叶夏斌 吴星梅 吕 旸

浙江省丽水市人民医院(323000)

子宫内膜癌好发于围绝经期和绝经后女性[1]。死亡率位居妇科恶性肿瘤前3位，严重威胁者女性生命健康安全[2]。子宫内膜癌确诊多为中晚期，导致治疗效果和预后不甚理想。微小RNA是一类非编码内源单链RNA小分子，在多种癌细胞增殖和凋亡、应激反应、细胞侵袭、新陈代谢等过程中参与调控反应[3]。在促进血管生成过程中发挥重要作用[4]，参与胰腺癌和胃癌细胞增殖、侵袭和迁移[5-6]。但在子宫内膜癌患者血清和组织中的表达及预后报道较少。本研究分析子宫内膜癌患者血清和组织中miR-425-5p的表达水平，探究与子宫内膜癌预后关系，为子宫内膜癌患者病程进展监测和预后判断提供参考。

1 资料和方法

1.1 一般资料

本院2014年4月—2015年5月收治的子宫内膜癌患者为研究对象，收集患者临床病理资料。纳入及排除标准：① 符合《子宫内膜癌诊断与治疗指南(第四版)》[7]诊断标准并经宫腔镜检查确诊，专家会诊后手术治疗；②依从性好，能配合完成治疗及随访；③患者及家属自愿签署知情同意书；④术前未进行放化疗治疗。排除术前进行过雌性激素治疗，合并其它恶性肿瘤者，患有心、脑、肾等重要器官疾病者。

1.2 实验室检测

实时荧光定量PCR检测血清及组织miR-425-5p表达水平。术前清晨取受试者空腹静脉血离心取上清备用。手术时取子宫内膜癌癌组织及癌旁(>5 cm)正常组织，洗净置液氮速冻5 min备用。按总RNA试剂盒(德国QiaGen公司)操作说明书提取血清总RNA；用RNAiso Plus试剂盒(TaKaRa公司)提取组织总RNA。以miRNA反转录试剂盒(TaKaRa公司)将2 μl纯净无降解总RNA反转录为cDNA。按照TaKaRa公司SYBR Green PCR master mix试剂说明加配反应体系。每个样品设置3次生物学重复。引物由生工生物工程(上海)股份有限公司合成，引物序列见表1。体系加配完成后放入Bio-Rad 荧光定量PCR仪反应，收集数据，以U6为内参基因，采用2-ΔΔCt算法计算血清和组织中miR-425-5p相对表达量。

表1 qRT-PCR引物序列

1.3 随访

以复诊或电话等方式术后随访3年，截至日期为2018年6月1日。记录总生存率。

1.4 统计学方法

2 结果

2.1 血清miR-425-5p表达

共纳入134例，观察组84例，对照组50例。患者年龄(54.6±11.2)岁(35～78岁)，未绝经37例，绝经47例；另取体检健康妇女为健康对照组，年龄(55.1±10.9)岁(34～77岁)，未绝经35例，绝经49例。两组相比无统计学差异(P>0.05)。 血清miR-425-5p表达水平观察组(2.47±0.68)高于对照组(1.03±0.16)(t=14.713，P=0.000)。

癌组织(2.04±0.73)高于癌旁正常组织(1.01±0.12)(t=12.761，P=0.000)。

2.2 miR-425-5p表达与内膜癌病理特征

根据miR-425-5p在血清和组织中不同表达水平，将患者分为血清miR-425-5p低表达组(26例)和高表达组(58例)，组织miR-425-5p低表达组(32例)和高表达组(52例)。内膜癌血清和组织miR-425-5p表达水平与肿瘤分期、淋巴结转移和分化程度有关(P<0.05)，与患者年龄和绝经状态无关(P>0.05)。见表2。

2.3 内膜癌患者miR-425-5p表达水平与预后

血清及组织miR-425-5p低表达组患者总生存率(57.7%、53.6%)高于高表达组(34.8%、32.6%)(P<0.05)，见图1。

2.4 影响子宫内膜癌不良预后危险因素

COX单因素分析结果表明，血清和组织中miR-425-5p表达水平、肿瘤分期、分化程度、淋巴结转移情况是影响子宫内膜癌患者预后的危险因素(P<0.05)；多因素分析显示，血清和组织中miR-425-5p表达水平、组织分化程度是影响子宫内膜癌患者预后的独立危险因素(P<0.05)，详见表3。

表2 不同临床病理特征患者miR-425-5p血清和组织表达[例(%)]

图1 内膜癌患者miR-425-5p表达与总生存率(左:血清表达，右:组织表达)

表3影响子宫内膜癌不良预后产生的危险因素分析

临床病理特征 单因素分析 HR 95%置信区间 P 多因素分析 HR 95%置信区间 P 年龄(<55岁、≥55岁)1.1050.751～1.6270.1541.0410.691～1.5680.201血清miR4255p(高、低表达)3.1462.491～3.9730.0002.7072.141～3.4220.009组织miR4255p(高、低表达)3.2422.613～4.0220.0002.7132.118～3.4760.007绝经状态(绝经前、绝经后)1.0350.703～1.5230.1020.9380.647～1.3610.216肿瘤分期(T1～T2 、T3～T4)1.7051.334～2.1780.0211.4270.987～2.0640.059分化程度(高 、中低)1.9801.219～3.2150.0141.5111.074～2.1260.027淋巴结转移(是、否)1.8111.117～2.9370.0171.4280.969～2.1030.058

3 讨论

子宫内膜癌是女性最常见的生殖系统恶性肿瘤，2015年我国发病率为63.4/10万，死亡率21.8/10万，发病率呈现逐年上升趋势[7]。子宫内膜癌发病原因尚未清楚，研究表明高水平的雌激素、初潮早、未育、绝经延迟、林奇综合征以及激素替代应用等均可能诱发子宫内膜癌[8]。目前手术切除是最有效治疗手段[9]，但手术疗效和预后并不理想。因此寻求新的病程监测和预后判断靶标，提高生存率并改善预后，仍是临床治疗子宫内膜癌的首要任务。

微小RNA(miRNA)是一种重要的非编码RNA，在许多癌症病理中发挥重要作用[10]。在癌症中表达及临床意义已成为目前研究热点之一。已有研究表明，miRNA参与前列腺癌、乳腺癌、宫颈癌等多种癌症发病过程[11]。类似的miR-382抑制前列腺细胞增殖和迁移[12]。相同miRNA在不同癌症组织中表达趋势存在差异，如在乳腺癌组织中miR-199a-3p表达下调，与不良预后有关[13]，而在胃癌组织表达上调，促进胃癌患者不良预后[14]。Wan等研究发现，在宫颈癌中miR-124抑制宫颈癌细胞增殖和迁移，影响患者预后[15]。在子宫内膜癌中miR183通过调控p53蛋白表达，抑制癌细胞增殖，影响子宫内膜癌的发生、发展及预后[16]。miR-425-5p是重要的miRNA之一，研究发现其在胰腺癌和胃癌中均表达上调，参与癌细胞增殖、迁移和侵袭，影响癌症病理特征和预后[5-6]。

以往miRNA对预后作用的研究，多分别在血清或组织中进行。本研究同时观察血清和组织结果发现，miR-425-5p在子宫内膜癌患者血清高表达与胰腺癌表达趋势一致[5]，提示miR-425-5p高表达可能促进了癌细胞增殖，影响了子宫内膜癌患者预后；在癌组织中表达水平高于癌旁正常组织，与Zhang等[6]研究miR-425-5p在胃癌组织及癌旁组织表达趋势一致。表明miR-425-5p在癌组织中高表达，与癌细胞分化与迁移有关。

miRNA主要通过与靶基因结合，进而影响肿瘤进展、侵袭和转移[10]。蔡洲等[5]研究发现，miR-425-5p通过下调CCM3表达，促进胰腺癌细胞增殖和迁移。在胃癌组织中调控靶基因表达，影响患者肿瘤分期而影响预后[6]。本研究结果显示，血清和组织中miR-425-5p表达水平均与子宫内膜癌患者肿瘤分期、淋巴结转移和分化程度有关，与Sun等发现miR-425-5p在宫颈癌患者血清高表达，与患者肿瘤分期和淋巴结转移相关一致[17]。表明miR-425-5p表达水平越高，肿瘤分期越高，淋巴转移几率越大，提示miR-425-5p表达水平可为肿瘤分期提供参考。孔繁菲等[18]研究表明miR-497-5p在子宫内膜病变组织中表达水平与患者生存率有关。本研究患者术后3年，miR-425-5p高表达患者生存率降低，与文献[17]miR-425-5p表达与宫颈癌患者生存率趋势一致。表明miR-425-5p表达水平影响患者预后，可为患者生存预测提供参考。回归分析表明血清和组织中miR-425-5p表达水平和组织分化程度是影响子宫内膜癌患者预后的独立危险因素，可为子宫内膜癌患者预后判断提供指标参考。

综上所述，miR-425-5p在子宫内膜癌患者血清和癌组织中表达上调，与患者预后有关。但在子宫内膜癌血清和组织中miR-425-5p调控肿瘤发生的具体机制有待进一步研究。