牛羊组织中β-受体激动剂残留检测超高效液相色谱-串联质谱法

2019-08-16左英芳

新农民 2019年2期

左英芳

（焦作市畜产品质量安全监测中心，河南焦作 454003）

1 概述

β-受体激动剂是一类动物用药的总称，它包含数种药物，因其作用于β肾上腺素受体，加强脂肪分解，促进蛋白合成，提高畜禽的酮体瘦肉率，故国内较长一段时间将其作为促进动物生长、减少脂肪率的一种饲料添加剂。随着瘦肉精事件在全球频发，使其在全球遭到禁用，国内也加大了对瘦肉精的抽检力度，但仍屡禁不绝，且有由猪向牛羊转移的趋势。

目前，我国针对β-受体激动剂的检测品种主要涉及有猪肉、猪肝、牛奶、鸡蛋、猪尿等，但没有关于牛羊组织中β-受体激动剂残留检测的相关标准，因此，笔者以超高效液相色谱-串联质谱建立了牛羊组织中的β-受体激动剂残留检测的方法。

2 实验部分

2.1 仪器

UPLC-Xevo TQ-S型超高效液相色谱-串联质谱仪（美国Waters公司配电喷雾离子源）；氮吹仪；涡旋混合器；高速冷冻离心机；分析天平；振荡器；MCX阳离子交换柱：规格60mg，3ml。

2.2 试剂

标准品：特布他林、西马特罗、沙丁胺醇、非诺特罗、氯丙那林、莱克多巴胺、盐酸克伦特罗、妥布特罗和喷布特罗共9种，其纯度均≥98.0 %。

同位素内标：克伦特罗-D9、莱克多巴胺-D3、沙丁胺醇-D3，纯度均≥95.0 %。

甲醇、乙腈（色谱纯）；甲酸（质谱纯）。

标准储备液（100µg/ml）：准确称取适量的9种标准品，用甲醇分别配制成100µg/ml的标准储备液。

混合标准中间工作液（20ng/ml）：分别准确量取9种标准储备液置同一100ml容量瓶中，用甲醇稀释至浓度为20ng/ml的混合标准中间工作液。

同位素内标储备液（100µg/ml）：准确称取适量的三种同位素内标，各自用甲醇配成浓度约为100µg/ml的储备液。

混合同位素内标工作液（20ng/ml）：将上述三种同位素内标储备液，用甲醇稀释成约20ng/ml的混合工作液。

2.3 样品前处理

准确称取2g±0.02 g试样于50ml离心管内，加入100 µl混合同位素内标工作液，加入10%碳酸钠水溶液5ml，加入10ml乙酸乙酯提取，涡旋震荡10min，10000 r/min高速离心10 min，取上清液与另一50 ml离心管内，重复提取一次，合并两次上清液。向合并的上清液中加入0.1mol/L盐酸溶液5ml，涡旋混匀，震荡10min，5000 r/min离心5min后，取下层水相于另一50ml离心管内，重复提取一次，合并两次水相，备用。

净化：MCX固相萃取柱依次用甲醇、一级水各3 mL活化，取备用液全部过柱，再依次用水、甲醇各3mL淋洗，抽干，用5%氨化甲醇溶液（5：95，V/V）3mL洗脱；洗脱液在50℃下氮气吹干。

残余物用乙腈-0.1 %甲酸水溶液（5：95，V/V）1.0 mL溶解，涡旋混匀，过0.22 µm微孔滤膜，供超高效液相色谱-串联质谱仪测定。

2.4 色谱采集条件

色谱柱：Waters Acquity UPLC BEHC18（1.7µm，2.1mm×50mm）。柱温：35℃。流动相：A：乙腈；B：0.1%甲酸溶液。进样量：5µl。流动相：A：乙腈；B：0.1 %甲酸水溶液。流速：0.4 ml/min；采用梯度洗脱程序：0～1min，5%A；1～5min，5%A～80%A；5～6min，80%A；6.1min，5%A。