液、空白辅料溶液、对照品溶液和供试品溶液进行干扰分析，空白溶剂和空白辅料溶液无吸收峰，对含量测定无干扰作用，同时，供试品溶液和对照品溶液的保留时间一致，专属性良好。详见表1。

2.2定量限

取对照品溶液逐步稀释进样，直至主峰高约为基线的10倍，则该进样量即为其检测限。在该色谱条件下，测得胸腺法新的检测限为1.0ng。

2.3重复性、中间精密度

重复进样6针的RSD为0.2%，不同日期、不同分析员采用UPLC连续进样6针的中间精密度为0.2%。说明该方法采用UPLC重现性良好。

2.4溶液的稳定性

将配好的供试品溶液室温放置，分别于配样后第0、2、4、8、12小时进样，峰面积RSD为0.4%。

2.5准确度

测试3个浓度（0.4mg/ml，0.5 mg/ml和0.6 mg/ml）9份样品的回收率，回收率分别为100.69%、99.84%和99.35%，9份样品的RSD为0.73%。说明该方法准确度良好。

2.6耐用性

通过测试不同序列号柱子、流速±0.04ml/min、柱温±5℃，测得RSD分别为0.48%、0.50%和0.91%，说明当色谱柱、流速、柱温发生微小变化时，对含量测定无显著影响。

2.7线性和范围

配制0.5mg/ml的对照品溶液，分别进样1.0、1.5、2.0、2.5、3.0μl，以主峰面积A为纵坐标，进样体积（μl）为横坐标，绘制标准曲线，得线性方程为y=1698831x-26658.2，相关系数r=0.9999;说明在0.5μg～1.5μg范围内与主峰面积呈良好的线性关系。HPLC法与UPLC法对比取3批样品同时在2台设备运行，相对偏差均未超过0.8%，说明该方法与HPLC结果一致。

3 讨论

UPLC是一种快速、高效、简便、准确、专属性强的检测方法，并且该方法可靠、有效。可用于测定注射用胸腺法新的含量。

参考文献：

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