赫一鸣，刘 鑫，王玥玥，曹 雪，贡济宇，蔡广知

（长春中医药大学，吉林 长春 130117）

车前子为车前科植物车前Plantago asiaticaL.或平车前Plantago depressaWilld.的干燥成熟种子［1］，始载于《神农本草经》［2］，其味甘，具有清热利尿通淋、渗湿止渴、明目、祛痰的功效，用于热淋湿痛、水肿胀满、暑湿泄泻、目赤肿痛、痰热咳嗽等症状的治疗［3-4］。炒车前子为车前子清炒后的炮制品，对便秘具有良好疗效［5］，并可增强生品清热利尿、肾湿通淋的作用［6］。

2015 年版《中国药典》一部收载了肾炎解热片、八正合剂、金花明目丸、除湿白带丸、益肾灵颗粒等含有炒车前子的中成药，广东、河南、上海等地在炮制规范中以车前子为炒车前子质控指标，不能体现该药材炒制前后各项指标的变化。因此，本实验参考药典及相关文献，采用TLC、HPLC 法分别对炒车前子中主要活性成分京尼平苷酸和毛蕊花糖苷进行定性鉴别、定量分析，从性状、鉴别、检查方面进行系统研究［7］，以期更好地控制该药材质量，保证临床疗效［8］。

1 材料

DGG-9030 电热恒温鼓风干燥箱（上海森信实验仪器有限公司）；电子天平（万分之一、十万分之一，瑞士梅特勒-托利多公司）；HH-S24数显恒温水浴锅（金坛市荣华仪器制造有限公司）；LC-2030 高效液相色谱仪（日本岛津公司）。京尼平苷酸（批号111828-201604）、毛蕊花糖苷（批号111530-201713）对照品购于中国食品药品检定研究院。10 批车前子购于宏检大药房等地，经长春中医药大学药学院中药资源与鉴定教研组蔡广知副教授鉴定为正品，具体见表1。甲醇为色谱纯（美国Fisher 公司；水为屈臣氏蒸馏水（广州屈臣氏食品饮料有限公司）。

表1 样品信息Tab.1 Information of samples

2 方法与结果

2.1 炒制品制备［9］取适量净药材于炒制容器中，用文火炒至略有爆声、有香气溢出时取出，晾凉，即得。

2.2 性状特征 本品呈椭圆形、不规则长圆形或三角状长圆形，略扁［7］；一面有灰白色凹点状种脐，长（2±0.5）mm，宽（1±0.3）mm，表面有细皱纹，显黄棕色至黑褐色［1］；质硬，气焦香。

2.3 TLC 定性鉴别

2.3.1 对照品溶液制备 精密称取毛蕊花糖苷、京尼平苷酸对照品各1 mg，甲醇制成1 mg／mL，即得［1］。

2.3.2 供试品溶液制备 取本品粗粉1 g，10 mL甲醇超声30 min，滤过，蒸干，残渣加2 mL 甲醇溶解，即得［1］。

2.3.3 鉴别方法 采用2015 年版《中国药典》薄层色谱法（通则0502）。吸取对照品、供试品溶液各5 μL，点于同一硅胶GF254薄层板上，以乙酸乙酯-甲醇-甲酸-水（18∶2∶1.5∶1）为展开剂，置于254 nm 紫外灯下观察，发现供试品色谱在对照品相应位置上显相同颜色斑点［1］；以0.5%香草醛硫酸溶液为显色剂，105 ℃下加热至斑点清晰可见，也发现上述情况［9-10］。见图1。

图1 炒车前子TLC 色谱图Fig.1 TLC chromatograms of Plantaginis Semen Tostum

2.4 检查

2.4.1 水分、总灰分、酸不溶性灰分 采用2015年版《中国药典》四部方法测定［11］，结果见表2。

表2 水分、总灰分、酸不溶性灰分、膨胀度测定结果（n＝3）Tab.2 Results of content determination of water，total ash，acid-insoluble ash and turgidity（n＝3）

2.4.2 膨胀度 称取本品1 g，采用2015 年版《中国药典》膨胀度测定法（通则2101）测定［1］，结果见表2。以水分、总灰分、酸不溶性灰分平均含有量的120%，膨胀度的80%制定限度，暂定前三者分别不超过0.032%、5.2%、0.52%，后者不低于3.9［12］。

2.5 含有量测定

2.5.1 对照品溶液制备［1］精密称取毛蕊花糖苷、京尼平苷酸对照品适量，置于棕色量瓶中，60%甲醇制成1 mg／mL，即得。

2.5.2 供试品溶液制备［1］取本品粉末（过2 号筛）约1 g，精密称定，置于具塞锥形瓶中，加入60%甲醇50 mL，称定质量，加热回流2 h 后放冷，60%甲醇补足减失的质量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。

2.5.3 色谱条件［1］Hypersil ODS C18色谱柱（4.6 mm×250 mm，2.5 μm）；流动相甲醇（A）-［醋酸-水（0.5∶100）］（B），梯度洗脱（0～1 min，5% A；1～40 min，5%～60% A；40～50 min，60%～5% A）；体积流量1 mL／min；柱温30 ℃；检测波长254 nm；进样量10 μL，色谱图见图2。由此可知，色谱峰分离度良好，阴性无干扰，理论塔板数按京尼平苷酸峰计不低于3 000。

图2 各成分HPLC 色谱图Fig.2 HPLC charomatograms of various constituents

2.6 方法学考察

2.6.1 线性关系考察［13］分别精密吸取含0.016、0.032、0.063、0.127、0.254、0.508 mg／mL 京尼平苷酸，0.016、0.032、0.065、0.130、0.260、0.520 mg／mL 毛蕊花糖苷的对照品溶液，在“2.5.3”项色谱条件下进样测定。以进样量为横坐标（X），峰面积为纵坐标（Y）进行回归，得京尼平苷酸、毛蕊花糖苷方程分别为Y＝6 891 949.924X－15 839.402 99（r＝0.999 3）、Y＝6 621 703.133X－28 736.930 35（r＝0.999 5），分别在0.793 75～25.400、0.812 5～26.00 μg 范围内线性关系良好。

2.6.2 精密度试验［14-15］精密吸取同一供试品溶液10 μL，在“2.5.3”项色谱条件下进样测定6次，测得供试品溶液峰面积RSD 为1.6%，表明仪器精密度良好［15］。

2.6.3 稳定性试验［16］精密吸取同一对照品、供试品溶液各10 μL，于0、2、4、6、8、10、12 h在“2.5.3”项色谱条件下进样测定，测得对照品、供试品溶液峰面积RSD 分别为2.8%、2.1%，表明溶液在12 h 内稳定性良好。

2.6.4 重复性试验 取同一批本品（批号180921），按“2.5.2”项下方法制备6 份供试品溶液，在“2.5.3”项色谱条件下进样测定，测得京尼平苷酸、毛蕊花糖苷含有量RSD 分别为0.24%、0.28%，表明该方法重复性良好。

2.6.5 加样回收率试验 精密称取含有量已知的本品6 份，精密加入适量对照品，按“2.5.2”项下方法制备供试品溶液，在“2.5.3”项色谱条件下进样测定，计算回收率。结果，京尼平苷酸、毛蕊花糖苷平均加样回收率分别为99.5%、99.8%，RSD 分别为1.2%、2.5%。

2.7 样品含有量测定 按“2.5.2”项下方法制备供试品（炒制前、炒制后）溶液，在“2.5.3”项色谱条件下进样测定，计算含有量，结果见表3。根据测定结果，结合2015 年版《中国药典》相关规定，暂定京尼平苷酸、毛蕊花糖苷含有量分别不少于0.90%、0.55%。

表3 各成分含有量测定结果Tab.3 Results of content determination of various constituents

3 讨论

车前子炒制后，京尼平苷酸含有量较生品升高35%，而毛蕊花糖苷升高38%，可能是炒制会破坏药材中大量黏液质，使有效成分易煎出［17］，具体有待进一步研究。另外，由于炒制后车前子种皮内表皮、外表皮细胞被破坏，内胚乳细胞蛋白质变性，故不将显微鉴别列入该药材质量标准中。

炒车前子作为常用药材，目前尚无明确的炮制规范和质量标准。本实验所建立的炒车前子质量标准可操作性强，能指导炮制品规范化生产，为保证其临床疗效提供依据，也对监督相关药物质量有着重要意义。