黄荟颖 赵振伟 王然 肖劲男

[摘 要] H5N1禽流感病毒是一种高致病性病毒，是禽流感病毒的一种亚型。自1997年以来，该病毒每年都给大型家禽养殖者造成了重大经济损失，近几年在中国和越南还出现了变种病毒。本文对高致病性H5N1禽流感病毒的基本特征、致病力、检测及疫苗等方面的研究情况进行总结，为高致病性H5N1禽流感的有效防控提供科学依据。

[关键词] H5N1禽流感病毒;致病力;检测;疫苗

[中图分类号] S855.3 [文献标识码] A [文章编号] 1674-7909（2020）01-111-2

1 高致病性H5N1禽流感病毒概述

1.1 H5N1禽流感简介

高致病性禽流感是21世纪最令人关注的人畜共患传染病之一，在家禽之间呈流行性传播，造成了严重的经济损失。1997年，从我国香港农场和家禽市场的鸡、鸭和鹅中分离出H5N1流感病毒。经测试，来自我国香港家禽市场的每种H5N1病毒对鸡均具有致死性，在HA1的羧基末端具有多价氨基酸，根据定义，其对禽类具有高致病性。

1.2 H5N1禽流感病毒的进化

H5N1 HPAIV被H5 HA命名法分类为10个进化枝（0～9）和几个第二进化枝，H5N1病毒已于2005—2006年在中国共同传播，而2007—2009年中国家禽和水禽中的已传播病毒属于进化枝2.3.2、2.3.4和7[1]。自2005年以来，在中国北方的鸡只中出现了进化枝7的H5N1 HPAIV。7.2型进化枝病毒于2008年在中国出现。1996年第一次在中国广东的鹅中分离出H5N1病毒[2，3]，在此之后病毒继续在中国进行传播。1997年，在我国香港新界农场的鸡中发生该流感[4]，其基因型与之前的相似。2003年人类H5N1发生表明，鹅/广东样病毒已分化为8种基因型。2005年在中国的青海湖野禽中发生了禽流感，经研究该种病毒后被定义为2.2枝[5]，同年2.2.1进化枝进入埃及。青海湖发生后，H5N1病毒继续在亚洲、欧洲和非洲发生。2009年中期，一组2.3.2种病毒（2.3.2.1a）向西移动，在俄罗斯和欧洲也发现了类似的情况。2015年，在俄罗斯发现了2.3.2.1c病毒。近年来，2.3.4.4支病毒传播广泛，这些病毒还于2014年年底进入美国和加拿大。

1.3 H5N1禽流感病毒对动物的致病力

根据禽流感病毒对家禽的致病力强弱，一般被分为低致病性或高致病性，H5N1禽流感病毒则属于后者，这是由于HA切割位点中多个碱性氨基酸积累的结果。与低致病性禽流感不同的是，高致病性禽流感发病迅速且死亡率高。

1996年发生H5N1禽流感后，世界各国都发生了不同程度的H5N1禽流感，其特征均为家禽、水禽及野禽大面积突然死亡，这些都证实了H5N1对禽类的高致病性。

H5N1禽流感病毒也可以感染哺乳动物，但是由很多因素决定。PA-X是一种甲型流感病毒（IAV）的融合蛋白。已有研究表明，缺失PA-X蛋白后会增强高致病性H5N1禽流感病毒对小鼠的致病性和复制力[6]。同时，对2012、2013年从越南分离出的病毒进行分析发现，其聚合复合体中PA蛋白中的2个氨基酸变化影响了小鼠中病毒聚合酶复合物的活性和毒力。2009年，H5N1和H1N1pdm09的共同流通引起了人们的担忧，即重组事件可能导致高致病性流感病大发生。已有研究表明，从H1N1pdm09获得NS片段会增强小鼠中H5N1的毒力[7]。

2 高致病性H5N1禽流感病毒检测

根据世界动物卫生组织（OIE）的规定，鸡胚病毒分离培养常用于禽流感的检测。我国发布的针对H5N1亚型的国家检测标准有《H5亚型禽流感病毒荧光RT-PCR检测方法》《H5亚型禽流感病毒NASBA检测方法》。近年来，许多研究利用生物传感器来检测病毒，如基于DNA模板的银纳米簇荧光分子信标，只要嵌入相应的识别序列，即可将设计精巧的分子信标方便地用于检测多种毒力基因，包括H5N1病毒的基因[8]。适体传感器也可以用于检测，在诊断和检测分析中适体代表了抗体作为识别剂的替代品，并具有优势。2016年有学者提出了一个结合近红外光与2个光子激发的H5N1病毒基因序列荧光检测的分析平台[9]。同时，已有研究提出了一种基于表面增强拉曼散射的数字微流体技术免疫测定方法，设计了一种夹心免疫测定法，可以灵敏地检测出H5N1病毒[10]。

3 高致病性H5N1禽流感病毒的疫苗

3.1 灭活疫苗

利用反向遗传技术，通过人工制造致病力极弱、很好地适应了在鸡胚胎中生长的H5NI灭活疫苗种毒株，利用该毒株制成禽流感灭活疫苗[11]。

3.2 重组病毒载体疫苗

与灭活疫苗相比，重组的病毒载体疫苗能引发更多的辅助性T细胞产生免疫反应。给病毒基因注射一种保护性外来抗原来获得重组病毒，免疫系统产生相应的目标蛋白，从而诱导免疫反应[12]。目前研制出的针对H5N1禽流感的重组病毒载体疫苗主要有禽痘病毒载体疫苗、新城疫病毒载体疫苗、火鸡疱疹病毒载体疫苗、鸭肠炎病毒载体疫苗以及传染性喉气管炎病毒载体疫苗。

3.3 DNA疫苗

與其他疫苗相比，DNA疫苗具有更多的优势。有研究报道在pCAGGS载体中插入optiHA从而构建出一种DNA疫苗，当肌肉注射给鸡后会引起强烈的免疫反应[13]。为了提高针对H5N1流感病毒的DNA疫苗的功效，有研究在巨细胞病毒启动子的上游和SV40晚期聚腺苷酸信号的下游插入3个重复的Kappa B（κB）基序，这些基序由5 bp核苷酸间隔区隔开，鸡只中具有κB位点的变体刺激了针对目标抗原的更强的体液反应[14]。

4 结语

H5N1禽流感是一种严重传染病，虽然近年来我国未发生过严重的H5N1禽流感，但是我们不能掉以轻心，病毒在不断进化，所以继续研发疫苗依然是重中之重，以保证养殖业稳定发展以及人类生命健康。

參考文献

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