焦 玉 黄德红 杨艳芳 胡思荣 张 荔

1.湖北省襄阳市中医医院，湖北 襄阳 441000；2.湖北中医药大学药学院，湖北 武汉 430065

甲状腺功能低下是老年患者的常见疾病之一，是甲状腺激素合成及分泌减少或组织利用不佳导致的全身代谢性疾病，96%的甲状腺低下患者于老年阶段发病[1]。西医治疗该病以甲状腺功能达标为主，但整体治疗效果有待提高，所以研究领域迫切希望能发现新的中药来完善治疗[2]。参茸五子丸为湖北中医名师胡思荣主任医师多年临床验方，以古方 “五子衍宗丸” 加减而成。全方以红参、鹿茸为君药，能温肾壮阳，用于肾阳和精血亏虚而致女子宫寒不孕及甲状腺功能不足。为了初步评价参茸五子丸的安全性，根据《中药、天然药物急性毒性研究技术指导原则》[3]的技术要求，对参茸五子丸进行急性毒性试验。

1 材料与方法

1.1 材料

1.1.1 试验药物 参茸五子丸，176g/瓶，由襄阳市中医医院提供(批号：20150216)。

1.1.2 试验动物 种属与品系：SPF级昆明小鼠。性别和数量：24只小鼠，雌雄各半，用于预实验；40只小鼠，雌雄各半，用于正式试验。动物体重：18～22g。

预试验动物来源：湖北省实验动物研究中心。试验动物质量合格证：No.4200600007058，许可证编号：SCXK(鄂)2015-0018。

正式试验动物来源：武汉生物制品研究所。试验动物质量合格证：No.4200400002876，许可证编号：SCXK(鄂)2012-0003。

动物试验单位：湖北中医药大学动物中心SPF级实验室，使用许可证号：SCXK(鄂)2012-0068。

动物的标记与识别：动物到达后，每笼5只，予以标注，标注课题和小鼠体重等内容，并按照试验的要求对小鼠进行编号。

检疫时间：动物到达后检疫3 d。

饲养管理条件：小鼠饲养在塑料饲养盒中，喂标准颗粒饲料(饲料由湖北中医药大学动物中心提供)，无干涉自由进食及饮水。温度控制在20～25℃，相对湿度控制在45%～60%，每周更换垫料2次，消毒给水瓶1次。

1.1.3 试验器材 5号筛、电子天平、打粉机、纯水仪、1 mL灌胃器、100 mL量筒、常用手术用具。

1.2 试验方法

1.2.1 受试药物的制备方法 将参茸五子丸用打粉机打粉，过5号筛，用纯水配制成低、中、高3个浓度混悬液， 浓度分别为0.291 、0.590、1.15 g·mL-1。

1.2.2 预实验 取实验小鼠24只，每组8只，雌雄分开，分成低剂量参茸五子丸组、中剂量参茸五子丸组和高剂量参茸五子丸组共3个组，试验前12 h禁食不禁水。灌胃最大容积为按小鼠体重40.0 mL·kg-1，3个组灌胃浓度分别为0.291、0.590和1.15 g·mL-1,每日灌胃2次，每次间隔5 h。

灌胃后，正常饲养。连续5 d观察小鼠，分别比较体重、活动情况、呼吸、皮毛颜色、大小便、喂食等情况和死亡数目。结果全部观察项目(见表1)均正常并且实验小鼠均存活，未测得半数致死数LD50。因此，以1.15 g·mL-1的为最高浓度测定最大给药量，进行正式试验。

1.2.3 正式试验[4-5]取40只试验小鼠，每组20只，分为2组标记为对照组和参茸五子丸组，雌雄分开，试验前12 h禁食不禁水。小鼠按体重40 mL·kg-1，参茸五子丸组以1.15 g·ml-1药液浓度浓度，每5 h灌胃1次，每日2次；对照组按相同方式纯水灌胃。给药后，正常饲养。观察14 d，比较各组小鼠的活动状态、重量、毒性反应和死亡数目。在将两组中雌雄取均值进行比较。

1.2.4 小鼠急性毒性试验观察 各组灌胃给药后，按照常规饲养。 灌胃给药后2 h之内，每15 min观察1次；2～4 h内，每0.5 h观察1次； 4～6 h内，每1 h观察1次；每天同时段观察小鼠的重量、四肢活动、饮水和进食、皮毛颜色、大小便、死亡等情况。

表1 观察项目

若小鼠死亡，解剖观察各脏器改变情况。然后将存活的小鼠颈椎脱臼处死，同时解剖和观察小鼠主要脏器的变化。

2 结果

2.1 预实验 小鼠一般状态变化和死亡情况见表2、3。

表2 预实验小鼠一般状态变化

注：N为正常。

表3 预实验小鼠死亡情况

2.2 正式实验

2.2.1 小鼠一般状态变化 参茸五子丸组：给药后0.5 ～1.5 h，小量小鼠活动和进食饮水变少，但未出现抽搐、麻痹等现象； 也没有呼吸困难对照组：小鼠在1～14 d的观察时间之内，小鼠各观察指标均正常。

对照组：小鼠在1～14 d的观察时间之内，小鼠自发活动、反应情况、呼吸、皮毛光泽、饮水、进食、二便均正常，没有出现任何不正常的状态。结果见表4。

2.2.2 小鼠的死亡情况 14 d观察时间内，实验小鼠全部存活。结果见表5。

2.2.3 小鼠体重变化 参茸五子丸组：小鼠的体重增长正常，与对照组比较差异无统计学意义(P>0.05)。对照组：小鼠体重增长正常。将两组中雌雄两组分别计算均值，再进行比较，结果见表6、图6。

表4 正式试验小鼠一般状态变化

注：N表示正常

表5 正式试验小鼠死亡情况

组别参茸五子丸对照组性别♀♂♀♂♀♂♀♂只数101020101020初始20.84±0.5621.38±0.4021.11±0.5520.79±0.6721.48±0.4121.14±0.651d24.99±0.80∗∗26.42±1.21∗∗25.71±1.24∗∗24.35±0.86∗∗25.65±0.84∗∗25.00±1.06∗∗2d26.91±1.03∗∗28.53±1.12∗∗27.72±1.34∗∗26.64±1.00∗∗27.87±0.82∗∗27.26±1.09∗∗3d28.58±1.10∗∗30.41±1.23∗∗29.50±1.47∗∗27.81±1.01∗∗30.06±1.14∗∗28.94±1.56∗∗4d29.80±1.74∗∗32.37±1.38∗∗31.09±2.02∗∗29.35±1.33∗∗32.10±1.28∗∗30.74±1.90∗∗5d30.35±2.21∗∗33.91±1.37∗∗32.13±2.56∗∗29.74±1.11∗∗33.58±1.24∗∗31.66±2.28∗∗6d30.23±1.84∗∗34.53±1.62∗∗32.38±2.78∗∗29.76±1.14∗∗34.72±1.48∗∗32.24±2.85∗∗7d31.44±1.46∗∗35.81±1.42∗∗33.63±2.64∗∗30.77±0.88∗∗36.10±1.90∗∗33.44±3.09∗∗8d31.26±1.74∗∗35.60±1.73∗∗33.43±2.80∗∗30.95±1.03∗∗36.52±2.03∗∗33.74±3.26∗∗9d31.64±1.93∗∗36.38±1.88∗∗34.01±3.06∗∗31.10±1.43∗∗37.42±2.34∗∗34.26±3.75∗∗10d32.29±2.04∗∗37.50±2.40∗∗34.90±3.44∗∗31.72±1.60∗∗38.46±2.38∗∗35.09±3.98∗∗11d32.45±1.95∗∗37.81±2.30∗∗35.13±3.45∗∗32.24±1.62∗∗38.81±2.42∗∗35.53±3.92∗∗12d32.68±1.94∗∗37.90±2.27∗∗35.29±3.38∗∗31.91±1.79∗∗38.98±2.40∗∗35.45±4.17∗∗13d33.06±1.79∗∗38.65±2.69∗∗35.86±3.63∗∗32.77±1.81∗∗39.76±2.56∗∗36.27±4.18∗∗14d33.71±1.57∗∗39.13±2.82∗∗36.42±3.56∗∗33.51±1.82∗∗40.96±2.65∗∗37.24±4.42∗∗

注：与初始值相比，**P<0.01。

2.2.4 小鼠尸检情况 观察期到后，将所有小鼠颈椎脱臼处死，并尸检各器官。 结果：肝、心、脾、肺、肾、胃各脏器的颜色、体积、质地等均无异常现象。

2.2.5 小鼠的最大给药量 小鼠的最大给药量为1.15 g·mL-1×40.00 mL·kg-1×2=92.00 g·kg-1。

按以下公式计算出最大给药量倍数：

小鼠最大给药量倍数=每只小鼠的最大给药量/小鼠平均体重(20 g)1×成人平均体重(50 kg)/成人每日用量

每只小鼠的最大给药量为：1.15 g·mL-1×0.8 mL×2次=1.84 g

成人临床日用量为：2.933×10 g/次×3次=87.99 g

小鼠最大给药量倍数为：1.84 g/20 g×50000/87.99 g=52.3倍

在参茸五子丸的急性毒性试验过程中，没有出现小鼠死亡的情况，无法测出半数致死量LD50。因此，以1.15 g·mL-1为最大给药浓度，40.0 mL·kg-1为最大给药容量灌胃给药2次，进行最大给药量试验。在14 d的观察时间内，小鼠没有出现任何毒性反应，且体重正常增加，说明本品在该剂量下使用对小鼠是安全的。

3 结论

“五子衍宗丸”全方组成为：枸杞子、菟丝子(炒)、覆盆子、五味子(蒸)、车前子(盐炒)，为补益剂，具有补肾益精之功效，用于脾肾阳虚所致的甲状腺功能低下等。“参茸五子丸”为“五子衍宗丸”加减而成，全方以红参、鹿茸温肾助阳为君药；盐菟丝子、覆盆子、醋五味子、枸杞子、盐车前子补血填精，补中有泻，补而不腻为臣药；淫羊藿补肾壮阳加强五子衍宗丸的温阳作用；丹参既能活血又能养血，“能去瘀生新而不伤正”；黄柏苦寒入肾，清虚热燥湿，以制以上诸药补益温阳作用太过，三者同为佐药；使以陈皮、茯苓、焦山楂、炙甘草以健脾和胃，久服不伤及脾胃。诸药配伍，温而不燥，补而不腻。全方重在温肾阳，益精血，辅以健脾胃，清虚热，使肾阳得温，精血充盈。

参茸五子丸(批号：20150216)对昆明小鼠灌胃给药进行急性毒性试验表明，小鼠没有出现任何毒性反应，且体重正常增长，无法测出LD50；最大给药量为92.00 g生药/kg，相当于成人临床日用量1.76 g/kg的52.3倍，说明小鼠对本品的最大耐受剂量大于92.00 g生药/kg。该制剂在服用剂量范围内安全性良好。