何秋阳 马顺高

（大理州第一人民医院检验科 云南 大理 671000）

正常情况下，中性粒细胞表面低表达CD64。当机体发生感染时，中性粒细胞表面CD64 表达迅速升高[1]，大量表达的CD64 与其配体结合后。启动并放大免疫反应，包括吞噬作用、抗体依赖细胞介导细胞毒作用和细胞因子的释放[2]，说明中性粒细胞CD64 在感染性疾病中具有较高的临床应用价值。尽管国内外已对中性粒细胞CD64 进行了大量研究，但其是否可用于临床感染的诊断仍存在争议[3]，本文通过研究外周血中性粒细胞CD64 的表达水平在细菌性与病毒性感染患者和健康者的变化特点，探讨外周血中性粒细胞CD64 在感染性疾病的临床应用价值。

1.资料与方法

1.1 一般资料

研究对象根据患者的临床症状、体征、病程及流行病学，随机抽取我院2018 年3 月—2019 年12 月间在我院就诊者80 例，其中男性55 例，女性25 例，年龄（31.5±18.0）岁（1 ～75 岁）。以上病例以血常规、降钙素原（PCT）结果为参考指标，以细菌分离培养、病毒特异性抗体检测及2 周内抗炎或抗病毒疗效为诊断标准，并排除患有自身免疫性疾病或有组织损伤者（如外伤、外科手术等），确诊单纯急性细菌性感染40 例（血培养阳性，抗菌治疗有效，无病毒感染证据）、单纯性病毒性感染40 例（病毒抗体检测初筛和确证均阳性，无细菌及真菌感染证据）及选同期医院门诊体检者40 例为健康对照组，其中男23 例，女17 例，年龄（23.6±10.5）岁（2 ～60 岁），其各项体检指标均在正常范围内，近1 个月内无其他疾病。

1.2 仪器与试剂

血清PCT 采用全自动免疫荧光分析仪（mini VIDAS，法国生物梅里埃公司）及配套试剂检测，PCT ＞0.5μg/L 为阳性；血清病毒特异性抗体采用全自动化学发光免疫分析系统（LIAISON，意大利Dia Sorin 公司）及配套试剂检测：细菌培养鉴定及药敏试验采用血培养仪（BACTEC FX，美国BectonDickinson 公司）和全自动微生物分析系统（phoenix100，美国Becton Dickinson公司）。检测血常规的仪器为日本东亚公司sysmex-XE 2100型血液分析仪及配套试剂，流式细胞仪为Epics xL 型，美国Beckman Coulter，所有试剂均为Beckman 的配套试剂。

1.3 方法

1.3.1 标本采集 所有患者于入院后抗感染治疗前，根据不同试验的要求无菌采集静脉血于相应的采血管中，送检进行血常规、CD64、PCT、病毒特异性抗体及细菌分离培养等检测。

1.3.2 CD64 的FCM 检测 取两管流式专用试管，一管为标本测定管，加入鼠抗人单克隆抗体Pc5-CD45 抗体5μl 和CD64-PE抗体5μl。另一管设为同型对照管，加入Pc5-CD45 抗体5μl 和同型阴性对照抗体5μl，再分别加入50μlEDTA 抗凝的全血标本，混匀后室温避光孵育20min，再加入溶血素1ml，振荡混匀，室温避光孵育10min。检测前流式细胞仪均进行光路、流路检测，在控的情况下才进行检测，根据侧向（SSC）光信号及FL4（Pc5-CD45）和FL2（CD64-PE）荧光信号分别对淋巴细胞群、单核细胞群及中性粒细胞群进行设门，每份标本获取细胞在5000 个以上。以淋巴细胞作为内部阴性对照、单核细胞作为内部阳性对照，获取每份标本中性粒细胞上CD64 表达百分率（见图1 ～3）。

图1 CD45 和SS 设门

图2 CD64 阳性

图3 CD64 阴性

1.4 统计学处理

应用SPSSl9.0 统计软件处理数据。计量资料用均数±标准差（±s）表示。多组间均数的比较采用方差分析，相关性分析采用Pearson 分析，以P＜0.05 为差异有统计学意义。

2.结果

2.1 三组外周血CD64 检测结果分析比较

外周血中性粒细胞CD64 在细菌感染组、病毒感染组、对照组两两比较，细菌感染组表达百分率明显高于病毒感染组和健康对照组，P=0.000 ＜0.05，病毒感染组和对照组相比，P=0.000＞0.05，说明两者间无统计学意义，外周血CD64 在病毒感染组和对照组间无明显区别。见表1。

表1 三组外周血CD64 检测结果分析比较（±s）

表1 三组外周血CD64 检测结果分析比较（±s）

注：**细菌感染组分别和病毒感染组、对照组相比P 均为0.000，＜0.05 差异有统计学意义；*病毒感染组和对照组相比，P=0.000＞0.05，差异有统计学意义。

组别 例数 CD64（%） P 值细菌感染组 40 67.93±19.11 0.000**病毒感染组 40 1.96±1.34 0.000*对照组 40 0.65±0.50

2.2 血流感染者中性粒细胞CD64、PCT 及WBC 计数相关性分析

血流感染者外周血中性粒细胞CD64、PCT 及WBC 计数进行相关性分析，r值分别为：0.88、0.68、0.42，P值均＜0.05，说明三者间有明显相关性，见表2。

表2 血流感染者中性粒细胞CD64、PCT 及WBC 计数相关性分析

2.3 CD64 检测血流感染的敏感性和特异性

以临床确诊（血培养和血清学诊断）为金标准，绘制CD64、PCT、WBC 的受试者工作特征曲线（ROC 曲线）（见图4），从图中可知，PCT、CD64、WBC 曲线下面积（AUC）分别为0.789、0.899、0.743，CD64 的曲线下面积最大，而PCT 和WBC 计数小。CD64 是评价血流感染的较敏感和特异的指标。

图4 CD64、PCT、WBC 的ROC 曲线

根据ROC 曲线计算PCT、CD64、WBC 指数最佳截断值，当CD64 选取20.0 时，诊断血流感染的敏感度为86.2%，特异度为83.9%，You den 系数为0.70；当PCT 选取0.5 时敏感度为73.2%，特异度为74.1%，You den系数为0.48；当WBC计数选取10.0为截值时，敏感度为65.7%，特异度为72.9%，You den 系数为0.41。CD64 的You den 系数较PCT 和WBC 高（Z 值分别为2.47、3.05，P均＜0.05）。

3.讨论

随着临床检测诊断学新的技术与方法不断涌现，作为细菌局部感染、血流感染等的诊断金标准：细菌培养，因其培养阳性率较低，耗时较长，或在标本采集、送检过程中被污染以及标本留放时间过长等因素均会造成假阴性和假阳性结果；而作为广泛应用于临床的感染提示性指标，外周血WBC 计数是人类非特异性免疫的重要组成部分，在机体防御和抵抗病原菌侵袭的过程中起重要作用，通过检测WBC 计数和中性粒细胞百分数（Neu%）可以对感染做出初步诊断，但WBC 计数或Neu%增加并非一定由细菌感染引起，在某些生理情况下，如运动、妊娠、分娩以及某些病理状况如急性创伤、急性出血等，WBC 计数也会增高，而在某些细菌感染如伤寒、副伤寒，Neu%反而会下降；PCT 是临床常用的另一个炎性指标，很多研究表明，PCT 在细菌感染患者体内急剧增高，细菌感染后4h PCT 在血浆中开始升高，6 ～8h 达高峰，并在以后的24h 持续保持高水平，但近年来研究显示其早期诊断细菌感染与非细菌感染的敏感性与特异性具有一定限制性和不一致性，至今难以单凭PCT 来诊断细菌感染[4-5]；我们对40 例血流感染者PCT、WBC、CD64 相关性研究，结果显示三者之间有明显相关性，CD64 和PCT 在细菌性血流感染中具有高度相关性，和WBC 计数具有中度相关性，说明单凭WBC 计数或PCT 结果来判断有无血流感染是存在一定局限性，CD64 可作为细菌性血流感染早期诊断的又一项敏感指标，CD64 和PCT、WBC 联合检测有助于细菌性血流感染的早期诊断。

CD64 是免疫球蛋白IgG 的Fc 段受体（IgGFc-R），主要分布在巨噬细胞、单核细胞及树突状细胞表面，其表达受细胞因子的调控，起连接体液免疫和细胞免疫的桥梁作用。一般情况下，机体感染或内毒素入侵时中性粒细胞CD64 在刺激后4 ～6h 即可升高[6]，在败血症发生后0 ～24h 明显升高，较PCT 具有更高的敏感性，本研究对细菌感染组、病毒感染组和健康对照组间中性粒细胞的CD64 表达情况进行统计分析，结果显示细菌感染组明显高于病毒感染组和健康对照组，P均=0.000 ＜0.05，病毒感染组和健康对照组之间无统计学意义（P=0.777 ＞0.05）说明外周血CD64 在病毒感染组和健康对照组间无明显区别，与苏密龙[7]等报道中性粒细胞CD64 在急性细菌性感染组、急性病毒性感染组均显著高于健康对照组P＜0.001 不一致，但与冯萍[8]等报道相一致，所以中性粒细胞CD64 表达率检测作为血流感染指性在特异性方面优于PCT 和WBC 计数，因为流式细胞术检测能够快速得到结果，所以在速度方面优于微生物培养，但病毒感染者CD64 表达方面存在分歧，有待进一步研究证实。中性粒细胞CD64 表达率可以作为诊断血流感染的敏感指标，流式细胞术检测不仅特异性、敏感性好，方便快捷，具有较好临床应用前景。