马纪伟 刘 玉 李乐萍

(1.南阳医学高等专科学校，河南 南阳 473058；2.南阳第一高级中学，河南 南阳 473000)

养血当归软胶囊由当归、川芎、白芍、熟地黄、党参、黄芪等8味中药组成，具有补气血，调经的功效。临床上用于贫血虚弱，产后体虚，萎黄肌瘦，月经不调，行经腹痛，产后血虚[1]。本品为软胶囊，所含辅料成分复杂，干扰大，给含量测定带来困难，为控制制剂的质量，我们经实验建立了高效液相色谱法测定制剂中有效成分阿魏酸的含量，方法灵敏、准确、简便。

1 仪器、试剂和药品

日本岛津LC-10AD高效液相色谱仪；岛津SPD-10A紫外检测器；Agilent 1100自动进样器，Agilent 1100色谱工作站。阿魏酸对照品(中国药品生物制品检定所提供，批号1883—9716)；养血当归软胶囊(江西三九药业有限公司，批号：180621，180622，180623)。甲醇(北京化学试剂公司)、乙腈(美国Fisher公司)均为色谱纯；其余试剂为分析纯，水为纯化水。

2 方法与结果

2.1 色谱条件

色谱柱用Diamonsil Cl8柱(150 mm × 4.6 mm，5μm)；流动相为甲醇一乙腈一0.1% 磷酸溶液(10：10：89)；检测波长317nm；柱温30℃；流速1mL·min-1，理论塔板数按阿魏酸计算，应不得低于4 000。

2.2 供试液的制备

2.2.1 供试品溶液的制备 取本品内容物约1.0g，精密称定，置50ml棕色量瓶中，加70%甲醇20 ml，称定重量，超声处理30min，放冷，再称定重量，用70%甲醇补足减失重量，滤过，即得供试品溶液。

2.2.2 对照品溶液的制备 精密取阿魏酸对照品适量，精密称定.置棕色量瓶中，加70% 甲醇溶解并稀释至刻度，制成浓度为0.1mg·mL-1的溶液，作为对照品溶液。

2.2.3 阴性对照溶液的制备 取缺当归、川芎的样品软胶囊内容物1.0g，精密称定，同供试品溶液方法制备，制得阴性对照溶液。

2.2.4 空白试验 按照上述条件色谱，精密吸取供试品溶液、对照品溶液、阴性对照溶液。分别注入测定色谱仪，结果见图1— 3。结果阴性对照溶液在与阿魏酸对照品相同保留时间处未显色谱峰，故认为无干扰。

图1 阿魏酸对照品HPLC色谱图

图2 供试品HPLC色谱图

图3 阴性对照溶液HPLC色谱图

2.3 线性关系考察

精密量取2.2.2项下对照品溶液2.0mL置50mL量瓶中，加70%甲醇稀释至刻度，浓度为10.06μg·mL-1，摇匀，并从中精密吸取1.0，2.0，4.0，6.0，8.0，10.0mL按上述色谱条件进样，记录峰面积，以阿魏酸对照品溶液的浓度为横坐标，峰面积积分值为纵坐标，绘制标准曲线，并计算线性回归方程为Y=104719.69X+3852，r=0.9998，结果表明阿魏酸在0.03～0.527μg。范围内与色谱峰面积积分值呈良好的线性关系。

2.4 精密度试验

在相同的色谱条件下，精密吸取样品溶液(180621)10μL重复进样6次，测定其峰面积，测定阿魏酸峰面积积分值，RSD=0.89%。结果表明本方法精密度良好。

2.5 稳定性试验

取置棕色量瓶中的样品供试液(批号180621)，每隔2h进样10μL，连续测定12h，结果RSD为0.96% 。表明供试品液在避光条件下12h稳定。

2.6 重复性试验

取软胶囊(批号：180622)6份，精密称定，按样品溶液制备项下操作，制成供试品溶液，在上述色谱条件分别进样测定，结果阿魏酸平均含量为0.04571μg/粒，RSD为0.96%(n=6)。

2.7 加样回收率试验

采用加样回收法。取已测得含量的软胶囊(批号180623)6份，每份约0.6 g，精密称定，分别加入已知浓度为0.0351 mg·mL-1的阿魏酸对照品溶液1.0mL按“2.2.1”项下供试品制备方法进行制备，在含量测定方法下进行测定，计算回收率，结果见表1。

表1 加样回收率

2.8 样品的测定

制备3批样品的供试品溶液，分别精密吸取供试品溶液10μL进样，用外标法测定阿魏酸的含量(n=3)，测定结果见表2。

表2 样品的测定

3 讨论

根据有关文献报告，阿魏酸在313nm处有最大吸收[2]。经试验，从阿魏酸对照品的紫外吸收光谱可见在317nm处有最大吸收。

实验采用甲醇一水一冰醋酸系统作为流动相不能达到基线分离[2]，以甲醇一乙腈一0.1% 磷酸溶液(10：10：89)为流动相，得到分离效果较好。

实验结果表明，本文测定方法简便易行，结果准确，重现性好，可有效地控制该制剂的质量。