李勇，杨小芳，张晓云，王蓉，丁万隆*

1.中国医学科学院 北京协和医学院 药用植物研究所，北京100193；2.中国中医科学院 中药研究所，北京 100700

人参PanaxginsengC.A.Meyer为五加科Araliaceae人参属Panax多年生药用植物，我国传统名贵中药材[1]。由链格孢菌AlternariapanaxWhetz引起的黑斑病是人参主要病害之一[2]。人参黑斑病造成叶片早期脱落、植株枯萎、不结实、参根和参籽减产，常年发病率20%～30%，严重地块发病率超过90%[3]。人参病害防治目前仍主要依赖化学杀菌剂。迄今，农业部已登记备案可用于人参病害防治的杀菌剂共计18种(http：//www.chinapesticide.gov.cn)，其中嘧菌酯、醚菌酯、异菌脲、代森锰锌等9种可用于人参黑斑病防治[4]。

中药材人参农药残留问题较为突出，参农盲目选择杀菌剂，超剂量、超频次用药是导致人参农残超标的根源[5-6]。开展低毒、低残留化学杀菌剂筛选及其降解规律研究，扩大杀菌剂的可选范围，降低每种杀菌剂的使用频次和累计用量，结合微生物杀菌剂的使用，将有助于人参农残超标问题的解决。为此，本试验选取已在农作物黑斑病防治上完成农药登记的4种杀菌剂，室内开展人参黑斑菌抑菌作用研究，为人参黑斑病田间防治提供参考依据。

1 材料与方法

1.1 试验材料

致病菌：人参黑斑菌AlternariapanaxWhetz，由

吉林农业大学中药材学院提供，中国医学科学院药用植物研究所植保室保存。

杀菌剂：共计9种。其中嘧菌酯、苯醚甲环唑、代森锰锌、多菌灵等5种杀菌剂已在人参病害防治上农药登记，在此作为对照；其余4种杀菌剂已在农作物病害防治上完成农药登记，但尚未在人参病害防治上登记(表1)。

表1 供试化学杀菌剂

注：SC-悬浮剂；WP-可湿性粉剂；WG-水分散粒剂；©-已在人参病害防治上农药登记。

1.2 病菌活化及菌饼制备

从斜面培养基挑取少量菌丝接种于PDA平板中心，25 ℃恒温倒置培养4 d。再从菌落边缘挑取少量菌丝重新接种到PDA培养基，25 ℃恒温倒置培养7 d。用φ 5 mm打孔器在靠近菌落边缘处打取菌饼，用于杀菌剂抑菌活性检测。

1.3 含药平板制备

将供试药剂梯度稀释成10 000、1000、100、10 μg·mL-1悬浮液，待灭菌后PDA培养基冷却至50 ℃～55 ℃时，将杀菌剂稀释液与PDA培养基按1∶99充分混匀后制成含药平板，加等量无菌水作为空白对照。每种处理4～6次重复。

1.4 抑菌活性测定

采用生长速率法测定杀菌剂的抑菌活性。将病菌接种于含药平板中心，25 ℃恒温倒置培养6 d后，十字交叉法测量菌落直径，并根据公式计算抑菌率：

(1)

将抑菌率换算成的机率值作为变量‘Y’，质量浓度转换成质量浓度对数作为自变量‘X’，求毒力回归方程Y=bX+a，再根据公式计算杀菌剂EC50值。

1.5 统计分析

Excel 2007用于试验数据的统计分析。

2 结果与分析

2.1供试杀菌剂对人参黑斑菌的抑菌效果

由表2可知，供试杀菌剂中，新益甲托、多菌灵和金万霉灵对人参黑斑菌的抑菌效果最佳，100 μg·mL-1时病菌抑制率达100%，10 μg·mL-1时抑制率为71.8%～100%。代森锰锌、世高、氟菌唑、阿西米达和安泰生对人参黑斑菌也有抑制作用，100 μg·mL-1时病菌抑制率为47.3%～84.3%，10 μg·mL-1时抑制率为19.2%～51.5%。其余供试杀菌剂对人参黑斑菌的抑制效果欠佳。

2.2 供试杀菌剂对人参黑斑菌的毒力

根据毒力回归方程，求得供试杀菌剂的EC50值如表3所示。多菌灵、金万霉灵和新益甲托对人参黑斑菌的毒力最高，EC50值分别为199.5、181.97和96.83 μg·mL-1；其次为世高、代森锰锌和阿米西达，EC50值分别为1 258.9、2 041.7和3162.3 μg·mL-1。其余杀菌剂的EC50值均偏高。

表2 供试杀菌剂对人参黑斑菌的抑菌效果

注：©表示正在人参病害防治上农药登记；标题行不同数值代表菌剂浓度(mg·L-1)；同行不含相同字母表示在P<0.05水平差异具有统计学意义。

表3 供试杀菌剂对人参黑斑菌的毒力检测结果

3 讨论

化学杀菌剂滥用是导致人参农残超标的根源。筛选高效、低毒、低残留化学杀菌剂，与环境友好的微生物杀菌剂配合使用，是降低人参农药残留，确保人参产量和品质的有效途径。本研究对9种已登记备案的高效低毒杀菌剂开展人参黑斑菌室内抑菌活性测定发现，多菌灵、金万霉灵、世高、代森锰锌和阿米西达均对人参黑斑病有较好抑菌效果，这与前人研究报道相符[7-9]。新益甲托尽管对人参黑斑菌有理想的抑菌效果，但其尚未在人参病害上登记备案；多菌灵虽在人参病害上有登记，但防治对象为人参锈腐病和人参灰霉病。因此，需深入开展杀菌剂田间防效及农药降解动态等研究，以最终确认其用于防治人参黑斑病的可行性。

另据研究报道，啶菌恶唑、氟硅唑、嘧霉胺对人参黑斑菌也有较好的田间防病效果[10]。此外，还从人参根际土壤、根、叶中分离到多株对人参黑斑菌有抑菌活性的生防菌株[3，11-13]。上述研究结果更是拓宽了人参黑斑病防治的可选范围。因此，一方面应加快促成上述有较高毒力的化学杀菌剂在人参黑斑病防治上的合法化使用，将其与已登记杀菌剂轮换使用，尽量降低特定杀菌剂的使用频次和累积用量；另外还应加快人参黑斑病专用生防菌剂研发进度，将不同类型杀菌剂的组合使用，确保人参产量及品质前提下，有效降低人参农药残留及病菌抗(耐)药性风险。