河南省许昌市食品药品检验检测中心（461000）刘俊波 常晓平

河南省食品药品检验所（450000）徐金玲

现代药理研究显示，降脂活血片不仅可扩张血管，降低心肌耗氧量，调节血脂，改善血液循环，还可补益肝肾，扶正固本，标本兼治，适用于脂肪肝、高脂血症、高粘血症及冠心病等[1]。本文探讨研究了HPLC法同时测定降脂活血片中的有效成分含量的应用价值，现汇报如下。

1 材料与仪器

1.1 材料 降脂活血片，恩施自治州中心医院制剂室，批号2015090，包含十二味中药，如葛根、丹参、黄芪、枸杞子及何首乌等。对照品丹酚酸B，中国食品药品检定研究院，批号111562-201313。对照品葛根素，成都曼恩特生物科技有限公司，批号MUST-16011207。对照品二苯乙烯苷，成都曼恩特生物科技有限公司，批号MUST-15072915。

1.2 仪器与试剂 仪器：①UItimate3000高效液相色谱仪，UV检测器、四梯度混合泵以及Chromleon工作站。②德国生产的Eppendorf Centrifuge 5427R低温高速离心机。③日本岛津AUW-120D电子分析天平。④北京普析通用GWA-UN超纯水机。⑤广州科盟KM-36C超声波清洗机。试剂：①甲醇，色谱纯，德国默克公司提供。②乙腈，色谱纯，德国默克公司提供。③磷酸，分析纯，武汉市中天化工有限责任公司提供。④水，自制超纯水。

2 方法与结果

2.1 色谱条件 色谱柱：Diamonsil C18（250mm×4.6mm，5um）；柱温：35℃；流速：1.0ml/min；进样体积：10ul；检测波长：286nm。其中，流动相A为0.1%磷酸水，流动相B为乙腈。

2.2 制备对照品溶液 精密称取适量葛根素、二苯乙烯苷及丹酚酸B对照品，添加甲醇，制作为每1ml含有1.027mg二苯乙烯苷、1.048mg丹酚酸B、1.097mg葛根素的溶液。精密吸取上述3种溶液，添加甲醇稀释，制作成每1ml含有0.3424mg二苯乙烯苷、0.3657mg葛根素及0.3493mg丹酚酸B的混合溶液。

2.3 制备供试品溶液 取20片降脂活血片，研细，经4号筛，取5g降脂活血片，精密称定，放置于带塞锥形瓶内，精密添加50ml 50%甲醇，称量，持续30min超声处理（功率设定为250W，频率为40KHz），放冷，并用50%甲醇补充减失重量，混合均匀，精密吸取2ml供试品，按照15000r/min，予以离心处理，持续10min，取上清液，用有机微孔滤膜滤过，取续滤液作为供试品溶液[2]。

2.4 制备阴性对照溶液 取缺少何首乌、丹参、葛根的三副处方，稀释40倍，放在烧杯中，添加10倍水，煎煮2h，放冷，吸取2ml，按照15000r/min，离心处理，持续10min，取上清液，用有机微孔滤膜滤过，取续滤液作为阴性对照溶液。

2.5 阴性对照实验 取阴性对照溶液，在标准色谱条件下，进样测定。结果显示，阴性样品色谱图中，丹酚酸B、葛根素及二苯乙烯苷相对保留时间处，未见色谱峰干扰，表示该方法专属性好。

2.6 考察线性关系 分别取200ul二苯乙烯苷、葛根素、丹酚酸B对照品溶液，稀释成2倍、4倍、8倍、16倍、32倍、64倍及128倍甲醇溶液，在色谱条件下，进样测定，根据色谱峰面积，对质量浓度进行线性回归分析。结果显示，二苯乙烯苷质量浓度为2.673～342.9ug/ml，丹酚酸B质量浓度为2.784～348.5ug/ml，葛根素质量浓度为2.859～364.1ug/ml。

2.7 考察精密度 取供试品溶液，在色谱条件下，连续6次进样测定，测定样品中待测成分峰面积，计算出峰面积的RSD。结果显示，二苯乙烯苷RSD为3.45%，丹酚酸B RSD为0.58%，葛根素RSD为0.53%，由此表示仪器的精密度高。

2.8 考察重复性 取5g同一批号样品，共6份，制备供试品溶液，在色谱条件下，测定3种待测成分含量RSD值。结果显示，葛根素RSD值为4.89%，丹酚酸B RSD为3.00%，二苯乙烯苷RSD为3.41%，由此分析，该方法重复性好，与含量测定要求相符。

2.9 测定样品含量 取降脂活血片，制备供试品溶液，在色谱条件下，测定3种待测成分含量，计算样品中有效成分含量。结果显示，每片降脂活血片包括0.1377mg二苯乙烯苷、0.7820mg丹酚酸B、0.3281mg葛根素。