李世宏,杨亚军,秦 哲,刘希望,孔晓军,焦增华,李剑勇

(中国农业科学院兰州畜牧与兽药研究所 农业部兽用药物创制重点实验室甘肃省新兽药工程重点实验室,甘肃 兰州 730050)

奶牛子宫内膜炎是子宫内膜受病原微生物感染而发生的炎症,是奶牛养殖业中的3 大常见病之一,我国该病发病率一般为5%～25%,最高可达30%,平均20% 左右。该病可导致奶牛不孕,胎间距延长,奶产量也降低,严重影响奶牛业的持续健康发展,给奶牛业造成巨大的经济损失,我国每年因该病治疗造成的人力和医药费损失高达数十亿元人民币。国内外治疗本病的药物和方法也不少,但较理想的不多。为此,我们科研团队研制了治疗奶牛子宫内膜炎的专用纯中药药剂,进行了临床治疗和预防试验,取得了满意的结果。

1 材料与方法

1.1 主要设备与器材 全自动动物血细胞分析仪(迈瑞BC2800V)和配套试剂、生物组织包埋机(KD-BM,浙江省金华市科迪仪器设备有限公司)、石蜡切片机(德国徕卡公司)、显微镜、冰箱(海尔BCD-257SL)、离心机、水浴锅、20 mL 离心管、20 mL注射器、真空采血管、子宫内膜组织活检器、超声波清洗机及实验室常用器皿等。

1.2 药品 宫净液,纯中药合剂,棕褐色液体,久置有微量沉淀,气香,味微酸苦;规格为100 mL/瓶、500 mL/瓶。中国农业科学院兰州畜牧与兽药研究所研制中试产品。

1.3 治疗试验

1.3.1 病例 甘肃荷斯坦奶牛繁育示范中心、临洮宏达奶牛养殖等6 个奶牛养殖场的患子宫内膜炎奶牛,共收治155 例。

1.3.2 用法用量 用药前,试验牛必须严格执行外阴部清洗与消毒措施。以直肠把握子宫颈法通过输精管将药液注入子宫腔内,每次100 mL,隔日1次,3～4 次1 个疗程,一般1 个疗程即可治愈。注意,灌注的宫净液药液温度应接近患牛体温。

1.3.3 疗效判定 用药前后治疗奶牛子宫内膜炎的疗效判定标准可以为试验用药提供理论和实践依据。具体判定标准见表1。

表1 治疗奶牛子宫内膜炎疗效判定标准

1.4 对患牛血液白细胞和子宫局部炎性细胞的影响 治疗前后分别于奶牛尾静脉采集血液,进行白细胞计数及分类;治疗前后采集子宫颈口分泌物,涂片,姬姆萨染色,显微镜下检查计数,如果100 个视野内出现的白细胞在10 个以内判为(-),11～30 个判为(+),31～80 个判为(++),81～150 个判为(+++),151 个以上判为(++++)。

1.5 对子宫内膜炎病原菌的作用

1.5.1 对体内病原菌的作用 对72 例子宫内膜炎患牛于治疗前和停药后第10 天,尽可能无菌操作采取患牛子宫颈内分泌物,培养、分离和鉴定细菌。

1.5.2 按倍比稀释法将宫净液从1∶50(40 mg/mL)开始,到1∶12 800(0.08 mg/mL)共稀释为10个梯度,对从子宫内膜炎病例分离的6 种159 株病原菌进行了抑菌试验。

1.6 治疗前后子宫病理组织学检查 用子宫内膜组织活检器采取治疗前和治愈后的子宫内膜组织,制片,显微镜下观察比较。

1.7 治疗患牛乳中孕酮含量测定 治疗前采集乳样1 次,以后每隔3 d 采乳样1 次,直至有临床发情表现为止。乳样放射免疫分析法(RIA)测定孕酮含量。

1.8 预防试验

1.8.1 试验奶牛 在甘肃荷斯坦奶牛繁育示范中心、临洮宏达奶牛养殖等6 个奶牛养殖场选无难产、胎衣不下、阴道脱和子宫脱的产后母牛,年龄和胎次均接近,按产犊顺序分为试验组和对照组。

1.8.2 预防方法 试验组奶牛在产后4～6 d 子宫灌注宫净液(药液温水热浴,温度接近奶牛体温)100 mL,对照组奶牛不做任何处理。

2 结果

2.1 治疗结果 用宫净液治疗子宫内膜炎试验奶牛155 例,痊愈132 例,好转11 例,无效12 例,治愈率为85.16%,有效率为92.26%;治疗后3 个情期受胎129 例,受胎率为83.23%;治愈后的牛只(132头)3 个情期受胎率为97.72%。健康对照组(剔除子宫内膜炎试验奶牛)142 例,产后3 个情期受胎116 例,受胎率为81.69%。试验收治的病例多为严重的子宫内膜炎(久治无效或病程较久)或用一般抗生素治疗无效;在132 例治愈的奶牛中82.58%(109 例)是1 个疗程治愈,12.88%(17 例)是2 个疗程治愈,只有4.55%(6 例)用了3 个疗程治愈,宫净液表现出良好的治疗效果。治愈牛3 个情期受胎率达到97.72%,明显高于健康对照组产后3 个情期的受胎率,表明宫净液有良好的促进子宫机能恢复、促进卵巢功能、提高受胎率的作用。试验结果见表2。

表2 临床治疗奶牛子宫内膜炎情况

2.2 宫净液对患牛血液炎性和子宫局部炎性细胞的影响 治疗前患牛白细胞总数均高于正常值,治愈后恢复到正常范围,治疗前嗜中性细胞比例明显升高,治疗后亦恢复到正常范围,治疗前淋巴细胞比例明显降低,治疗后亦恢复到正常范围。检查53例病牛子宫颈口分泌物白细胞,治疗前白细胞量(++)～(++++)的47 例,(+)的6 例;治疗后43 例转为(-),6 例为(+),4 例为(++)。治疗后随着炎症减轻或痊愈,分泌物中白细胞减少或消失。试验结果见表3。

表3 53 例子宫内膜炎治疗前后血液白细胞数

2.3 宫净液对子宫内膜炎病原菌的作用 宫净液对6 种159 株病原菌的化脓链球菌、乳房链球菌、乳链球菌、大肠杆菌和金黄色葡萄球菌杀菌作用较强,3～5 min 即可全部杀死;对绿脓杆菌效果弱,需要10 min 以上方可杀死。试验结果见表4。

表4 宫净液对6 种159 株病原菌的抑菌结果

2.4 治疗前后子宫病理组织学变化 治疗前子宫内膜活检,镜检可见子宫内膜上皮细胞肿大、变形、核固缩,黏膜下固有膜有大量嗜中性粒细胞、淋巴细胞和浆细胞浸润、聚集,黏膜表面本身变成脓膜。治疗后子宫内膜活检,镜检可见子宫内膜炎症反应消退,黏膜下微小脓肿灶消失。检查结果见表5。

2.5 对子宫内膜炎患牛乳中孕酮含量的影响治疗前卵巢有黄体的30 例子宫内膜炎患牛乳汁孕酮含量平均为(9.44±6.65)ng/mL;第一次子宫灌注宫净液后,9 例在3 d 内、14 例在6 d 内、其余均在15 d 内乳汁孕酮含量降至2 ng/mL 以下,说明宫净液有较好的溶解黄体的作用;治疗后平均(13.8±8.4)d 降至(1.0±0.9)ng/mL 时,表明黄体消退、卵泡发育;而临床上观察的发情时间平均为治疗后(38.2±21.7)d,较孕酮分析确定的卵泡发育晚25 d 左右。

表5 治疗前后子宫内膜病理组织变化结果

治疗前卵巢无黄体患牛,乳汁孕酮平均含量为(0.65±0.36)ng/mL,治疗后孕酮含量在低水平波动,到(15.8±9.1)d 乳汁孕酮开始升高,(21.3±8.6)d 增至(4.14±2.54)ng/mL 时,并继续增高,表明已有泡发育、排卵并形成黄体,以后转为18 d 左右的正常周期性变化。这些患牛临床观察到的发情时间平均为治疗后(41.7±19.6)d,较孕酮分析确定的卵泡发育晚26 d 左右。

2.6 预防效果 奶牛子宫内膜炎大多数是由于产后早期感染所至。妊娠期子宫局部处于免疫抑制状态,产后早期子宫的正常防御机制还未建立起,而此时子宫颈口开张,病原菌可以自由进入,子宫复旧过程中脱落的母体胎盘、残留在子宫内的血液和胎水都为病原菌繁殖提供了良好的基质和营养。前苏联学者报道,正常分娩母牛产后第1 天,子宫冲洗液1 mL 内含有52.5 万个细菌,第3 天含有273 万个,第5 天含有948 万个,第7 天含有325 万个,第15 天含有34.8 万个。产后5 d 是子宫内细菌最易繁殖的时期,在此时给奶牛子宫灌注宫净液获得了理想的效果,试验组子宫内膜炎发病率只有5%而同期对照组发病率为16.9%,比较差异显著(P＜0.05);产后3 个情期受胎率试验组较对照组提高9.43%。试验结果见表6。

表6 宫净液对奶牛子宫内膜炎预防试验

3 结论

宫净液是治疗奶牛子宫内膜炎的纯中药制剂,该药组方清热解毒、活血化瘀、抗菌消炎、缩宫排脓的治疗原则。试验表明,宫净液对引起子宫内膜炎的常见病原菌有很好的抑制和杀灭作用;能抑制慢性炎灶中的肉芽组织增生,减轻炎症过程的病理损伤,有良好的抗炎和促进组织恢复的作用;可以增强子宫平滑肌的兴奋性,促进子宫收缩,但不引起子宫的强直性收缩,有良好的缩宫排脓作用;对卵巢机能有良性调节作用,有利于母牛生殖机能的恢复,提高治愈牛的受胎率。临床应用取得了良好的治疗和预防效果,疗效确实,治愈后的奶牛奶产量有增加的趋势,得到了养殖户的认可,是治疗奶牛子宫内膜炎的理想药剂。