颜少宾 张好艳 马瑞娟 俞明亮 周平 金光 郭瑞 廖汝玉

摘要：【目的】研究不同透光纸袋处理后对红肉桃果肉色泽及类胡萝卜素成分及其含量的变化。 【方法】以红肉桃品种半斤桃为试材，于盛花后40d分别进行50%透光的黄色单层袋、O透光的外黄内黑双层袋处理，以不处理（100%透光）为对照。分别于盛花后71、82、90、95 d测定半斤桃果肉的色差及类胡萝卜素含量的变化情况。【结果】50%透光处理对果肉B值的影响呈先升后降的趋势，对色差C、H值没有影响，且仅在盛花后82 d时降低了色差A值;0透光处理对果肉色差A、C值没有影响，且仅在果实成熟时降低了色差B、H值;不同透光强度在果实成熟时均显著提高了果肉色差L值。不同透光强度处理对果肉类胡萝卜素5个成分总含量、B一隐黄质、C【一胡萝卜素均沒有影响;果实成熟时，不同透光强度处理均降低了果肉B一胡萝卜素含量，但50%透光处理显著提高了玉米黄素含量，0透光处理显著提高了叶黄素含量。 【结论】在田间栽培生产过程中，可在盛花后40d对半斤桃进行50%透光套袋处理，提高果肉玉米黄素含量，或用O透光套袋处理，提高果肉叶黄素含量。

关键词：半斤桃;套袋;类胡萝卜素;色差

中图分类号：S 662.1

文献标志码：A

文章编号：1008-0384（ 2020） 10-1086-07

0 引言

【研究意义】桃是蔷薇科李属多年生落叶果树。桃果肉颜色有白、黄、红、绿等4种[1]。由于遗传资源以及果实综合经济性状等因素所限，红肉类型在国内外桃产业中所占比例较少。现有研究表明红肉桃果肉中总酚、花色苷含量及其抗氧化能力均高于白肉桃和黄肉桃[2-5]，具有很好的保健价值。尤其在清除自由基[6]、延缓衰老[7]、提高人体免疫力[8]、防癌抗癌[9]等方面起着重要作用。但关注红肉桃果实中的类胡萝卜素含量变化的报道鲜见，特别是在套袋情况下相关组分的变化需要进一步明确。【前人研究进展】龚林忠[10]等对红、白、黄等3种不同果肉颜色的桃进行研究表明，红肉桃和白肉桃的果肉中类胡萝卜素含量随着果实的生长发育均呈下降趋势，果实成熟时几乎为零。章秋平[11]等对红、白、黄等3种不同果肉颜色的桃进行检测分析表明，随着果实成熟度的增加，天津水蜜等红肉桃果实中类胡萝卜素含量不断升高。许建兰[2]等对红、白、黄等3种不同果肉颜色的桃果实进行分析发现，半斤桃果实的类胡萝卜素总含量和花色苷含量均随着果实的生长发育呈逐渐上升的趋势。王少敏等[12]研究表明，红富士果实套袋后，3种色素含量明显低于对照。柳蕴芬[13]等采用黑色内袋的小林袋对大把撸红肉桃进行套袋处理，明显降低了类胡萝卜素总含量和花青苷含量。王安柱[14]和陈栋[15]等研究均表明，套袋降低成熟期桃果皮中叶绿素和类胡萝卜素含量，提高桃果皮中花青苷含量。说明不同遮光类型和强度处理对不同品种果实中色素含量有着差异影响。【本研究切入点】目前，对红肉桃果实发育阶段类胡萝卜素总含量的积累变化已经研究很多，且不同品种的红肉桃果实发育阶段类胡萝卜素总含量的积累变化差异也较大;同时，前期颜少宾[16]等对红、白、黄等3种不同果肉颜色的桃果实分析发现，红肉桃果肉中含有叶黄素、玉米黄素、B.胡萝卜素，但透光强度对红肉桃果实类胡萝卜素成分及其含量的影响等方面研究甚少。【拟解决的关键问题】本试验拟对红肉桃进行遮光处理，从而进一步分析不同透光强度对红肉桃果实发育过程中果肉色泽和类胡萝卜素成分及其含量的影响，为红肉桃果实类胡萝卜素代谢机理研究及针对性生产栽培提供依据和参考。

1 材料与方法

1.1 试验材料

试验材料为树体健壮、长势基本一致的5年生红肉桃品种半斤桃，砧木均为毛桃，定植株行距3m×5m，三主枝自然开心形，南北行向，常规栽培措施管理，种植于国家果树种质南京桃资源圃。

试验所选用果袋：黄色单层纸袋，透光率50%，规格198 mm×153 mm，购自平度市金禾裕农果袋厂;外黄内黑双层袋，透光率0，规格198 mm×153 mm，购自莱阳市爱华果袋厂。试验所用果袋的透光率采用Kurzanleitungtesto 540照度仪检测，重复3次。

所用试剂丙酮、甲醇、甲基叔丁基醚、叶黄素、β一隐黄质、β一胡萝卜素、β一阿朴-8-胡萝卜醛、α-胡萝卜素、玉米黄素，均为分析纯以上级别。

1.2 试验方法

选择不同透光率的纸袋，在半斤桃盛花后40 d，在同一株树上选取大小、发育相对一致的正常半斤桃桃果实进行2种试验处理，即采用50%透光的黄色单层袋（I，50%透光处理）和0透光的外黄内黑双层袋（Ⅱ，0%透光处理）2种类型纸袋进行套袋，以不处理（l00%透光）作为对照（CK），重复3次。处理前进行疏果，留果量基本一致，并喷施杀虫杀菌剂。果面开始转色为第一个采样点（即盛花后71d）;之后每隔10 d左右采1次，直至果实成熟（即在盛花后71、82、90、95 d进行采样）。每个处理套袋70个果，每处理按东、西、南、北4个方位随机采取果实10个，迅速带回实验室进行果肉色差的测定，每个果肉测4个点。果肉混合后液氮速冻，于-20℃保存备用。重复3次。

1.3 测定指标

1.3.1 果肉色差的测定 采用Color Quest XE色差计测定果肉的色差A、B、L值，根据公式计算C、H值[16]。色差A值代表红色饱和度（正值代表红色，正值越大，红色越深）;色差B值代表黄色饱和度（正值代表黄色，正值越大，黄色越深）;色差L值代表亮度值;色差C值代表色彩饱和度;色差H值代表色度角（H=0，紫红色;H=90，黄色;H=180，绿色）。

1.3.2 果肉类胡萝卜、素成分及其含量的测定 果肉类胡萝卜素组分叶黄素、玉米黄素、β-隐黄质、α-胡萝卜素、B.胡萝卜素等标准曲线的制备：以0.005、0.010、 0.050、 0.100、 0.250、 0.500、 0.750、 1.000、5.000 mg.L^-1的标准使用溶液制作标准曲线。

果肉类胡萝卜素成分的提取测定方法[17]：以丙酮为有机提取剂，不经过皂化直接提取。经过0.22 mm有机滤头过滤，采用YMC-C30色谱柱进行测定，流动相A：甲醇，流动相B：甲基叔丁基醚，流动相C：水;流速：1.0 mL.min^-1; UV 450 nm;温度为25℃;时间：100 min;进样：20 UL;梯度冲洗：0—90 min，81%A/15%B/4%C～6%A/90%B/4%C：92 min，81%A/15%B/4%C。

1.4 数据处理

采用Excel和SPSS 24.0软件对数据进行统计，分析类胡萝卜素组分叶黄素、玉米黄素、β-隐黄质、α一胡萝卜素、β一胡萝卜素的含量及其分别与色差A、B、C、L、H值之间的相关系数和显著性水平。

2 结果与分析

2.1 不同透光率纸袋对半斤桃果实发育后期果肉色差的影响

从表1可以看出，随着果实的生长发育，对照组中半斤桃果肉色差A值逐渐升高，果肉色差L值呈逐渐降低，果肉色差B、C和H值呈现先降后升的趋势，且盛花后82 d是色差C和H值的转折点，而色差B值的转折点在盛花后90 d。

与对照相比，不同透光率纸袋处理均对果肉色差C值没有影响;对果肉色差A值仅在盛花后82 d时有影响，即50%透光处理降低了果肉色差A值，0透光处理对果肉色差A值的影响在0.05水平差异不显著。不同透光率纸袋处理对果肉色差B、H值的影响不同，50%透光处理后，果肉色差B值呈先升后降的趋势，对色差H值没有影响;0透光处理仅在果实成熟时降低果肉色差B、H值。50%透光处理对色差L值的影响不呈规律;0透光处理在果实成熟前对色差L值影响不明显;果实成熟时，2个处理均显著提高果肉色差L值。

2.2 不同透光率纸袋对‘半斤桃果实发育后期果肉类胡萝卜、素组分的影响

随着果实的生长发育，对照组中半斤桃果肉叶黄素含量逐渐降低，果实成熟时降为0;玉米黄素含量逐渐升高，果实成熟时达到最大值，含量为0.805 7μg.g^-1.;β-隐黄质均为0;α-胡萝卜素含量逐渐降低，在盛花后82 d至果实成熟，其含量均为0;β一胡萝卜素含量逐渐降低，果实成熟时其含量降为0.143 9 μg.g^-1。

与对照相比，不同透光率纸袋处理的果肉类胡萝卜素组分的整体变化趋势与对照组基本一致，但不同透光率纸袋处理对果肉类胡萝卜素不同时期不同成分有着差异影响。如图1（1）所示，50%透光处理提高了果肉叶黄素含量，但果实成熟时，与对照组一致均降为0;0透光处理对果肉叶黄素含量呈先升后降再升的趋势，盛花后82 d为显著降低的关键点，盛花后90 d与对照组差异不明显，果实成熟时，显著提高了果肉叶黄素含量，其含量为0.21 μg.g^-1。如图1 （2）所示，仅在果实成熟时，50%透光处理提高了果肉玉米黄素含量。如图1 （3）所示，2个处理对果肉β一隐黄质含量没有影响。如图1 （4）所示，仅在盛花后82 d之前，2个处理提高了果肉α-胡萝卜素含量。如图1 （5）所示，50%透光处理降低了果肉B一胡萝卜素含量;0透光处理呈先升后降的趋势，差异不显著;果实成熟时，2个处理果肉β一胡萝卜素含量均降为0，与对照组差异性显著。且对照组、50%透光处理、0透光处理的半斤桃果肉类胡萝卜素5个成分总含量在果实发育后期均无显著性差异，说明不同透光强度套袋处理对果肉类胡萝卜素5个成分的总含量没有影响。

2.3 半斤桃果实发育后期果肉类胡萝卜素成分与色差的相关性

半斤桃果实发育后期果肉类胡萝卜素成分与色差指标的相关性如表2所示。半斤桃果肉B.隐黄质在果实发育过程均未检测到，在统计学上不进行相关性统计。叶黄素、β胡萝卜素分别与红色饱和度A值、色彩饱和度C值、色度角H值在0.0l%显著水平上负相关，与黄色饱和度B值、亮度L值在0.01%显著水平上正相关;玉米黄素则相反，即与红色饱和度A值、色彩饱和度C值、色度角H值在0.01%显著水平上正相关，与黄色饱和度B值、亮度L值在0.01%显著水平上负相关;α一胡萝卜素与红色饱和度A值、黄色饱和度B值、色彩饱和度C值的相关性同叶黄素和β一胡萝卜素，与色差L值在0.05%显著水平上正相关，与色度角H值在统计学上不相关。说明类胡萝卜素的各个成分与果肉色差指标有一定的相关性，且玉米黄素与红色饱和度的相关性系数达0.911。

3 討论

李玉阔[18]等采用不透光纸袋对2种类型红肉猕猴桃进行遮光处理，结果表明不透光纸袋对果肉和果心色度角并无显著影响。柳蕴芬[13]等对红肉桃品种“大把撸”进行遮光处理，结果表明遮光抑制了果肉花色苷积累和果肉变红。廖振军[19]等也发现.光照较弱时，桃果实中花青素含量较少，果实颜色不红。本研究结果表明，50%透光处理对色度角没影响，在盛花后82 d时能降低果肉红色饱和度，而0透光处理能降低果肉色度角、对红色饱和度没影响;说明不同透光率纸袋处理对果肉红颜色和色度角的影响不同的，但不同透光率纸袋处理对果肉色泽饱和度均没影响，且在果实成熟时，均能降低果肉黄色饱和度并提高果肉亮度值。这可能是不同试验处理采用不同透光试材及不同品种之间存在差异而导致结果不一样。因为果肉的颜色是由各种色素的不同比例所决定，同时还要受其他物质的影响[11]，只从外观色泽及果肉色差变化不足以说明果肉色素的积累和变化。

盛花后82 d是半斤桃果肉色差A值由负值转为正值的点，是色差C和H值呈现先降后升的转折点;同时，也是果肉叶黄素及α-胡萝卜素含量变化的关键转折点。许建兰[2]等研究也表明半斤桃果实成熟前20 d开始花色苷以较快的速率积累。因此，推测盛花后82 d左右可能是半斤桃果实色素代谢的重要关键时期，为今后半斤桃果实类胡萝卜素代谢的进一步研究提供参考。

Brandi等[20]研究表明，白肉桃和黃肉桃中的类胡萝卜素生物合成基因的表达水平无显著差异，白肉桃果肉之所以显白色，是因为在CCD（类胡萝卜素裂解双加氧酶）的作用下，其果肉中的类胡萝卜素发生了降解。半斤桃幼果期主要以叶黄素和β-胡萝卜素为主，说明半斤桃幼果期的类胡萝卜素生物合成途径可能与黄肉桃类似，是叶绿体途径[21]。随着果实的生长发育，叶绿体逐步转化为有色体[22]，但果实成熟时，红肉桃与黄肉桃的呈色有色体存在较大差异。Wisutiamonkul[23]等研究表明，增强黄肉品种番木瓜中LCYb（番茄红素β一环化酶）基因的表达，果实中番茄红素含量保持较低水平，β-胡萝卜素和β-隐黄素含量则显著增高;抑制红肉品种番木瓜中LCYb基因的表达，果实中番茄红素含量持续增加，β-胡萝卜素和β-隐黄素含量则基本保持较低水平。在红肉品种柑橘果肉中LCYb基因的表达水平较低，这可能与果实中番茄红素的大量积累有关[23-25]。本研究也表明半斤桃果肉中β-胡萝卜素含量也随着果实生长发育逐渐降低，且检测不到B.隐黄质，是否与LCYb基因的表达水平有关，有待进一步验证。p-HY（β一羟基酶）分别以β一胡萝卜素为底物，合成β-隐黄素和玉米黄素，以α-.胡萝卜素为底物，合成叶黄素[26-27]。遮光条件促进成熟期HYB基因的表达，β-胡萝卜素的含量降低，玉米黄素的含量增加[28]。本文50%透光处理佐证了这一观点;但0透光处理表现出降低β-胡萝卜素含量，对玉米黄素含量的影响不明显，反而提高了叶黄素含量。这是否是因为0透光处理，没有光照强度或影响了其他光质的射人，促进了p-HY以α-胡萝卜素为底物合成叶黄素途径，有待进一步研究。

4 结论

综上所述，50%透光处理对果肉B值的影响呈先升后降的趋势，对色差C、H值没有影响，且仅在盛花后82 d时降低了色差A值;0透光处理对果肉色差A、C值没有影响，且仅在果实成熟时降低了色差B、H值;不同透光率纸袋处理均在果实成熟时显著提高了果肉色差L值。不同透光率纸袋处理对果肉类胡萝卜素5个组分总含量、β-隐黄质、α-胡萝卜素均没有影响;果实成熟时，不同透光率纸袋处理均降低了果肉β一胡萝卜素含量，且50%透光处理显著提高了玉米黄素含量.0透光处理显著提高了叶黄素含量。叶黄素和玉米黄素在减少与衰老相关联的网膜黄斑退化和白内障等严重眼疾发生中起重要作用[29-30]。因此，在田间栽培生产过程中，可在盛花后40 d对半斤桃进行50%透光套袋处理，提高果肉玉米黄素含量，或用0透光套袋处理，提高果肉叶黄素含量。

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（责任编辑：黄爱萍）

作者简介：颜少宾（1988-），女，硕士，助理研究员，主要从事桃种质资源和果实品质研究（E-mail： ysb20lO_good@163.com）

通信作者：俞明亮（1965-），男，博士，研究员，主要从事桃资源和育种研究（E-mail： mly1008@aliyun.com）