骆绪美 ，程明伟 ，胡一民 ，韩文妍 ，刘圣清 *，凌遵海

（1.安徽省林业科学研究院，合肥 230031；2.怀宁县林业科技中心，安徽 怀宁 246100）

海螺望春花（Yulania denudate cv.Hailuo），为原产安徽怀宁县石镜乡邓林村海螺山的安徽特有木兰科、玉兰属优良种质资源，是传统白玉兰优良栽培药用原料品种，其干蕾为药用辛夷的一种。从十六世纪起，石镜乡就以采收花蕾作中药而驰名国内外[1-2]。目前，海螺山上的望春花百年古树较多，由于海螺山下盲目引种栽培了非本地辛夷种类，造成不同种类玉兰花粉串杂，导致其种质混杂，药蕾产品质量下降明显，亟待开展其良种选育研究，以纯化和保护这一优良种质资源。本试验对从形态学复选的海螺望春花进行挥发油及其部分共有化合物含量的测定，决选出内含物含量高的望春花植株进行推广种植，以提高其质量和产量，为后期的产业化发展奠定基础。

1 材料与方法

1.1 材料

供试的海螺望春花样品是从安徽怀宁县海螺山上依据单株药蕾百蕾重、丰产性及抗逆性等指标复选的望春花古树优良单株以及不同地点的初成龄植株初蕾期的鲜蕾，共计11个样品。将鲜蕾样品用烘干机干燥至其含水率不大于18%，用粉碎机打碎成粉末样品后置于4℃冰箱保存备用。

1.2 方法

1.2.1 仪器与试剂

液相色谱仪（Agilent 1260高效液相色谱仪系统安捷伦科技公司）；超声波清洗器（KQ-500，江苏昆山超声仪器有限公司）；电子天平（FA1104，上海天平仪器厂）；低速离心机（SC-3610，安徽中科中佳科学仪器公司）；高速离心机（TG16-WS，长沙湘仪离心机仪器有限公司）；氮吹仪（N-EVAPTM112，美国Organomation Associates，Jnc公司）；电热恒温鼓风干燥箱（DHG-9070A，上海一恒科技有限公司）；挥发油提取器（郑州益康化工产品有限公司）50 mL；α-蒎烯、桉叶油素（ACROS公司）；β-蒎烯、月桂烯、樟脑（北京伊诺凯科技有限公司）；乙腈、甲醇（HPLC级，美国TIDEA公司）；乙酸乙酯（AR级，西陇化工股份有限公司）；PSA（40～60 μm）为农残级，北京艾杰尔科技有限公司；C18为农残级，北京艾杰尔科技有限公司；GCB为农残级，gelaTechnologies公司；超纯水（UPT-II-10T型，成都超纯科技有限公司）。

1.2.2 提取

辛夷挥发油采用《药典》提供的中药材挥发油水蒸馏法提取[3]。

1.2.3 分析测定

挥发油含量：气相色谱；质谱分析：HP-GC-5890-5970 BMSD型色谱一质谱联用仪；色谱柱：SE-54（25 m×0.25 mm，0.25 μm）弹性石英毛细管柱；色谱柱程序升温条件：初始温度80℃，保持8 min后，以4℃/min的速率升温至220℃并保持15 min；载气 He，柱前压为 49 kPa，分流比为 1：50；进样口温度250℃，离子源温度260℃；电离电压70 eV；质量扫描范围：30～400 amu。

1.2.4 标准曲线与方程

挥发油含量中部分共有化学成分：分别将1000 mg/L的α-蒎烯、β-蒎烯、月桂烯、樟脑、桉叶油素标准溶液用色谱正己烷稀释配得 20、5、2、1、0.5、0.1 mg/L标准工作溶液，在上述气相色谱—串联质谱条件下进行测定，以其质量（ng）与峰面积作标准曲线。得出α-蒎烯、β-蒎烯、月桂烯、樟脑、桉叶油素的线性关系分别为 y=1797.5x-733.21，R2=0.996 5；y=1747x-734.58，R2=0.995 9，y=1008.9x-477.25，R2=0.995 5；y=342.86x-67.549，R2=0.996 5；y=678.35x+64.749，R2=0.994 5，其中 y为各成分的面积，x为质量（ng）（见图 1）。

图1 部分共有化学成分含量标准曲线与方程

2 结果与分析

2.1 海螺望春花挥发油提取率

辛夷挥发油中的芳香成分是含有少量的芳香族化合物和萜类含氧衍生化合物，具有挥发油的特异芳香味和显著的生物活性[3-4]。《药典》中规定辛夷挥发油净提取率不小于1%。由表1可知，海螺望春花挥发油含量较高，11个供试样品的挥发油含量介于1.16%～5.84%。含量最高为海螺1号，达5.84%；其次为海螺5号，达4.82%；再次为海螺15号，达4.41%，最低海螺12号，为1.16%。海螺1号的挥发油含量为海螺12号的5倍，不同个体及家系间差异显著。其中海螺1、3、5、15、16号及石镜1号6个样品的挥发油净提取率均在3.5%以上，远高于《药典》标准。11个样品挥发油含量高低顺序依次为：海螺1号＞海螺5号＞海螺15号＞海螺16号＞海螺3号＞石镜1号＞海螺6号＞江镇1号＞石镜2号＞海螺4号＞海螺12号。

石镜1号为15年生望春花植株，其挥发油净提取率为3.55%；石镜2号为8年生望春花植株，净提取率为2.19%；江镇1号为15年生望春花植株，净提取率为2.41%。初步表明，同一品种在不同的立地条件下，石镜乡海螺山一带的望春花挥发油含量要略高于江镇的。且随着树龄的增长，其挥发油含量呈增加趋势。

表1 海螺望春花不同样品挥发油提取率

2.2 海螺望春花挥发油中部分共有化学成分分析

产地不同，辛夷的挥发油化学成分含率及化学成分也有显著不同。汪洪武等、吴方征、胡一民等[5-7]对于辛夷化合物组成成分种类检测分别为28～104种不等，测定差异较大。徐植灵等[8]对河南、安徽等地辛夷进行化合物分析表明，各地辛夷共有的主要化学成分种类包括α-蒎烯、β-蒎烯、月桂烯、桉叶油素、樟脑等。

本试验针对11个样品的共有化学成分α-蒎烯、β-蒎烯、月桂烯、桉叶油素、樟脑进行气相色谱—串联质谱分析测定（见表2）。结果表明，共有化学成分含量与总的挥发油含量没有明显相关性。11个样品挥发油中α-蒎烯含量介于1.77%～6.83%，其中海螺12号最高，为6.83%；海螺4号最低，仅为1.77%。β-蒎烯含量介于2.89%～13.75%，最高为海螺16号，13.75%；最低为海螺4号，2.89%。月桂烯含量介于2.01%～6.15%，最高为石镜2号，6.15%；最低为石镜1号，2.01%。桉叶油素含量介于2.53%～26.09%，最高为海螺12号，26.09%；最低为海螺6号，仅为2.53%。樟脑含量介于0.25%～0.82%，最高的样品为海螺12号，0.82%；最低为海螺15号、江镇1号以及石镜2号，为0.25%。5种共有化学成分在11个样品中含量最高值与最低值相差3～12倍，差异显著。

3 结论与讨论

（1）本试验针对从形态学指标复选的11个海螺望春花样品的挥发油及其部分共有化学成分含量进行测定。结果表明，海螺望春花样品挥发油含量均较高，不同单株间挥发油含量差异显著，供试样品最高达5.84%，最低为1.16%，远高于《药典》中对于辛夷的挥发油含量大于1%的定量指标。目前，挥发油仍是海螺望春花的主要药用成分，故在优株选择中，除对植株进行形态学选优外，挥发油含量的高低则作为其优选的另一个重要指标。本试验结果为海螺望春花优良单株的决选提供了重要的理论依据。

（2）本次试验样品中海螺1号、3号、4号、5号、6号、12号、15号、16号虽为百年古树，但仍处于结蕾丰产期；江镇1号、石镜1号、石镜2号均为从海螺望春花古树子代中优选的初成龄植株，其内含物成分含量与百年古树差异显著。海螺望春花初成龄植株挥发油含量与树龄呈正相关，随着树龄的增长，其含量呈增长趋势。由于本次样品量有限，在海螺望春花植株未达到结蕾丰产期之前，其挥发油含量是否一直处于上升期，还有待进一步验证。

表2 海螺望春花挥发油含量中部分共有成分含量

（3）挥发油所含的化合物成分多而杂，是一种化合混合物，基本组成为脂肪族、芳香族和萜类化合物[4]。本次试验表明，海螺望春花挥发油含量组成成分中α-蒎烯、β-蒎烯、桉叶油素、月桂烯、樟脑的含量并不和其总的挥发油含量成正相关，样品海螺12号总的挥发油净提取率仅为1.16%，为11个供试样品中最低，但其α-蒎烯、桉叶油素、樟脑的化合物含量却在11个样品中处于最高。故在提取某种特定的化合物成分时，不能以其总的挥发油含量作为选择标准。