2016年湖南地区副猪嗜血杆菌大肠杆菌的耐药性检测

2019-06-25许雅婷陈金军王晓丽张永鑫

中国兽医杂志 2019年2期

余仁,许雅婷,陈金军,王晓丽,张永鑫

(1.湖南农业大学生物科学技术学院,湖南长沙 410128;2.湖北省武汉市亚博特实验室,湖北武汉 430065)

副猪嗜血杆菌(HPS)是严重危害养猪业健康发展病原菌之一,其主要引起以纤维素性多发性浆膜炎、关节炎和脑膜炎为特征的疾病。近年来该病在集约化猪场内发病率呈明显上升趋势,主要引起从哺乳到保育不同阶段仔猪死亡、生长发育不良、饲料利用率降低等问题。猪大肠杆菌病是由致病性大肠杆菌引起的猪的一种急性传染病,其临床症状主要表现为肠炎、肠毒血症等。本文对副猪嗜血杆菌病和猪致病性大肠杆菌病在湖南地区猪场的发生情况及耐药程度进行了检测和筛查,以期对综合防治提供参考。

1 材料与方法

1.1 试验菌株的采集与鉴定病料包括患病猪(或病死猪)的肺脏、气管、关节、肠道等组织器官,来源于湖南新湘农牧业、湖南大康牧业等公司的猪场。共分离鉴定出58株副猪嗜血杆菌、52株大肠杆菌。分别在无菌条件下取病变组织或炎性液体涂布于血平板和S.S.平板,37℃培养18 h、24 h,挑取单菌落分别接种至PPLO肉汤(含NAD)和TSB肉汤进行纯培养至对数期,通过PCR扩增并结合生化鉴定试剂盒进行鉴定。

1.2 培养基及试剂血平板和S.S.平板,购自广东环凯微生物科技有限公司。PPLO琼脂、胰蛋白大豆琼脂(TSA)、胰蛋白大豆肉汤(TSB)均为OXOID公司产品。新鲜牛血清为杭州四季青材料有限公司产品,使用前经56℃灭活30 min。辅酶I(烟酰胺腺嘌呤二核苷酸,NAD)为Omega公司产品。微量生化鉴定试剂为杭州天和微生物试剂有限公司产品。PCR分子生物学实验试剂为宝生物工程(大连)有限公司产品。

1.3 药敏纸片药敏试验受试药物包括：阿米卡星(Amikacin,AN)、氨苄西林(Ampinillin,AM)、头孢噻肟(Ceftiofur,EFT)、头孢拉定(Cefradine,CEF)、阿莫西林(Amocillin,AMX)、诺氟沙星(Enrofloxacin,ENR)、红霉素(Erythromycin,E)、氟苯尼考(Florfenicol,FFC)、庆大霉素(Gentamicin,GM)、阿奇霉素(Azithromycin,AZI)、林可霉素(Lincomycin,L)、四环素(Tetracycline,TET)、泰利霉素(Tiamulin,TIA)、替米考星(Tilmicosin,TIL)、强力霉素(Doxycycline,DO)、环丙沙星(Ciprofloxacin,CIP)。所用纸片,均购自广东环凯微生物科技有限公司。

1.4 药敏试验药敏试验以美国临床和实验室标准化研究所《抗菌药物敏感性试验执行标准》2010版(CLSI-M100-S20)为指导原则和执行标准进行,采用纸片扩散法,测定58株副猪嗜血杆菌和52株大肠杆菌对16种抗菌药的敏感性。

1.5 判定标准参照CLSI-M100-S20文件执行标准,根据抑菌圈直径大小将细菌对药物的敏感性分为敏感、中介、耐药3种形式。

2 结果与讨论

两类细菌对不同药物的耐药情况以及总体情况见表1。

由表1可见58株副猪嗜血杆菌菌株对氟苯尼考(94.8%)、四环素(93.1%)、阿奇霉素(91.4%)敏感率高;敏感率较高的有阿米卡星(89.6%)、头孢拉定(89.6%)、红霉素(89.6%)、氨苄青霉素(87.9%)、强力霉素(87.9%)、庆大霉素(84.5%)和替米考星(84.5%);阿莫西林和林肯霉素的耐药率分别高达25.9%和29.3%。

大肠杆菌菌株对氨苄青霉素(88.5%)耐药率较高,对泰利霉素(73.1.3%)、阿奇霉素(71.1%)、强力霉素(71.1%)、红霉素(69.5%)、林肯霉素(69.2%)、替米考星(67.3%)、头孢拉定(63.5%)、四环素(63.5%)也有一定的耐药性。对阿莫西林和环丙沙星的耐药率分别为5.8%和21.2%。