龚 敏，卢金清

（湖北中医药大学／湖北省药用植物研发中心，武汉 430065）

艾（Artemisia argyi）又名冰台、医草、黄草艾蒿，为菊科蒿属植物，易繁衍生长，是一味药用和食用历史悠久的民俗药材。入药多用生艾，灸多用熟艾，又称陈艾，一般保存一年以上的艾叶谓之陈艾。在许多古籍和民间均有对陈艾的流传，如《孟子·离娄上》中记载“七年之病，求三年之艾”。艾叶中的活性成分包括挥发油、黄酮、多糖、有机酸等，目前针对化学成分的研究以挥发油最多。艾叶中的总黄酮和总多糖均具有抗氧化作用［1，2］，此外艾叶 多糖 具有 降 血糖作用［3］，且对体外培养巨噬细胞具有免疫调节功能［4］。试验对不同储存年份陈艾中的总黄酮和总多糖进行含量测定，阐明陈艾中总黄酮和总多糖含量随时间变化的趋势，从科学的角度完善论证了陈艾的使用价值。

1 材料与方法

1.1 药材

药材采摘于湖北省蕲春县蕲艾基地，经湖北中医药大学张秀桥教授鉴定为菊科植物艾的干燥叶。

1.2 仪器

Sartorius CPA225D型电子分析天平，d＝0.01 mg；JY1002 型电子天平，d＝0.01 g；HH-S4 型数显恒温水浴锅，常州普天仪器制造公司；UV-3200型紫外可见分光光度计，MAPADA仪器有限公司；SHZ-D（Ⅲ）型循环水真空泵。

1.3 试剂

芦丁对照品 （批号为 YM0316SA13，HPLC≥98%）、无水葡萄糖对照品（批号为B21882，HPLC≥98%）购自上海源叶生物科技有限公司，95%乙醇、氢氧化钠、九水合硝酸铝、亚硝酸钠、苯酚、浓硫酸等，以上试剂均为分析纯。

1.4 总黄酮含量的测定

1.4.1 对照品溶液的制备 精密称定芦丁对照品适量于容量瓶中，加60%乙醇稀释至刻度，精密量取2 mL至5 mL量瓶中，加60%乙醇稀释至刻度，摇匀，得 0.25 mg／mL 对照品溶液［5］。

1.4.2 供试品溶液的制备 精密称定样品 （剪碎）1.0 g至锥形瓶中，精密加入60%乙醇50 mL，称定重量，超声处理（功率 250 W，频率 40 kHz）0.5 h，放冷，加乙醇补足重量，摇匀，滤过，取续滤液1 mL置于20 mL容量瓶中，加醇稀释至刻度，摇匀，即得。

1.4.3 标准曲线的制备 精密量取对照品溶液1.0、2.0、3.0、4.0、5.0 mL［6］，分别置于 25 mL 容量瓶中，加5%亚硝酸钠溶液1 mL，各加水至7 mL，混匀，放置6 min，再加10%硝酸铝溶液1 mL，摇匀，放置6 min；再加氢氧化钠溶液10 mL，最后加水至刻度，摇匀，放置15 min，以等量水替代供试液为空白校正，紫外-可见分光光度法在510 nm处测定吸光度，以吸光度为纵坐标，浓度为横坐标，绘制标准曲线。

1.5 总多糖含量的测定

1.5.1 对照品溶液的制备 精密称取105℃干燥至恒重的无水葡萄糖对照品1.00 mg至10 mL量瓶中，加适量水溶解，稀释至刻度，摇匀，即得对照品溶液（每1 mL中含无水葡萄糖0.1 mg）。

1.5.2 供试品溶液的制备 精密称取干燥至恒重的样品0.5 g至50 mL烧瓶中，加25 mL水，回流2 h，滤过，滤渣加25 mL水，回流1 h，滤过，合并2次滤液，浓缩至20 mL，加100 mL 95%乙醇至含乙醇量不低于80%，静置12 h，减压抽滤，沉淀用热水溶解，移至50 mL容量瓶中定容，滤过，取续滤液0.5 mL至10 mL容量瓶中，稀释至刻度，摇匀，即得供试品溶液。

1.5.3 标准曲线的制备 精密吸取对照品溶液0.2、0.4、0.6、0.8、1.0 mL［7］，分别置于具塞试管中，分别加水至2.0 mL，各精密加入5%苯酚溶液1 mL，摇匀，迅速精密加入浓硫酸5 mL，摇匀，放置10 min，置于40℃水浴中保温15 min，取出后迅速冷却至室温，以相应的试剂为空白。按紫外-可见分光光度法在487 nm波长处测定吸光度，以吸光度为纵坐标，浓度为横坐标，绘制标准曲线。

2 结果与分析

2.1 总黄酮含量的测定

2.1.1 测定波长的选择 根据显色后对照品溶液和供试品溶液在紫外-可见分光光度的测定，总黄酮对照品溶液与蕲艾中总黄酮制成的供试品溶液在510 nm处均有最大且稳定吸收，故选择测定波长为510 nm。

2.1.2 标准曲线的绘制 按紫外-可见分光光度法在510 nm处测定吸光度，以吸光度为纵坐标，浓度为横坐标，计算回归方程为A＝11.853 0C-0.001 7（r＝0.999 3）， 芦丁在 0.009 7～0.048 6 mg／mL 与吸光度呈良好线性关系。

2.1.3 精密度、稳定性、重复性和加样回收率考察为了对该分析方法进行综合评估，进行了精密度试验、稳定性试验、重复性试验和加样回收率试验，RSD值均小于3%，紫外-可见分光光度计精密度符合要求，供试品溶液在60 min内稳定，该分析方法可靠、重复性良好。加样回收率试验结果见表1。

表1 总黄酮加样回收率试验结果

2.1.4 样品测定 精密吸取供试品溶液2.0 mL至25 mL 量瓶中，加水至 6.0 mL，照“1.4.3”的方法，自“加5%亚硝酸钠溶液1 mL”起测定吸光度，同时取供试品溶剂2 mL，除不加供试品溶液外，其余操作同上，作为空白，根据标准曲线计算出供试品溶液中芦丁含量，测定结果见表2。

2.2 总多糖含量测定

2.2.1 测定波长的选择 根据显色后对照品溶液和供试品溶液在紫外-可见分光光度的测定，无水葡萄糖对照品溶液与蕲艾中总多糖制成的供试品溶液在487 nm处均有最大稳定吸收，故选择测定波长为487 nm。

2.2.2 标准曲线的绘制 经计算，得回归方程为A＝58.958 0C-0.041 1（r＝0.999 3），葡萄糖在 0.108 9～0.713 8 mg／mL与吸光度呈良好线性关系。

2.2.3 精密度、稳定性、重复性和加样回收率考察为了对该分析方法进行综合评估，进行了精密度试验、稳定性试验、重复性试验和加样回收率试验，RSD值均小于3%，紫外-可见分光光度计精密度符合要求，供试品溶液在60 min内稳定，该分析方法可靠、重复性良好。加样回收率试验结果见表3。

表2 陈艾中总黄酮含量测定结果

表3 总多糖加样回收率试验结果

2.2.4 样品含量测定 精密吸取供试品溶液1.0 mL，加水至 2.0 mL，按“1.5.3”的方法，自“各精密加入5%苯酚溶液1 mL”起测定吸光度，根据标准曲线计算出供试品溶液中总多糖含量，测量结果见表4。

3 讨论

不同年份蕲艾总黄酮和总多糖含量随储存时间变化趋势如图1所示，总黄酮含量逐年升高，第3年到达峰值，后急剧下降；总多糖含量逐年下降。

已有药理研究证明，艾叶中的总黄酮和总多糖均具有良好的抗氧化、清除自由基和有效阻止脂质过氧化引起细胞破坏的功效［8］，且不良反应较小，有望作为天然抗氧剂甚至发挥抗癌防癌的作用而得到广泛开发应用。古有记载，“凡用艾叶，须用陈久者，治令细软，谓之熟艾，若生艾灸火，则伤人肌脉”，陈艾应用于艾灸的历史悠久，从传统艾灸发展到现代艾灸，传统艾灸有烟和火，安全性不够且操作不便，现代艾灸根据需要在艾条中添加药物粉末或隔姜、蒜、盐等使用，应用范围更加广泛，陈艾灸火燃烧时艾绒热力温和，直达深部，功效强劲。艾灸产生的烟雾成分复杂，除挥发油成分及其氧化产物外［8，9］，还有抗自由基成分［10］，这些具有清除自由基和过氧化脂质作用的物质包括艾叶中的总黄酮和总多糖成分。随着储存时间的延长，三年陈艾中的总黄酮含量达到峰值，总多糖含量还未剧烈下降。市面上很多普通消费者甚至商家错误地认为艾叶放置时间越久越好，造成了市场混乱的现象，不利于艾产业的健康发展，试验从总黄酮和总多糖两个方面为三年陈艾的使用价值提供了佐证，具有一定指导意义。

表4 陈艾中总多糖含量测定结果

图1 不同年份陈艾总黄酮、总多糖含量变化趋势