万爱红，张连琴，张华

（郑州大学第一附属医院妇科门诊，河南 郑州 450052）

流行病学研究证实,我国2010-2017年部分地区宫颈癌的平均发病率可达283~593/10万人左右[1]。临床上宫颈癌的发生能够导致患者生活质量的下降，影响患者的生存预后水平[2]。在探讨宫颈癌的发病机制过程中,可以发现肿瘤相关生化因子的改变,能够通过影响到癌细胞的生物学特征，提高癌细胞的自我扩增速度,进而促进生殖系统恶性肿瘤的发生。转录相关蛋白（Foxm1）的表达能够通过诱导新生血管内皮的形成,提高恶性肿瘤病灶组织的血流灌注水平,从而促进了恶性肿瘤的发生和进展[3]；低氧诱导因子-1(hypoxia inducible factor-1,HIF-1)能够通过诱导缺氧环境,促进上皮细胞的D NA损伤,增加异常DNA的突变和增殖的风险[4]；环氧酶(cyclo-oxygen-ase,COX)能够通过参与到花生四烯酸的代谢导致氧化性损伤,提高癌细胞的侵袭和转移能力[5]。部分研究者探讨了Foxm1等指标在卵巢癌患者中的表达,认为Foxm1等的表达阳性率的上升,能够显著促进卵巢癌的增殖能力的提升,加剧卵巢癌的侵袭转移过程[6],但关于Foxm1、HIF-1α与COX-2在宫颈癌患者中的探讨不足。为了深入揭示Foxm1、HIF-1α与COX-2的表达与宫颈癌患者的病情关系,从而为临床上宫颈癌患者的临床诊疗提供理论基础，本次研究选取2016年2月-2018年2月在我院接受治疗的宫颈癌患者为研究对象,探讨了Foxm1、HIF-1α与COX-2免疫组化结果,并分析了其与宫颈癌患者临床病理特征的关系。

1 资料与方法

1.1 一般资料 选取2016年2月-2018年2月在我院接受治疗的宫颈癌患者为研究对象。纳入标准：⑴成年女性；⑵经病理检查确诊为宫颈癌者；⑶无其他生殖系统肿瘤者；排除标准：⑴临床资料不全者；⑵合并严重基础疾病者。根据纳入排除标准共纳入病例数100例,年龄42~78岁,平均59.78±4.12岁,其中临床分期为Ⅰ+Ⅱ期者58例，Ⅲ期者42例，有淋巴结转移者40例，无淋巴结转移者60例；对照组纳入排除标准：成年女性，无严重基础疾病者,根据纳入排除标准共纳入100例,年龄45~78岁，平均59.80±4.16岁。两组研究对象年龄等一般资料比较无差别，具有可比性。本项研究经医院伦理委员会评审通过。

1.2 检测方法 所有组织标本经石蜡包埋后作连续切片，厚度约为4mm，采用免疫组化链霉卵白素一生物素复合体法 (strep avidin—biotin complex，SABC法)染色，二氨基联苯胺(diamionben zidene，DAB)显色。 Foxm1、HIF-1α 与 COX-2蛋白通用型二抗以及SP试剂盒和DAB显色盒均购自北京中杉金桥生物技术开发公司。以阳性片及PBS代替一抗分别作为阳性及阴性对照,高倍显微镜下观察Foxm1、HIF-1α与COX-2蛋白的表达情况,具体染色步骤严格按照SP试剂盒说明书进行操作。

1.3 评价指标 观察两组研究对象Foxm1蛋白、HIF-1α与COX-2蛋白表达情况,比较不同特征宫颈癌患者Foxm1蛋白、HIF-1α与COX-2蛋白表达情况，分析影响宫颈癌患者Foxm1蛋白、HIF-1α与COX-2蛋白表达情况的因素。

1.4 统计学处理 数据录入后,采用SPSS 11.5软件进行分析。两组研究对象、不同特征宫颈癌患者Foxm1蛋白、HIF-1α与COX-2蛋白表达的比较采用卡方检验进行分析，采用Logistic回归分析法分析影响宫颈癌患者Foxm1蛋白、HIF-1α与COX-2蛋白表达情况的因素。P<0.05：差异有统计学意义。

表1 两组研究对象Foxm1蛋白、HIF-1α与COX-2蛋白表达情况的比较

2 结果

2.1 两组研究对象Foxm1蛋白、HIF-1α与COX-2蛋白表达情况的比较 宫颈癌组患者的Foxm1、HIF-1α与COX-2蛋白阳性表达率均高于对照组,见表1。

2.2 不同特征宫颈癌患者Foxm1蛋白、HIF-1α与COX-2蛋白表达情况的比较 临床分期为Ⅲ期、组织学分级为中、低分化、有淋巴结转移、有HPV感染的宫颈癌患者的Foxm1、HIF-1α与COX-2蛋白阳性表达率较高,而不同年龄的患者Foxm1、HIF-1α与COX-2蛋白阳性表达率无明显差别,见表2。

2.3 影响宫颈癌患者 Foxm1蛋白、HIF-1α与COX-2蛋白表达情况的因素分析 将单因素分析有意义的因素（TNM分期、组织学分级、有无淋巴结转移、有HPV感染）作为自变量，以患者Foxm1、HIF-1α与COX-2蛋白表达情况作为因变量，进行回归分析。结果TNM分期、组织学分级进入回归方程。见表3。

表2 不同特征宫颈癌患者Foxm1蛋白、HIF-1α与COX-2蛋白表达情况的比较

3 讨论

高危型HPV病毒感染能够显著促进宫颈柱状上皮细胞的病变，增加宫颈癌的发生风险[7]，特别是在合并有HPV16、HPV18或者HPV52等感染的患者中,高级别宫颈上皮内瘤变或者宫颈癌的发生风险可进一步的上升[8]。现阶段临床上主要通过手术治疗宫颈癌，但包括手术及术后放疗治疗后，宫颈癌患者的临床病情缓解率仍然较低,治疗后的患者无进展生存期仍然无明显的改善[9]。而免疫靶向性治疗,能够在宫颈癌患者的辅助治疗过程中发挥重要作用,本次研究对于宫颈癌患者体内的Foxm 1、HIF-1α与COX-2的表达分析研究,不仅有助于深入揭示宫颈癌的发生机理,同时还能够为宫颈癌患者的免疫靶向性治疗提供参考靶点。

表3 影响宫颈癌患者Foxm1蛋白、HIF-1α与COX-2蛋白表达情况的因素分析

Foxm1是转录调控家族因子，主要存在于细胞质和细胞核周边,其表达浓度的上升能够通过提高癌细胞上游转录活性,进而提高癌细胞纺锤体的复制和分裂速度,促进癌细胞的持续性自我扩增。Foxm1还能够通过对于诱导凋亡因子的调控，导致癌细胞的分化障碍,促进癌细胞中低分化或者低分化的发生[10]；HIF-1α能够造成局部缺氧性环境，加剧癌细胞的DNA的断裂和癌基因的突变，提高了癌细胞内肿瘤相关信号通路的激活程度,从而促进了宫颈柱状上皮细胞的恶性病变风险[11]；COX-2是调控花生四烯酸生成的前列腺素酶,其能够促进血管内皮因子激活的同时,增加肿瘤新生微血管的数量，提高肿瘤细胞的侵袭能力。基础方面的研究还认为，COX-2的表达上升还能够导致柱状上皮细胞突破基底膜能力的增强,增加了癌细胞的转移风险[12]。

免疫组化的结果分析研究可见,在宫颈癌患者病灶组织中，Foxm1、HIF-1α与COX-2的表达阳性率均明显的上升，高于宫颈良性组织，差异较为明显,提示了Foxm1、HIF-1α与COX-2的高表达均能够促进宫颈癌的发生过程。通过汇集不同的相关文献，笔者认为这主要由于Foxm1、HIF-1α与COX-2的下列几个方面的作用有关[13]：⑴Foxm1的表达上升能够提高癌基因的转录活性，促进柱状上皮细胞的持续性浸润和增殖过程；⑵HIF-1α诱导的缺氧性环境,能够导致癌细胞生物学特征的明显改变,提高了癌细胞内AKT或者MAPK信号通路的激活；⑶COX-2对于体内环氧化物的激活作用，能够促进癌细胞间质成分的分解，促进癌细胞的粘附和转移过程。 杨建敏等[14]研究者也认为，在宫颈癌病灶组织中，Foxm1蛋白的阳性表达率可平均上升40%以上,特别是在合并有明显的宫旁组织浸润的患者中，Foxm1蛋白的表达阳性率可进一步的上升。在探讨Foxm1、HIF-1α与COX-2的表达与宫颈癌患者临床病理特征的关系过程中发现，在发生了淋巴结转移、临床分期较晚或者癌细胞分化程度较差的患者中，Foxm1、HIF-1α与CO X-2的表达阳性率可进一步的上升，提示了相关指标能够显著促进宫颈癌患者临床病理特征的进展,这主要由于 Foxm1、HIF-1α与 COX-2的表达上升，能够促进宫颈癌患者癌细胞分化成熟障碍，导致癌细胞粘附盆腔内淋巴结内皮能力的上升。在合并有HPV感染的宫颈癌患者中，Foxm1、HIF-1α与COX-2的表达也明显的上调，提示了HPV感染与相关因子的关系，HVP感染导致的柱状上皮细胞的病毒整合作用，能够为肿瘤相关因子病理性作用的发挥提供前提[15]。多因素的回归分析研究显示，TNM分期、组织学分级是影响到Foxm1、HIF-1α与COX-2表达的风险性因素,进一步提示了Foxm1、HIF-1α与COX-2与宫颈癌患者病情的紧密关系。

综上所述,在宫颈癌患者中，Foxm1、HIF-1α 与COX-2的表达阳性率明显的上升,同时Foxm1、HIF-1α与COX-2的表达能够促进宫颈癌患者临床分期的进展和淋巴结的转移等,加剧患者临床病理特征的进展。