王红明 俸一然 许东云

摘要：目的 观察高绿补血胶囊对大鼠血常规、血生化、骨髓细胞的影响。方法 将Wistar大鼠随机分为正常组、高绿补血胶囊初始、治疗、负荷剂量组。观察不同剂量高绿补血胶囊对大鼠血液指标及骨髓细胞的影响。结果 高绿补血胶囊治疗剂量组AST/ALT下降（P<0.05），高绿补血胶囊治疗剂量及负荷剂量均能够上调大鼠白细胞水平（P<0.05）。高绿补血膠囊能促进骨髓细胞的增殖及铁元素的吸收。结论 高绿补血胶囊能一定程度提高大鼠的造血功能及免疫力，且不对大鼠肝肾功能产生损伤。

关键词：类风湿关节炎合并贫血;高绿补血胶囊

中图分类号：R285   文献标志码：A   文章编号：1007-2349（2019）07-0059-04

【Abstract】Objective： To observe the effect of Gaolu Buxue Capsule on blood routine， blood biochemistry and bone marrow cells in rats. Methods： Wistar rats were randomly divided into a normal group， Gaolu Buxue capsule groups with initial， treatment and loading-dose to observe the effects of different doses of Gaolu Buxue Capsule on blood parameters and bone marrow cells in rats. Results： The AST/ALT in the treatment group of Gaolu Buxue Capsule decreased （P<0.05）. The treatment dose and loading dose of Gaolu Buxue Capsule could up-regulate the white blood cell level of rats （P<0.05）. Gaolu Buxue Capsule could promote the proliferation of bone marrow cells and the absorption of iron element. Conclusion： Gaolu Buxue Capsule can improve the hematopoietic function and immunity of rats to a certain extent， and does not damage the liver and kidney function of rats.

【Key words】rheumatoid arthritis combined with anemia， Gaolu Buxue Capsule

类风湿关节炎（rheumatoid arthritis，RA）是一种主要累及关节的自身免疫性疾病，常有其他系统和重要脏器受累，贫血（Anemia）是RA最常见的关节外表现之一[1]，其发病机制中铁代谢紊乱[2-3]和相关细胞因子[4-5]占了关键的因素。现研究高绿补血胶囊对血常规、血生化、骨髓细胞的影响，以大鼠为动物模型，检测血常规及血生化的表达并观测骨髓细胞形态及骨髓内外铁等实验室指标，探讨高绿补血胶囊的药理特性，明确其治疗的作用靶点及方向，为中医药防治RA合并贫血[6-7]的安全合理用药提供可靠的理论和依据。

1 材料与方法

1.1 实验动物和药品 选取SPF级Wistar雌性大鼠48只，8周龄，体重（200±20）g，健康，由昆明楚商科技有限公司提供。

高绿补血胶囊，300 mg/粒，由专利负责人许东云提供配方，昆明市医学科学研究所浓缩制备为高绿补血胶囊汤剂。

1.2 药物剂量的确立 高绿补血胶囊规格为300 mg/粒，成人服用剂量为2 粒/次，日2 次，共1200 mg·d-1 。按照人与动物药物剂量的换算方法，采取体表面积折算方法计算，换算剂量为24 mg·d-1，按大鼠体重200 g/只计算，则治疗剂量组为120 mg·kg-1·d-1，按照药理研究要求，取1/3 治疗剂量为初始剂量，即40 mg·kg-1·d-1，取3倍治疗剂量为负荷剂量，即480 mg·kg-1·d-1。

1.3 实验设计

1.3.1 药物干预及取材 48只大鼠随机分成4组，A组：正常对照组;B组：高级补血胶囊初始剂量组;C组：高级补血胶囊治疗剂量组;D组：高级补血胶囊负荷剂量组。除正常对照组外分别每天等体积不同浓度梯度高绿补血胶囊溶液灌胃。给药疗程：参照药理研究要求，实验的总给药时间定为21 d，大鼠灌胃容量定为1.0 mL/只。连续21 d灌胃结束后24h内心脏取抗凝血标本约2 mL送检，颈椎脱臼处死，分离出股骨骨髓行普鲁士染色、瑞氏染色后显微镜下拍照。

1.3.2 大鼠血常规、血生化的测量 心脏取抗凝血标本约2 mL，应用血常规分析仪和血生化分析仪进行大鼠血常规、肝肾功测定。

1.3.3 骨髓细胞内、外铁染色观察 剪断股骨两端，用空注射器（抽取一定量的空气）打出骨髓液，迅速推片，晾干。骨髓普鲁士染色采用索莱宝 G1422普鲁士蓝染色试剂盒（核固红法）进行。 固定、染色、脱水透明、中性树胶封片后显微镜下观察拍照。

结果判定：含铁血黄素或三价铁被染成蓝色;细胞核、其他组织被染成红色。

1.3.4 骨髓细胞形态观察 剪断股骨两端，用空注射器（抽取一定量的空气）打出骨髓液，迅速推片，晾干。骨髓瑞氏染色采用索莱宝 G1040瑞氏染液进行。固定、染色、脱水透明、中性树胶封片后显微镜下观察拍照。

结果判定：细胞被染成蓝色;胞浆被染成红色;细胞核被染成紫红色。

2 统计学方法

采用SPSS 20.0进行数据统计及分析，各组间计量资料用均数±标准差（x±s）表示，组内比较用方差齐性检验，多组间两两比较用t 验验;所有单向等级资料的比较用秩和检验和Ridit检验;统计学差异标准设为P<0.05。

3 实验结果

3.1 大鼠一般状况的改变 服用高绿补血胶囊后大鼠体力、精神及活动度较正常组明显上升，但各药物组间大鼠体力、精神及活动度改善未见明显差异。

3.2 各组药物对大鼠血常规及血生化指标的影响 见表1及表2。

血常规及血生化的比较结果：1.与其它各组相比较高绿补血胶囊治疗剂量组对大鼠AST/ALT比值存在下调作用（P<0.05），但其对ALT和AST无相应的影响（P>0.05）;2.与正常组、高绿补血胶囊初始剂量组相比，高绿补血胶囊治疗剂量及负荷剂量均能够上调大鼠白细胞水平（P<0.05），但高绿补血胶囊治疗剂量及负荷剂量之间上调水平无明显差别（P>0.05）。

结果表明：高绿补血胶囊能一定程度提高大鼠免疫力，且不对大鼠肝肾功能产生损伤。

3.3 各组药物对大鼠骨髓细胞内外铁及骨髓细胞增殖的影响

3.3.1 对骨髓细胞内外铁的影响 镜下观察各组大鼠骨髓细胞内外铁的含量（图1），根据细胞外铁颗粒、铁小珠和铁小块的多少和细胞内铁颗粒数目、大小、染色深浅，将细胞外铁含量分为五级[8]（表3）。

对骨髓细胞内外铁的影响：与正常组相比，高绿补血胶囊各个剂量组均能够促进骨髓细胞摄取铁（P<0.05），其促进能力随剂量的提升而提升。

结果表明：高绿补血胶囊能促进骨髓细胞吸收铁元素。

3.3.2 对骨髓细胞增殖的影响 镜下观察各组大鼠骨髓细胞的增殖情况（图2），根据细胞数目、大小、染色深浅，将骨髓细胞增殖情况分为五级（表4）。

对骨髓细胞增殖的影响：与正常组相比，高绿补血胶囊各个剂量组均能够促进骨髓细胞的增殖（P<0.05），其促进能力治疗剂量组最强。

结果表明：高绿补血胶囊能促进骨髓细胞的增殖。

4 讨论

目前现代医学认为RA 合并贫血的发病机制中铁代谢紊乱和相关细胞因子占了重要的因素，主要体现在三个病理生理方面：1、铁代谢紊乱[9]; 2、红细胞寿命缩短：RA 患者细胞因子激活[4];3、骨髓代偿不足[10]。

中医认为RA合并贫血属于“尪痹病”的气血虚弱证型，其病因以气血亏虚为要，《景岳全书·风痹》[11]曰：“痹者，闭也。以气血为邪所闭，不得通行为病也。”该疾病的治疗以补益气血为要[12]，方能达到治疗效果，正如《医宗必读卷十·痹》[13]中所言：“治行痹者，散风为主，御寒利湿仍不可废，大抵参以补血之剂，盖治风先治血，血行风自灭也。”

本次研究旨在探索高绿补血胶囊对正常大鼠的各项血液指标及骨髓细胞的影响，并以此研究与贫血模型大鼠的各项指标进行对照，以便于进一步的摸索高绿补血胶囊对贫血模型大鼠的影响因素。此次研究结果表明：①高绿补血胶囊对正常大鼠体力、睡眠、精神及活动度均有一定程度的改善作用。②高绿补血胶囊不对正常大鼠肝肾功能产生损伤。③高绿补血胶囊各剂量均能够继续上调正常大鼠白细胞水平，提示其能一定程度提高正常大鼠免疫力。④高绿补血胶囊各剂量均增加正常大鼠骨髓细胞内外铁的含量、促进骨髓细胞的增殖，提示其促进正常大鼠骨髓细胞的增殖及铁元素的吸收。

高绿补血胶囊[14]系专利发明人许东云经过十多年的医学生物研究和临床实践研究总结，根据中医对RA 合并贫血的发生机理和治疗原则[15-16]，以结合中医整体调节观组方，利用我省特有的绿色生物资源螺旋藻[17-18]，形成能全面调理人体造血机能，补充造血营养物质，对贫血改善效果快[19]，且效果容易验证和观察的产品。该配方以螺旋藻及动物铁为君药以补益气血及调节铁代谢，佐以茯苓及山药以健脾益气生血，全方共奏健脾益气生血之效。且使用云南高原特色的食用生物原料及中药，利用现代生物技术制备生产，2001 年经过小量制备试用观察研究证明：其有效性高、安全性好。

因此，通过检测血常规及血生化的表达并观测骨髓形态及骨髓内外铁等实验室指标，能为进一步的探索中药制剂对RA并贫血模型的研究提供一定的实验室依据。

参考文献：

[1]Bowman SJ.Hematological manifestations of rheumatoid arthritis[J].Scared J Rheumatol，2002，31（5）：251.

[2]邹秀梯，张振，陈勇，干敏芝，等.类风湿关节炎患者血清铁调素与贫血及疾病活动性的关系[J].中华临床免疫和变态反应杂志，2013，7，（3）：228-233.

[3]Viattle L，Vaulont S.Hepcidin，the iron watcher[J].Biochimie，2009，91：1223-1228.

[4]许韩师.风湿免疫病血液系统损害的主要临床表现及其治疗[J].中华临床医师杂志，2013，7（7）：2780-2781.

[5]Theurl I，Mattle V，Seifert M，et al.Dysregulated monocyteiron homeostasis and erythropoietin formation in patients with anemia of chronic disease[J].Blood，2006，107（10）：4142-4148.

[6]溫伟强，黄胜光，谭宁，等.独活寄生汤和归脾汤分别联合西药治疗类风湿关节炎贫血的对照研究[J].中医杂志，2012，7（53）：1219-1222.

[7]云南省衛生厅.名中医真传[M].昆明：云南科技出版社，2000：125-127.

[8]田露，郑文宏，汤萌，等.两种骨髓铁染色方法的比较[J].实验与检验医学，2010，28（4）：422.

[9]Malyszko J.Hemojuvelin：the Hepcidin story continues[J].Kidney Blood Press Res，2009，32：71-76

[10]Coussons PJ，Baig S，Fanutti C，et al.Novel tissue remodeling roles for human recombinant erythropoietin[J].Biochem Soc Trans，2005，33（5）：1129-1130.

[11]张景岳.景岳全书[M].太原：山西科学技术出版社，2006，131-132

[12]温伟强，黄胜光，谭宁.益气养血通络法对类风湿关节炎血红蛋白、血小板的影响[J].中华中医药学刊，2012，30（7）：1682-1686

[13]包来发.李中梓医学全书[M].北京：中国中医药出版社，1999：266.

[14]一种补血保健食品.获2005年发明专利，国际专利主分类号A23L 1/337，专利号ZL 01 1 07370.5

[15]李燕，巫婷婷.类风湿关节炎慢性病贫血从肝脾肾论治[J].中医杂志，2007，49（6）：78-79

[16]李华，刘健.中医药治疗类风湿关节炎并贫血[J].中国临床保健杂志，2005，8（2）：179-181

[17]张洪义，王淑田，李进贤，等.螺旋藻营养液增强机体免疫调节功能的研究.中国食品卫生杂志.1998，10（3）：3-4.

[18]吴开国.螺旋藻对机体免疫调节的研究概况.广西医科大学学报，2004，21（1）： 147-148.

[19]Lobner M，Walsted A，Larsen R，et al.Enhancement of human adaptive immune responses by administration of a high molecular-weight polysaccharide extract from the cyanobacterium arthrospira platensis.J Med Food，2008，11（2）： 313-322.