王安波，孙思，杨梅，刘文锋，汪俭

（黔东南州农产品质量安全检测中心，贵州凯里556000）

四环素类药物（tetracyclines，TCs）为广谱抑菌剂，对革兰氏阴性菌、阳性菌及螺旋体等均有较强的抑制作用，被大量应用于畜禽养殖中。若短时间内大量摄入TCs，会引起人体急性中毒，若长期摄入TCs残留超标的产品，TCs会在体内不断蓄积，当药物浓度达到一定量时，人体会慢性中毒或多种器官发生病变[1]。美国、欧盟及我国均规定了畜产品中四环素类药物的最大残留限量为100 μg/kg[2]。常用检测方法有：GB 21317-2007《动物源性食品中四环素类兽药残留量检测方法液相色谱-质谱/质谱法与高效液相色谱法》、农业部1025号公告-12-2008《鸡肉、猪肉中四环素类药物残留检测液相色谱-串联质谱法》。

猪肉是我国消费量最大的肉类产品，兽药残留是影响其安全性的重要因素之一。造成兽药残留超标的根本原因是生猪养殖长期以农户散养和小规模猪场为主，存在技术落后、安全意识薄弱、用药不规范、不遵守休药期等问题[3]。目前关于猪肉中TCs残留的研究着重于开发检测方法，且已有的研究仅对研究区域猪肉中TCs残留的水平进行描述，缺乏对猪肉中TCs残留的风险进行评估和分析[4]。因此本研究选择黔东南州4个市县为研究区域，随机采集200份样品，通过检测样本中土霉素、金霉素、四环素残留量来评价黔东南州猪肉产品中TCs兽药的残留水平及风险水平，为正确引导消费和科学监管提供数据支撑和科学依据。

1 材料

1.1 材料来源

2017年1月～12月共选择17个养殖企业及8个养殖大户共25个采样地点进行猪肉的采集，每6个月进行一次取样监测，选择黔东南州凯里市、黄平县、三穗县、台江县 4 地作为采样区域，（500±1）g，共 200 份。

1.2 主要试剂及仪器

1.2.1 主要试剂

甲醇、乙腈（色谱纯）：美国TEDIA公司；柠檬酸、乙二胺四乙酸二钠、甲酸、磷酸氢二钠（分析纯）：天津市广成化学试剂有限公司；实验室用水为一级水。

1.2.2 仪器

超高效液相色谱-串联质谱仪（H-Class/TQ-S Micro）：美国 Waters公司；百分之一天平（PL2002）：瑞士梅特勒-托利多公司；旋涡混合器（Lab Dancer）：德国IKA公司；高速冷冻离心机（H2050R）：德国Biofuge公司生产；纯水/超纯水一体机（Option Q15）：上海威立雅水处理技术有限公司。

2 方法

2.1 样品的前处理与检测方法

样品的前处理按照农业部1025号公告-12-2008《鸡肉、猪肉中四环素类药物残留检测液相色谱-串联质谱法》对待测样品进行萃取和净化。采用超高效液相色谱-串联质谱仪法进行检测。

2.1.1 仪器条件

色谱条件：色谱柱为ACQUITY UPLC HSS T3 2.1×10 mm，1.8 μm，流动相：A为0.1%甲酸水溶液；B 为乙腈，柱温为20℃，流速为0.3 mL/min。进样量为2 μL，洗脱梯度见表1。

表1 四环素类药物的洗脱梯度Table 1 The gradient elution of tetracyclines

2.1.2 最低检测限与最低定量限

向空白样品中添加标准溶液确定最低检出限和最低定量限。性噪比S/N＞3者定为方法检测限，性噪比S/N＞10者定为方法定量限[5]。

2.1.3 线性关系的考察

精密吸取10 μg/mL工作储备液用流动相分别稀释至 5、10、50、100、200 ng/mL 作为混合标准工作液。以标准溶液浓度为横坐标，对应峰面积为纵坐标绘制标准曲线，计算回归方程和相关系数。

2.1.4 准确度与精密度

向空白样品中分别添加 50、100、200 μg/kg 3 个不同浓度水平的标准溶液，各浓度进行6个试验平行，重复3次，按上述条件进行测定，计算回收率及相对标准偏差，以此考察本试验的精密度与准确度。

2.1.5 猪肉中3种四环素类药物残留检测

2017年1月～12月在贵州省黔东南州境内4个区域：17个养殖企业及8个养殖大户每6个月进行一次取样监测，选择黔东南州凯里市、黄平县、三穗县、台江县4地作为采样区域随机采集的200份猪肉样品。经上述前处理方法后，采用超高效液相色谱-串联质谱法进行检测。

2.2 风险评估

本文采用食品安全指数（international foundation for science，IFS）对猪肉中3种四环素类兽药的残留风险进行评估，计算公式[4]：IFS=（R×F）/（SI×bw）。式中：IFS为食品安全指数；R为猪肉样品中兽药药物残留的浓度（μg/kg）；F 为人们每日猪肉消费量（kg/人×1/d）。根据中国肉类协会2015年的统计数据显示，2014年中国人均猪肉消费量为41.5 kg，因此，本文中F值按0.1 kg/人×1/d 计算（41.5/365=0.114 kg）；SI为各药物的每日允许摄入量（allowable daily intake，ADI）值，土霉素为3 μg/（kg·d）[6]；bw为人体平均体重kg，本文按60 kg计算。

IFS小于1表示所检测的四环素类药物对人们的健康造成的危害效应并不明显，所检测的四环素类药物残留对人们健康的风险是可以接受的；IFS远小于1（IFS＜0.01）表示所检测兽药药物对人们的健康不会造成危害效应，安全状态可以接受；IFS大于1表示检测的兽药药物对人们健康的风险超出了可接受的限度，所检测的兽药药物对人们的健康造成的危害效应是明显的，出现这种情况就应该进入风险管理程序[3]。

3 结果与分析

3.1 标准曲线和线性范围

在选定的色谱条件下，将配制好的5 ng/mL～200 ng/mL混合标准工作液进行测定，所得药物浓度在5 ng/mL～200 ng/mL范围内与其色谱峰面积呈线性关系，见表2。

表2 四环素类药物的回归方程和相关系数Table 2 The regression equations and correlation coefficients of tetracyclines

由表2可知，其线性范围满足测定要求，该方法稳定、可靠。

3.2 检测限与定量限

在上述方法操作条件下，根据2.1.2所述理论测得3种四环素类在猪肉中的检出限为2 μg/kg，定量限为8 μg/kg。

3.3 准确度和精密度

向空白样品中添加3个不同浓度四环素类药物进行回收率试验，见表3，可以看出3种平均回收率（n=6）为75.6%～86.1%，RSD为2.5%～3.5%。

表3 猪肉中添加四环素类药物回收率和精确度Table 3 The recovery results of positive sample

3.4 猪肉中四环素类药物残留现状

猪肉中兽药药物的残留水平见表4。

表4 黔东南州猪肉产品中四环素类兽药的残留水平Table 4 Residual levels of tetracyclines in the pork products of qiandongnan prefecture

如表4所示，猪肉产品中检出土霉素4份，检出率为2.00%，金霉素、四环素均未检出。土霉素检出残留浓度为 5.47 μg/kg～8.21 μg/kg，均值为 6.84 μg/kg 未超过国家规定的最高残留限量（100 μg/kg）。

3.5 猪肉产品中兽药药物残留的风险评估

黔东南州猪肉产品中四环素类药物残留的每日膳食暴露量及食品安全指数如表5所示。

表5 四环素类药物的每日膳食暴露量及食品安全指数Table 5 The daily meal exposure of tetracyclines in the pork products of qiandongnan prefecture

通过应用食品安全指数的计算公式对猪肉产品中四环素类药物进行风险评估，黔东南州猪肉产品中四环素类药物死亡的每日暴露量均值为1.13×10-2μg/kg bw×1/d，最大值为 1.37×10-2μg/kg bw×1/d，最小值为0.91×10-2μg/kg bw×1/d，均低于最大允许摄入量3 μg/kg bw×1/d[6]；黔东南州猪肉中四环素类药物残留的食品安全指数均值为0.06×10-3，最小值为0.05×10-3，最大值为0.08×10-3，远远低于1。这表明黔东南州猪肉样品中四环素类药物的残留对人体的潜在危害水平是可以接受的，不会对人群产生不良作用，相关部门不必进入风险管理程序。

4 讨论

随着我国畜牧业的快速发展，抗生素的广泛的使用和普及为畜牧业的发展做出了重要的贡献。但是四环素类药物的滥用所造成的过量残留问题，对人体健康构成极大的威胁。四环素类药物的残留问题已经成为了影响畜产品质量安全的最主要因素，亦是社会各界和各级政府关注的焦点[7]。因此，畜产品中四环素类药物残留的风险评估已成为当务之急。

未检出四环素和金霉素，抽检的四个市县中均有土霉素检出：黄平县2份，三穗县1份，台江县1份。检出率为2.00%，且所减测出的兽药残留浓度范围为5.47 μg/kg～8.21 μg/kg，均未超过国家规定的最大残留限量，与其他地区相比黔东南州猪肉产品中四环素类药物的残留水平不高[8-9]。

IFS是用来评价食品中某种危害物对消费者健康影响的指数，通过计算其结果可以评估食用该食品后对人体安全状态的影响，从而指导相关部门采取相应措施，降低风险[10]。本研究中，土霉素食品安全指数均值为 0.06×10-3，最小值为 0.05×10-3，最大值为 0.08×10-3，远远低于1。表明黔东南州猪肉产品中土霉素残留对人体的健康不会造成危害，是能够接受的。

结果说明，黔东南州内猪肉产品中四环素类兽药的残留问题较小。猪肉中有土霉素药物残留的检出，说明土霉素是黔东南州猪肉产品中四环素残留的最主要的兽药，虽然其残留浓度没有超过国家规定的最大残留限量，也不会对人体健康造成危害，但仍是影响猪肉产品质量安全的隐患因子[11]。因此，仍然需要引起政府足够的重视，加强对生猪养殖中土霉素的监管力度，降低此药物对黔东南州猪肉产品质量安全影响的风险水平，确保猪肉产品质量安全。