尚庆文，于盱，梁呈元，亓希武，房海灵，巢建国，李维林

1.江苏省中医院，江苏 南京 210029；2.南京中医药大学，江苏 南京 210023；3.江苏省中国科学院植物研究所，江苏 南京 210014

金银花又称忍冬LonicerajaponicaThunb.，为忍冬科忍冬属植物，花初开时为白色，后变为金黄色，故称金银花[1]。金银花药用历史悠久，始载于《名医别录》，列为上品，是国家中医药管理局确定的38种名贵中药材之一，后来又被确定为药食兼用中药材[2-3]。金银花主要以其干燥的花蕾入药，具有清热解毒、凉散风热之功效，用于治疗外感风热或温病初起、热毒下痢、肺热咳嗽等[4]。金银花临床应用非常广泛，据统计有超过500种中药制剂中含有金银花[5]。药理学研究表明金银花提取物具有包括抗氧化、抗菌、抗炎症、抗病毒、抗癌、保护肝脏、抗血管生成和镇痛等多种重要的药理活性[6-7]。金银花产地、采收时间、加工方法、运输贮藏过程等对药材品质形成都起着关键性的作用。传统的金银花加工方法主要有自然晒干、阴干、烘房烘干、微波杀青烘干和滚筒杀青烘干等。虽然业内人士对各种方法无统一的观点，但对“杀青”的共识度较高，如胡璇等[8]认为滚筒杀青烘干法是适合四倍体金银花的新型干燥方法；王永香等[9]考察了5种干燥方法，认为其中以微波杀青烘干和滚筒杀青烘干法中金银花药材中指标成分含量最高。宋健等[10]研究结果表明杀青烘干法中金银花绿原酸含量比晒干和阴干方法分别高12.8%和24.9%，是最佳的产地加工方法。但近年来随着人们对养生的要求越来越高，氨基酸的含量也是评价金银花营养价值的主要指标之一，但氨基酸含量受杀青处理方法的影响较大，如何有效快速地处理金银花是目前中药产地加工的一个重要问题。本研究经过对引种于江苏的不同品种、采收期金银花的主要药效成分含量影响的系统研究基础上测定了不同加工方法对同一品种、产地金银花药效成分的影响，为引种栽培采收后的金银花加工方法的确定提供一定参考。

1 受试药材和方法

1.1 受试药材与仪器

二年生忍冬，种植于江苏省中国科学院种质资源圃内。于5月份采收金银花大白期花蕾。Dionex Ultimate 3000超高效液相色谱仪(美国 Thermo scientific)；Kq-300DB型数控超声仪(昆山市超声仪器有限公司)；BP210D型电子天平(北京赛多利斯仪器有限公司)。

1.2 方法

1.2.1 干燥方法及折干比 微波杀青低温干燥：将鲜花薄摊于微波炉内，微波杀青1～2 min，放置室温后于烘箱中55 ℃低温至全干。每次10 g，重复10次。

低温烘干：将鲜花薄摊于烘箱中，55 ℃低温至全干。每次10 g，重复10次。

微波杀青高温干燥：将鲜花薄摊于微波炉内，高温下杀青1～2 min，放置室温后于烘箱中105 ℃高温烘至全干。每次10 g，重复10次。

高温烘干：将鲜花薄摊于烘箱中，105 ℃至全干。每次10 g，重复10次。

高温杀青后低温烘干：将鲜花薄摊于烘箱中，105 ℃杀青2～3 min，55 ℃低温至全干。每次10 g，重复10次。

晒干：选择多日晴好天气，将鲜花采回后，松散地薄摊于竹框中曝晒。每次10 g，重复10次。

记录所有干燥方法项下干燥后的颜色、质地及折干比(获得1 kg的干燥药材所耗新鲜金银花的重量)。

1.2.2 绿原酸含量测定方法 对照品溶液制备：精密称取绿原酸对照品3.4 mg，置于5 mL棕色量瓶中，加50%甲醇制成0.68 mg·mL-1浓度的标准品溶液[4]。

样品溶液制备：精密称取金银花药材细粉(40目)0.2 g，置具塞锥形瓶中，精密加入 50%甲醇25 mL，称定重量，超声处理(功率250 W，频率35 kHz)30 min，放冷，再称定重量，用50%甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，待测。

1.2.3 木犀草苷含量测定方法 对照品溶液制备：精密称区木犀草苷对照品2 mg，置于5 mL棕色量瓶中，加入70%乙醇制成标准品溶液。

样品溶液制备：取金银花粉末1 g，加入70%乙醇25 mL，超声1 h(功率250 W，频率33 kHz)放冷，再称定重量，用70%乙醇补足减失的重量，取续滤液10 mL，回收溶剂至干，残渣用70%乙醇溶解，转移至5 mL容量瓶中，定容待测[4，11]。

1.2.4 色谱条件 绿原酸含量测定色谱条件：在戴安3000型高效液相色谱仪上，选用Welch LP-C18 4.6 mm×150 mm柱(4.6 mm×150 mm，5 μm)，流动相为乙腈-0.4%磷酸溶液(13∶87)，临用前以 0.45 μm 微孔滤膜过滤并经超声脱气处理；流速1 mL·min-1；检测波长 327 nm；理论塔板数按绿原酸计算不低于1000。

木犀草苷含量测定色谱条件：在戴安3000型高效液相色谱仪上，选用Welch LP-C184.6 mm×150 mm柱(4.6 mm×150 mm，5 μm)，流动相为乙腈(流动相A)：0.5%磷酸水(流动相B)梯度洗脱条件见表1，检测波长350 nm，流速1.0 mL·min-1，进样量为20 μL，柱温25 ℃。以木犀草苷为对照品，峰面积外标法定量。

表1 木犀草苷液相色谱梯度洗脱条件

1.2.5 氨基酸含量测定 采用GB/T 8314—2002茶-游离氨基酸的测定方法进行测定[12]。称取“1.2.2绿原酸含量测定方法”项下的干燥金银花粉末，精确至0.1 mg，置于干燥的锥形瓶，加50 mL乙酸溶解，加2滴结晶紫指示液，用高氯酸标准滴定业滴定至溶液呈蓝绿色，同期进行空白试验。

1.2.6 金银花的检查项目 采用2015版《中华人民共和国药典》的方法[4]，检测水浸出物、酸不溶性灰分和总灰分。

1.2.7 统计学处理 将所有数据输入SPSS 19.0软件包中，组间计量资料采用“均数±标准差”标识，比较采用方差分析，组内两两比较采用q检验，P<0.05为差异具有统计学意义。

2 结果与分析

2.1 不同干燥加工方法的金银花成品外观性状比较

微波杀青后低温干燥及直接低温干燥技术所得的金银花成品外观性状较好呈淡黄绿色，高温杀青后低温干燥方法次之，高温烘干易使花颜色变深卷曲，高温烘干和晒干方法获得的金银花成品外观性状较差，6种不同的加工方法所得金银花的折干比差异无统计学意义(P>0.05)。参见图1和表2。

2.2 不同干燥加工方法的金银花成品的绿原酸、木犀草苷和氨基酸含量比较

经微波杀青低温干燥法处理后，绿原酸和木犀草苷的含量较高，氨基酸的含量较低，经低温干燥处理后，氨基酸的含量最高，经直接高温干燥处理后，绿原酸、木犀草苷和氨基酸含量均降低，经微波杀青低温干燥法处理后，绿原酸、木犀草苷和氨基酸含量之和最高(P<0.05)。参见图2～图6和表3。

图1 不同干燥方式对金银花外观性状的影响

表2 不同的加工方法所得金银花成品的外观性状(n=10)

图2 绿原酸(A)、木犀草苷(B)对照品标准曲线

图3 绿原酸标准品高效液相色谱图

图4 木犀草苷标准品高效液相色谱图

图5 绿原酸样品高效液相色谱图

图6 木犀草苷样品高效液相色谱图

表3 不同加工方法的金银花中绿原酸、木犀草苷和氨基酸含量g/100 g

注：与微波杀青低温干燥比，1)P<0.05；与低温干燥比，2)P<0.05；与微波杀青高温干燥比，3)P<0.05；与高温杀青低温干燥比，4)P<0.05；与高温直接干燥比，5)P<0.05。

2.3 不同干燥加工方法的金银花成品的水浸出物、酸不溶性灰分和总灰分比较

6种不同的加工方法的水浸出物和酸不溶性灰分差异无统计学意义(P>0.05)，微波杀青低温干燥的总灰分较低(P<0.05)。参见表4。

表4 不同干燥加工方法的金银花成品的水浸出物、酸不溶性灰分和总灰分

注：与微波杀青低温干燥比，1)P<0.05，与低温干燥比，2)P<0.05，与微波杀青高温干燥比，3)P<0.05，与高温杀青低温干燥比，4)P<0.05，与高温直接干燥比，5)P<0.05。

3 结论

金银花产地初加工是影响其品质的重要因素[13-14]，《千金翼方》曾论述：“夫药采取，不以阴干曝干，虽有药名，终无药实。”即说明加工方法对药材品质的影响。金银花中主要有效成分之一也是药典中指标性成分绿原酸，是一种含邻位酚羟基的有机酸，易被多酚氧化酶氧化，在高温下也易分解[15]。2005年版《中华人民共和国药典》增加了木犀草苷作为控制金银花药材的重要指标，与绿原酸类似，木犀草苷结构中也含有多个酚羟基，对热的稳定性也较差。近年来，金银花中的氨基酸也成为评估金银花营养价值的重要指标之一[16-17]。从这三个方面评估产地初加工方法具有一定的参考价值。

本研究表明在同一时期、产地和品种完全相同的样品经过不同加工方法处理后其绿原酸含量、木犀草苷和氨基酸的含量均有一定差异。传统加工方法中晒干、阴干法虽然无需设备，成本低，但所需时间较长，环境温度无法控制，导致有效成分含量偏低，成色不佳[18-19]；微波杀青处理后再进行干燥的方法在烘干前先使多酚氧化酶失活，保证金银花样品中绿原酸和木犀草苷含量，而杀青后的低温干燥能够保证绿原酸稳定性，其成品同时具有良好的外观性状，高温烘干虽然能够节省时间但外观性状差，绿原酸和木犀草苷有效成分含量低。从绿原酸和木犀草苷的含量看，金银花在2015版的《中华人民共和国药典》绿原酸和木犀草苷的含量分别要高于1.5%和0.05%，低温干燥和微波杀青高温干燥处理后的绿原酸含量虽然有所降低，但也符合药典的要求，本课题纳入6种处理方法的木犀草苷含量均高于0.05%，也符合药典的要求。

氨基酸属于蛋白范畴，对微波的敏感度较高[20-21]，低温干燥的影响最小，而经微波杀青低温干燥处理后，但总体上，微波杀青低温干燥后，金银花的绿原酸、木犀草苷和氨基酸的总和较高，且根据药典的要求，检测金银花成品的水浸出物、酸不溶性灰分和总灰分，微波杀青低温干燥的处理方法也是最优。

综上所述，本研究结果认为微波干燥技术可作为大规模加工金银花的最佳初加工方法。