孙迪 ，张判 ，潘正坤 ，左至恒 ，王超 ，姚东林 ，孙卓琳 ，谢少林 ，3，邹记兴 ，周爱国 ，3

（1.华南农业大学海洋学院，广东 广州 510642；2.清远市农业科技推广服务中心，广东 清远 511510；3.清远市北江水产科学研究所，广东 清远 511510）

仔稚鱼阶段是鱼类早期生活史的关键阶段，鱼类消化机能的早期发育正成为鱼类消化生理学的热点[1-2]，消化道是鱼类消化系统的重要组成部分，其形态学发育直接体现着仔稚鱼消化能力的变化过程，因此，研究仔稚鱼消化道的形态变化，有助于深入的理解鱼类在不同发育时期对特定食物的适应性及消化能力[3-4]。鱼类的应激反应是对各种环境因子的超长刺激所产生的一种非特异性生理反应，是动物机体对超出其生理调节范围的环境变化的一种适应能力[5-6]。但是过长过强的应激反应会对机体产生危害，导致生长发育缓慢、繁殖能力下降、免疫力低下及发病率和死亡率提高等[7]。另外，应激反应致使水产品品质受到影响，甚至可能产生毒素，并在水生动物体内积累，直接危及人类生命安全。

翘嘴鲌又称翘嘴红鲌，具有肌肉营养丰富、口感细嫩、游泳迅猛、善于跳跃、有高度的繁殖力、抗逆性强、病害较少、能耐低氧等优点[8]。随着翘嘴鲌养殖的逐渐兴起，适宜的商品饲料亟待开发。翘嘴鲌出现了各种各样的问题，例如后期饵料残余导致的水质污染、性情暴躁、容易受惊等，这些问题都与翘嘴鲌的饵料有着很大的关系。鱼类肠道黏膜面积大，且与外界环境直接相通，肠黏膜每天与大量的食物抗原和微生物抗原发生广泛地接触，因此，肠道绒膜的生理状态直接关系到机体的健康状况[9-10]。

抗应激饲料可以借助于动物肠道微生物合成的维生素等营养性产物发挥免疫作用[11]。鱼类摄食后，在鱼体内发挥作用，增强鱼类的抗应激能力[12]。它将吸附动物肠道内有害物质、调节肠道菌群平衡、增强内源酶活性、降低消化道粘膜损伤等，系统地达到提高生产性能、改善养殖环境、确保食品安全的效果，与单一产品相比，具有多功能协同效应的优势[13]。该试验通过翘嘴鲌养殖试验，对该抗应激添加剂的使用效果进行系统分析和评价，旨在对该添加剂在生产实践的使用起一定的指导作用。

1 材料与方法

1.1 试验材料

试验用鱼是英德市水产繁殖场自繁自育的翘嘴鲌。挑选体质健壮，大小均匀的翘嘴鲌30尾，平均体质量为72.06 g平均体长为18.38 cm。

试验设投喂含 2%抗应激的饲料 0、7、14、21、28和 35 d（S0、S1、S2、S3、S4、S5），空白对照为 S0，6 个处理，3次重复。饲料由韶关市可利鲜生物科技有限公司加工制成膨化料，基础饲料配方及营养水平见表1。

表1 试验饲料组成及营养水平（干物质基础%）

1.2 试验方法

1.2.1 饲养管理 试验场所为英德市一小型自然湖泊。选取健康翘嘴鲌幼鱼分配到1个的网箱（1.0 m×1.0 m×1.5 m）中进行饲养，为了防止翘嘴鲌跳出网箱，均装上网箱盖。网箱水深保持在1 m左右，一共30尾。投喂试验饲料。每天08：00和16：30各投喂1次，投喂量为鱼体重的2%～4%，准确称量每天投喂的饲料重量。每日监测水质情况：水温24.5～31.5℃；溶氧＞5 mg/L；pH 值 6.8～7.8；氨氮＜0.5 mg/L。

1.2.2 测定指标 饲养后，停食24 h，每次随机取翘嘴鲌幼鱼3尾，测体长、体质量，在冰上解剖，解剖后取肠道分离肠系膜脂肪团。用0.8%生理盐水轻轻冲洗，Bouin氏液固定石蜡切片，厚度5μm，H-E染色，中性树胶封片，dm 500显微镜下观察并摄影，测微尺计量。分别测量肠道横切面积、肌层厚度、黏膜褶皱高度、褶皱宽度、褶皱个数。本试验所有测量对象的选择，均遵守组织学样品采集与图像数据测量中的随机等距原则。

黏膜褶皱个数：是指肠腔横切面上粘膜褶皱的个数。

褶皱高度：用粘膜褶皱顶端至基部凹陷处的垂直距离表示，每张切片随机选取10个褶皱进行测量，取平均值。

褶皱宽度：指褶皱基部、褶皱高度1/3处及2/3处褶皱宽度的平均值，每张切片随机选取10个褶皱计算，取平均值。

肌层厚度：在每张切片中随机测量30处肌层的厚度，取平均值。

横切面积：紧贴肠管外壁画线，其圈中的面积被认为是肠道横切面积，分别测量3次，取平均值[14]。

1.3 组织切片染色

取固定好的组织样品进行脱水，石蜡包埋和切片，HE染色，显微镜镜检，图像采集分析。

1.4 数据处理

数据采用SPSS 17.0软件进行处理，以平均值±标准差（SD）表示，单因素方差分析中的tukey比较分析组内的差异统计学意义。

2 结果与分析

2.1 对翘嘴鲌肌层厚度的影响数据分析

由表2知，肌层厚度总体呈现随着投喂时间的增加逐渐增厚。同对照组相比，S1、S2与S3无明显差异，S4、S5组出现极具统计学意义差异（P＜0.05）。从S3开始增长迅速。肌层厚度的最大值出现在S5组，对照最小。

表2 不同处理组之间肌层厚度的影响

2.2 对翘嘴鲌褶皱高度的影响数据分析

由表3知，褶皱高度总体呈现随着投喂时间的增加逐渐增厚。同对照组相比，S1、S2、S3差异不显著，S4、S5 出现极具统计学意义差异（P＜0.05），各组之间S4开始增厚明显，褶皱高度的最大值出现在S5组，对照最小。

表3 不同处理组之间褶皱高度的影响

2.3 对翘嘴鲌肠道褶皱宽度的影响数据分析

由表4知，褶皱宽度总体呈现随着投喂时间的增加逐渐增大。同对照组相比，S1、S2、S3和S4差异均不具统计学意义，S5与对照组具统计学意义差异，S4开始急剧变宽。

表4 不同处理组之间褶皱宽度的影响

2.4 对翘嘴鲌肠道横截面积的影响数据分析

由表5知，横截面积总体呈现随着投喂时间的增加逐渐变大。同对照组相比，每组差异都极具统计学意义（P＜0.05），S1组和S3组增长明显，横截面积的最大值出现在S5组，对照最小。

表5 不同处理组之间横截面积的影响

2.5 抗应激饲料对翘嘴鲌肠道褶皱个数的影响数据分析

由表6知，黏膜褶皱个数，S0～S5依次增加。由S0组的24增加到S5组的34。

3 讨论

3.1 抗应激饲料对翘嘴鲌肠道肌层厚度的影响

表6 不同处理组之间褶皱个数的影响

翘嘴鲌肠道部位的肌肉组织以平滑肌为主，内层为环肌，外层为纵肌，最外层是浆膜，与黏膜下层的疏松结缔组织连接形成网状，增加了肠道的韧性与弹性。使之有迅速而强大的收缩能力，利于推动食物进行消化[15]。由试验得，在饲料中添加了抗应激添加剂后，翘嘴鲌的肠道褶皱个数比对照有所上升。同对照组相比，S1、S2与S3无明显差异，S4、S5组差异具统计学意义（P＜0.05）。从S3开始增长迅速。肌层厚度的最大值出现在S5组，对照最小。且增长速率随着时间的增加而变缓。结果表明，使用抗应激饲料可以改善翘嘴鲌幼鱼肠道结构，促进肠绒毛的发育，保护肠道结构完整性，平滑肌运动可使黏膜上的绒毛产生节律性伸缩和摆动，如同泵的作用，促使营养物质从肠腔进入绒毛，加速绒毛内血液和淋巴的流，从而有利于吸收。

3.2 抗应激饲料对翘嘴鲌肠道褶皱高度的影响

肠道是水产动物营养成分消化吸收的主要器官，它的结构与功能的完整性直接影响营养物质吸收以及利用效率[16]，特别是肠道的黏膜高度，是衡量小肠消化吸收功能的重要指标。由试验得，褶皱高度方面，总体呈现随着时间的增加逐渐增厚。同对照组相比，S1、S2、S3差异不具统计学意义，S4、S5差异具统计学意义（P＜0.05），各组之间S4开始增厚明显，褶皱高度的最大值出现在S5组，对照最小。肠道黏膜密集度没有显著变化，褶皱的高度与其肠上皮细胞数量有关，当褶皱高度变高时，肠上皮细胞数量增多，对养分的吸收能力较高，反之，高度短时成熟的绒毛细胞减少，对养分的吸收能力就会降低[17]。上皮由单层柱状上皮细胞构成，包含有吸收细胞和杯状细胞两种，主要是吸收细胞。这种细胞一般呈高柱状，游离面具有明显的纹状缘，即电镜下所见的微绒毛，这种微绒毛可以增加表面的吸收面积15～20倍。

3.3 抗应激饲料对翘嘴鲌肠道褶皱宽度的影响

翘嘴鲌没有胃，胃肠分化不明显，没有形成真正的胃，肠道较短。肠道各段组织结构基本相同，黏膜向肠腔内凸起形成皱襞。褶皱宽度方面，总体呈现随着时间的增加逐渐增大。同对照组相比，S1、S2、S3和S4差异不具统计学意义，S5与对照组差异有统计学意义，S4开始急剧变宽，各试验组之间差异不具统计学意义，褶皱宽度的最小值出现在S0组，对照最窄。因此加入抗应激饲料后，肠壁褶皱变得深，从而可能提高了后肠的消化能力，其中以35 d处理组最为明显。

3.4 抗应激饲料对翘嘴鲌肠道横切面积与褶皱个数的影响

肠道的正常形态结构与生理功能是充分消化并吸收营养物质的重要保证，路纪琪等认为，褶皱变得较低平而数目较多，它具有暂存和一定消化、吸收功能[18]。该试验中，随着时间增加褶皱个数依次增加，S0～S5依次增加。横截面积方面，总体呈现随着时间的增加逐渐变大。同对照组相比，每组差异都具统计学意义（P＜0.05），S1组和S3组增长明显，横截面积的最大值出现在S5组，对照组最小。

3.5 抗应激饲料作为抗应激饲料的发展前景

鱼类是低等水生动物，任何环境的改变都能引起鱼体产生应激反应，其中非生物因素有温度、盐度、pH、饲料匮乏、营养失衡、劣质药物和添加剂等，生物因素包括种间种内竞争以及致病菌侵害等。这些不利因素都会引起机体的应激反应，影响鱼类的健康生活[19]。在正常情况下，在外来有害病原菌侵入时肠道粘膜会首先起到防御保护作用。但如果肠道粘膜受到应激或一些病原微生物影响而遭到破坏时，机体的防御技能就会发生技能障碍，而导致大量菌群的入侵以及对营养物质消化吸收功能的减退[17]。该试验所使用的抗应激添加剂对翘嘴鲌肠道结构有明显的改善，促进营养物质的吸收，提高抗应激能力，对促进养殖业的发展有积极的促进作用，寡糖能够抑制肠道有害菌，减少粪便中有害气体的产生，这对于改善动物的生长环境具有一定的意义。在当前集约化养殖的环境下，抗应激饲料添加剂顺应了市场发展的需求，必将有良好的发展。