黄文达，王晟，刘维亚

（1.惠阳三和医院检验科，广东 惠州 516000；2.葛洲坝集团中心医院检验科，湖北 宜昌 443002）

肌酸激酶（CK）和肌酸激酶MB同工酶（CKMB）在临床上是心肌受损的常用酶学指标[1]，CKMB是CK的亚型之一，因此从理论上来说CK-MB的活性肯定是小于CK的。在实验室经常会遇到CK与CK-MB结果不相符合的情况，CK结果在正常范围，而CK-MB的检测结果却明显偏高。这是由于CM-MB方法学局限所导致的[2,3]，但CK-MB远大于CK的情况较少[4]，笔者遇到一例，现报告如下。

1 资料与方法

1.1 资料 2016年12月18日将送检的生化样本3500r/min离心10min，然后立即上机检测。CK-MB项目在贝克曼库尔特AU680生化分析仪使用广州科方免疫抑制法试剂进行检测，严格按照试剂说明书执行，采用因子校正，使用朗道质控品,当日质控在控，血清标本状态正常，无脂浊、无溶血，可忽略溶血对结果的影响[5]。临床诊断疑心肌梗塞。检测结果为 CK：845U/L，CK-MB：5736U/L，直接复查结果相近（当日其它结果无异常）。两项结果严重不匹配，CK-MB结果极度异常！检查此例反应曲线，见图1。发现检测点21~27之间反应产生吸光度变化 （OD）仅为0.0202，而仪器显示OD竟为0.6862。仔细观察过后发现图1中从监测点11点到14点吸光度急速上升，14点后趋于平缓。怀疑将读数点前移，以11~14点作为反应监测点。

生化分析仪参数设置里 “Lag time check”，即“延迟时间检查”，实际上就是读数点的前移功能。在底物耗尽时反应的前后不呈线性,读点前移功能可以规避这个缺陷,那么仪器会把读数点前面呈线性的部分作为计算读点,经过换算得出结果[6,7]。AU系列原配系统应用参数补充说明，此功能仅限与Rate法项目,是指所有反应组分加入以后至第一个读数点之前的一段时间。也包括第一个读数点在内，至少有3个点才能进行线性判断。这是仪器触发“延迟时间检查”功能的前提条件，必须满足这个判断规则,该功能才能启动，也就是读数点前移，拓展了线性范围，减少了复查率。主要应用在检测发生底物耗尽，反应提前结束的Rate法项目，这个时候该项功能发挥到较好的作用[8]。

在设备参数设置里Linearity Limit即线性区间，试剂说明书上有指出10%~30%不等，一般情况下原装试剂15%，非原装试剂25%。Rate法即连续监测法,在反应开始到反应结束都会有吸光度的变化，在整个过程中检测的OD值就是监测点，每点间隔18s。速率法在测试的过程中都必须建立在线性范围内[9]。点与点之间OD值的变化不能超过设定的范围(线性范围)，否则仪器就会有报警信息提示。同时读点间的OD区间是来判断选取的读点间的反应是否在线性范围内，如果不在范围内，结果不可信，必须稀释复查。同样如果启用该功能，那么启用后所选取的读点间的OD区间也必须在设定的线性范围内,否则因读点前移所得结果也是不可信。因此OD区间不是作为“延迟时间检查”启用的条件,而是作为判断读点是否在要求线性范围内。

那么导致这么高的结果是否是因为启用 “延迟时间检查”功能呢？关闭此功能就能知道。

1.2 方法 对当日所有含有CK-MB检测项目的标本分别在开启和关闭“延迟时间检查”功能的情况进行复查，将所选取的标本按顺序编号分为两批，手工编辑在AU680上机检测,再将其结果进行对比。

2 结果与分析

2.1 结果 在开启和关闭“延迟时间检查”复查，上述结果极端异常样本结果分别为：开启时5736U/L、关闭时169U/L，其他含有CK-MB检测项目的样本结果一致。

2.2 原因分析 为何这例CK-MB在开启和关闭“延迟时间检查”功能情况下两次检测结果相差巨大呢？我们仔细对比分析了一下在开启和关闭“延迟时间检查”功能情况下两次检测反应曲线图。注：两次都为同一标本。

图1 使用“延迟时间检查”反应曲线

图2 未使用“延迟时间检查”反应曲线

从图1中可以看到监测点11点到14点处吸光度急速上升，14点后趋于平缓。从OD值来看，11-14点变化在整个反应曲线中最大的，再来看看它是否符合线性判断，21点是第一个读数点，21点之前到11点有4个读数点 （11～14且此段斜率明显大于21～27点）满足线性判断（15～20点因与21～27点斜率相同故仪器自动否定），读点前移符合条件启动。从反应原理来看,读数点应该在21～27之间。见图2，关闭了“延迟时间检查”功能从曲线和吸光度的变化来看21～27点幅度较小，最后计算的反应OD和浓度都比较低，它计算的范围也正是参数设置的OD区间(-2.0至2.0)。因此图2所示检测结果才是真实结果。

分别将11～14点和21～27点之间吸光度变化均换算到单位时间内,均与仪器显示OD值相符。经过多次测试后，测试的结果也相符，不是一次的偶然误差导致。确定此例CK-MB出现异常高值正是因为在开启“延迟时间检查”功能带来的读数点前移，导致计算OD值发生变化。11～14点是怀疑血清中存在的显色反应的中间产物而导致的吸光度变化，不仅仅是CK-MB酶催反应带来的变化。

3 讨论

“延迟时间检查”功能仅适用于连续监测法，但并不是适用Rate法的所有项目。在使用自建系统，应用参数设置不够严谨，此时进行CK-MB项目检测，一旦开启“延迟时间检查”功能，仪器计算出来的结果很有可能不是真实结果,极有可能因为干扰物反应OD变化过大带来极大的误差，因此部分样本的 CK-MB检测不适合开启 “延迟时间检查”功能，故建议在该项目上关闭此功能。同时建议使用化学发光的方法测定CK-MB,能得出准确的结果[10]。通过比较发现，此功能不适合在CK-MB检测中使用，其他项目有待大家探讨。任何方法学的确认都必须建立在认证的基础上,方法学认证需要在正确度，精密度，线性范围，灵敏度等各方面的性能验证。而部分非配套试剂CK-MB说明书的参数设置里明确标出“YES”在这个功能上。经查证原厂原装试剂在这个项目上并没有开启这项功能。