高红旗 支 勇 曹式丽

天津中医药大学第一附属医院 天津 300193

系膜增生性肾小球肾炎（MsPGN）是临床常见的肾小球疾病的病理类型，在我国原发性肾病综合征中MsPGN高达30%，是导致肾小球硬化，发展为终末期肾脏病的主要疾病。MsPGN的病理学特征为肾小球系膜细胞的异常增生和系膜基质的病理性积聚。在MsPGN的病变过程中，IL-1、IL-6等细胞因子起到重要作用。本研究采用抗大鼠胸腺细胞抗体（Anti-Thy-1）诱发MsPGN大鼠模型，观察以辛通畅络立法的中药复方肾络宁对血清、肾组织IL-1和IL-6表达的调节作用，以及对肾小球细胞外基质的影响。

1 实验材料

1.1 实验动物：健康雄性日本大耳白兔4只，体重1250±250g，普通级；远交系健康雄性SD大鼠40只（10周龄/体重150±10g），幼龄SD大鼠10只（4周龄），SPF/VAF级。以上实验动物均由中国医学科学院放射医学研究所动物中心提供(合格证号：SCXK津2005-0001)。

1.2 实验试剂：完全福氏佐剂与不完全福氏佐剂（Sigma公司）；IL-1、IL-6试剂盒（尚柏生物医学技术北京公司）。

1.3 实验药物：肾络宁：由柴胡12g，生黄芪30g，黄芩、当归、水蛭各10g，女贞子、泽兰各15g，细辛3g等组成，煎煮浓缩(含0.85g生药/ml)，装瓶密封，置4℃冰箱保存备用。药物购自天津中医药大学第一附属医院中药房，加工由天津中医药大学药厂协助完成。贝那普利：瑞士诺华制药有限公司产品，规格：10㎎/片，批号：06031404。

2 实验方法

2.1 动物分组：40只大鼠适应性饲养1周后，按体重分层随机分为正常组、模型组、西药组和中药组，每组各10只。实验全程给予普通饲料喂养，自由进水。

2.2 模型复制：参考有关文献复制抗Thy-1系膜增生性肾炎模型大鼠模型[1-2]。大鼠30只，经尾静脉注射兔抗鼠胸腺细胞抗体血清（ATS），每周1次，连续3周，初次注 射 ATS（1:32）1.0ml/只 ，加 强 注 射 ATS（1:16）1.0ml/只。

2.3 给药方法：自MsPGN模型制备第1天起，中药组每日1次以3.5g/100g体重灌服肾络宁，西药组每日1次以0.33mg/100g体重灌服贝那普利混悬液，对照组与模型组每日1次灌服等量生理盐水，共进行6周。实验全程各组均给予普通饲料喂养，自由进水。实验过程中因灌胃误入气管，中药组于治疗第4周初死亡1只，其他各组实验过程中无动物死亡。

2.4 标本采集：于给药后第6周末杀检全部大鼠，打开腹腔，摘取肾脏，迅速剪取部分肾组织放入冻存管并置于液氮中冻存，用于肾组织IL-1、IL-6检测；另再取部分肾脏组织置于10%福尔马林中固定，用于肾小球细胞外基质的检测。

2.5 观测指标：血清和肾组织IL-1、IL-6检测：采用双抗体夹心ELISA法；肾小球细胞外基质检测：采用免疫组化ABC法。

2.6 病理图像分析：采用HMIAS-2000高清晰度彩色病理图像分析系统，于400倍高倍镜下，每个标本随机选取10个视域，测量细胞外基质表达的阳性反应物信号的总面积和阳性信号物质占肾小球体的面积百分比，评价各组肾小球ECM增殖程度。

2.7 统计学方法：实验数据应用SPSS13.0统计软件进行分析，各组实验数据以平均数±标准差（xˉ±s）表示，对实验数据进行单因素方差分析，检验结果以P＜0.05为有统计学意义。

3 实验结果

3.1 各组血清、肾组织IL-1、IL-6的表达比较：见表1。

表1 各组血清、肾组织IL-1、IL-6的表达比较（xˉ± s，pg/ml）

3.2 肾组织细胞外基质分析结果：见表2。

表2 肾组织细胞外基质增殖程度（xˉ±s，%）

4 讨论

IL-1、IL-6是MsPGN中参与免疫调节和介导炎症反应的细胞因子，也是重要的系膜细胞增殖促进因子，是导致ECM积聚发展成肾小球硬化的重要原因。IL-1和IL-6是促进系膜细胞增殖的重要细胞因子，而且系膜细胞通过自分泌方式产生具有生物活性的IL-1并表达其受体，如在免疫复合物性肾炎大鼠肾小球系膜细胞的IL-1 mRNA表达量比正常大鼠增加2～3倍，提示系膜细胞能够持续分泌大量的IL-1，刺激系膜细胞增殖及增加ECM合成[3]。IL-6也是系膜细胞自分泌调节因子，通过参与和维持系膜细胞高活性状态的自分泌途径，促进系膜细胞和ECM增生，IL-6在肾脏中的高表达与肾小球系膜基质增生呈正相关[4]。因此，通过调控IL-1、IL-6的表达，抑制系膜细胞增殖，对防治MsPGN具有重要意义。

中医学认为，络脉是气血运行通道，亦是病邪传变途径，具有邪易滞易瘀、邪易入难出、邪易积成形的病理特点[5]，肾络郁滞是MsPGN等多种慢性肾脏病的共同病理基础，肾络宁是以“辛通肾络，标本兼治”为治法的中药复方制剂。方中柴胡、黄芩疏利少阳，枢转气机；黄芪、当归、女贞子补益脾肾，扶正理虚；泽兰、细辛、水蛭辛通畅络，化瘀消滞。诸药协同，疏导调节，养脏和络，促进肾络气血调畅。本课题前期研究提示，以辛通畅络立法的中药复方肾络宁，具有减轻肾小球FN、LN、ColIV等ECM成分的表达量，改善系膜基质增生的作用[6-7]。本研究结果显示,肾络宁能够显著降低MsPGN大鼠血清和肾组织IL-1、IL-6的表达量，减轻肾组织细胞外基质的增殖程度，提示抑制MsPGN大鼠IL-1、IL-6的表达，减轻其对系膜细胞增殖的病理性作用，阻抑肾小球系膜基质增生，是肾络宁防治MsPGN的重要机制。

5 参考文献

[1]Nomura K,Liu N,Nagai K,et al.Roles of coagulation pathway and factor Xa in rat mesangioproliferative glomerulonephritis[J].Lab Invest，2007,87(2)：150-160.

[2]Shinosaki T,Notoya M,Nomura Y,et al.Glomerular epithelial cell injury accelerates the progression of antibody-induced mesangial proliferative nephritis[J].Exp Nephrol，2002,10(4)：245-258.

[3]Werber HI,Emancipator SN,Tykocinski ML,et al.The interleukin 1 gene is expressed by rat glomerular mesangial cells and is augmented in immune complex glomerulonephritis[J].J Immunol,1987，138(10)：3207-12.

[4]Ng DP，Nurbaya S，Ye SH，et al．An IL-6 haplotype on human chromosome 7p21 confers risk for impaired renal function in type 2 diabetic patients[J].Kidney Int，2008，74(4)：521-527.

[5]王少墨,王庆其.络脉理论与肿瘤临床运用刍议[J].浙江中医杂志,2012,47(3)：157-159.

[6]窦一田，支勇，曹式丽.辛通畅络法干预系膜增生性肾炎大鼠肾小球细胞外基质积聚的实验研究[J].江苏中医药，2011，43（3）：87-89.

[7]窦一田，高先楼，曹式丽．肾苏Ⅱ对系膜增生性肾炎模型大鼠肾病变及白细胞介素-6的影响[J].中医杂志，2011，52(13)：1131-1134.