尹明姬，李香丹，崔允美，池永学，李今子

（延边大学附属医院 儿科，吉林 延边 133002）

癫痫是神经系统常见疾病，其发病率与年龄有关，＜1岁发病率最高，其次为1～10岁。癫痫的发病类型众多，病因非常复杂，其发生、发展及易感的倾向性尚不十分明确[1]。相关研究显示，全面性癫痫伴热性惊厥叠加综合征的形成可能与GABAARG2基因变异或表达下调有关，而热性惊厥的易感因素有可能是GABAARG2基因C588T单核苷酸多态性[2-3]。GABAARG2是γ2的编码基因，包括9个外显子和8个内含子[4]。癫痫是一种存在遗传倾向的疾病，但是目前国内鲜有研究报道GABAARG2基因多态性与癫痫关系。因此，本研究首次通过分析我国北方儿童GABAARG2基因C588T多态性与癫痫的关系，为防治癫痫提供科学依据。

1 资料与方法

1.1 一般资料

选取2013年3月—2018年6月于延边大学附属医院儿科门诊和/或住院部收治的189例年龄≤12岁的癫痫患儿作为癫痫组。纳入标准：①符合国际抗癫痫联盟（International League Against Epilepsy, ILAE）关于癫痫的诊断标准[5]；②头颅MRI检查（型号：1.5T Multiva，荷兰皇家飞利浦电子公司）、神经系统体格检查、癫痫病史等临床资料完整。排除标准：①由颅脑外伤、脑出血及肿瘤等颅内病变导致癫痫；②合并恶性肿瘤或其他肝肾、精神性严重疾病。根据ILAE关于癫痫发作分类标准，将癫痫组患者分为全面性发作组和部分性发作组，分别为82和107例。选取同期于本院儿科门诊治疗的年龄≤12岁非癫痫儿童113例作为对照组，纳入儿童均无癫痫病史、家族史及严重疾病。本研究符合相关伦理学标准，所有儿童是我国北方地区的汉族人，本研究已获得本院医学伦理委员会批准通过，儿童家长均已签署知情同意书。

1.2 基因组DNA提取

抽取儿童静脉血5 ml，置于EDTA抗凝管，提取外周血白细胞的基因组DNA（中国上海赛默飞世尔科技有限公司），于-20℃冰箱中保存备用。

1.3 单核苷酸多态性检测

依据GABAARG2基因C588T位点上下游序列进行正反向引物的设计，正向引物：5‘-GTGTTCAATC AGAATGTG-3’，反向引物：5‘-CAATCAGAAAG ACTGCG-3’，引物均由上海生工生物工程股份有限公司合成。采用25μl PCR反应体系，反应如下：95℃预变性2 min，95℃变性30 s，60℃退火30 s，72℃延伸30 s，共37个循环。所有经过琼脂糖凝胶电泳检测后的PCR产物送深圳华大基因科技有限公司进行基因测序。

1.4 统计学方法

数据分析采用SPSS 21.0统计软件。计量资料以均数±标准差（±s）表示，比较用方差分析；计数资料以率（%）或构成比表示，比较用χ2检验；对各组的基因型频率和等位基因频率分布进行χ2检验，分析是否符合Hardy-Weinberg平衡，P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 3组患者一般资料比较

部分性发作组男性58例，女性49例；平均年龄（8.0±2.6）岁；平均病程（2.0±1.6）年。全面性发作组男性49例，女性33例；平均年龄（8.2±3.1）岁；平均病程（3.5+1.1）年。对照组男性61例，女性52例；平均年龄（7.8±3.4）岁。3组患者的性别、年龄比较，差异无统计学意义（P＞0.05）。3组患者病程、24 h脑电图中度以上异常比较，差异有统计学意义（P＜0.05），全面性发作组高于部分性发作组。见表1。

2.2 GABAARG2基因C588T位点测序结果

以儿童血液基因组DNA为模板，PCR特异性扩增含有GABAARG2基因C588T位点的产物，PCR产物片段长度为296 bp，并对各组的PCR扩增产物进行测序。见附图。

2.3 3组患者C588T位点基因型频率、等位基因频率比较

研究对象GABAARG2外显子5的C588T多态位点基因型和等位基因频率分布均符合Hardy-Weinberg平衡。3组患者CC、CT和TT基因型频率比较，差异有统计学意义（P＜0.05）；3组患者的等位基因C、T频率比较，差异有统计学意义（P＜0.05）；部分性发作组与对照组CC、CT和TT基因型频率比较，差异有统计学意义（χ2=13.602，P=0.001）；部分性发作组与对照组等位基因C、T频率比较，差异有统计学意义（χ2=15.724，P=0.000）；全面性发作组与对照组CC、CT和TT基因型频率比较，差异有统计学意义（χ2=12.517，P=0.002）；全面性发作组与对照组等位基因C、T频率比较，差异有统计学意义（χ2=14.536，P=0.000）；全面性发作组与部分性发作组CC、CT和TT基因型频率比较，差异无统计学意义（χ2=0.011，P=0.995）；全面性发作组与部分性发作组等位基因C、T频率比较，差异无统计学意义（χ2=0.012，P=0.912）。见表2。

表1 3组患者一般资料比较

附图 GABAARG2基因C588T位点测序图

2.4 不同基因模型下C588T单核苷酸多态性与儿童癫痫的关系

癫痫患者中，相比于CC基因型，CT基因型引发癫痫的风险是其2.127倍[（95%CI：1.232，3.615）P=0.000]；而TT基因型引发癫痫风险则更是CC基因型的 3.926 倍 [（95%CI：2.019，7.512），P=0.000]；对患者的等位基因进一步分析发现，相比于T等位基因，携带C等位基因其癫痫患病风险提高至2.191倍[（95%CI：1.554，3.094），P=0.000]，表明GABAARG2基因C588T多态性与癫痫的发生有关。

表2 3组患者C588T位点基因型频率、等位基因频率比较 例（%）

3 讨论

儿童和青少年是癫痫的高发人群，严重危害其身心健康和认知功能[6]。据流行病学调查显示，遗传因素是癫痫发病的重要影响因素之一，一些基因位点的变化可能提高癫痫发作的风险[7-8]。GABAAR多态性在癫痫的用药指导中起着重要作用，其由5个亚基组成的多肽大分子配体门控离子通道受体，由苯二氮卓类药物识别点、GABA识别点和氯离子门控通道组成，其亚基主要包括：α1、α2、α3、α4、α5、α6、β1、β2、β3、β4、γ1、γ2及γ3等[9]。

动物实验研究发现，GABAAR亚基在抗癫痫药物敏感的大鼠与耐药组的大鼠中的表达存在差异，暗示GABAAR表达的变化可能与癫痫发生有关[10-11]。癫痫发作往往会改变GABAAR的转运及亚基表达，这些表达变化与GABAAR亚基类型及患者癫痫发生的状态密切相关[12-13]。

本研究对我国北方儿童人群中GABAARG2基因单核苷酸多态性进行分析，选取≤12岁的癫痫儿童189例，并选取同时期非癫痫患儿113例作为对照组，比较两组的一般资料发现，两组的年龄、性别无差异；全面性发作组患儿的平均病程高于部分性发作组；并且全面性发作组患儿24 h脑电图中度异常率高于部分性发作组；3组患者CC、CT和TT基因型频率及等位基因C、T频率有差异；部分性发作组、全面性发作组与对照组CC、CT和TT基因型频率及等位基因C、T频率有差异；而部分性发作组与全面性发作组CC、CT和TT基因型频率及等位基因C、T频率无差异；对各组患者基因型进一步比较分析发现，在患儿中相比于CC基因型，CT基因型引发癫痫风险是其2.127倍；而TT基因型引发癫痫风险则是CC基因型的3.926倍；对各组的等位基因进一步分析发现，相比于T等位基因，携带C等位基因其癫痫患病风险提高至2.191倍，这暗示着GABAARG2 C588T多态性与癫痫的发生相关，其中C等位基因是癫痫患病的高危因素，这与其他学者研究结果类似[14-16]。

综上所述，在我国北方儿童中GABAARG2基因C588T多态性与癫痫易感性相关，相比CC基因型，CT和TT基因型均能显著提高患病风险，为理解癫痫的遗传性提供了实验依据，但GABAARG2基因C588T多态性的作用机制及与其他基因的相互作用还未十分清楚。