王鑫 秦宇宁 曹雪莹 朱凯 邢茗 王彦芳

摘 要：目的 分析中药黄芩不同提取物对耐甲氧西林金黄色葡萄球菌（MRSA）的抑菌效果。方法 用黄芩的水提液、醇提液、水煎液，依据NCCLS相关标准，通过牛津杯法、微量稀释法测定其抑菌效果。结果 黄芩各提取物均对MRSA有抑菌作用。相比之下，黄芩水提物对MRSA的抑菌作用最强，水煎液次之，醇提液效果最差。结论 黄芩水提物抑菌效果明显，对MRSA作用强，为临床治疗MRSA感染提供新思路。

关键词：耐甲氧西林金黄色葡萄球菌 黄芩提取物 抑菌效果

中图分类号：G807 文献标识码：A 文章编号：1672-3791（2018）03（b）-0204-02

目前，在金黄色葡萄球菌感染中，耐甲氧西林金黄色葡萄球菌（MRSA）所占的比重大，危害强，是世界三大严重的感染性疾病之一。糖肽类抗菌药物如万古霉素等是目前临床治疗的首选药物，存在严重的副作用，包括肾毒性反应（蛋白尿、血尿）、听力损害、静脉炎以及伪膜性肠炎等[1]。且由于近年来MRSA感染数量不断增长以及滥用抗生素现状未得到控制，细菌出现耐药性，我们对于MRSA的治疗，一般是改造原有抗生素的结构或者对作用靶点进行新的抑菌研究。这种治疗方法存在明显缺陷，使得分子靶向药物和个体化医疗时代耐药成为难以对付的问题。因此，寻找新思路克服MRSA的耐药性，对控制临床感染有着重大的意义。中药是以毒力因子为作用靶点，和传统抗生素相比不易产生耐药性，故从中药中寻求抑菌效果好的中药为临床控制感染提供新的治疗手段。

1 材料与方法

1.1 菌株

MRSA由山东中医药大学微生物教研室提供

1.2 药物与试剂

中药黄芩（S.baicalensis Georgi）由山东省中医院中药房提供。万古霉素药敏试纸由杭州天和微生物试剂有限公司提供，营养琼脂（批号：20120226，北京奥博星）；MH肉汤（批号：20140611，北京奥博星）。

1.3 菌液的制备

在37℃下，用营养琼脂培养基平板培养耐甲氧西林金黄色葡萄球菌24h，挑选典型菌落接种于肉汤中，37℃培养18h后，制成每mL105～106CFU悬浊液[2-3]。

1.4 培养基的制备

营养肉汤培养基和营养琼脂培养基依据《中国药典》二部（2012年版）附录Ⅺ配制。

1.5 黄芩提取物的制备

黄芩水煎液，将黄芩细末50g，在250mL去离子水中混匀，静待1h，用小火加热至100℃，30min后，用布氏漏斗进行抽吸过滤，滤液继续加水250mL，同法进行第二次收集。浓缩得到水煎液（浓度为1g/mL）。

黄芩水提液，将黄芩细末50g，于500mL去离子水中混匀，浸泡24h，在80℃下用索氏提取器回流提取2h，過滤；再加5倍量水同法操作，浓缩得到水提液（浓度为1g/mL）。黄芩醇提液，黄芩与乙醇以1∶10混匀，浸泡2h后，用索氏提取器在60℃下回流提取，过滤后，滤渣再加5倍乙醇重复操作，用旋转蒸发仪减压蒸发除去乙醇成浸膏，用0.01mol/L的PBS配制成含生药1g/L溶液。

2 药敏实验

2.1 牛津杯法

取适量的MRSA，与生理盐水制成0.5麦氏浓度的菌悬液，然后用菌液涂布3个M-H琼脂平板表面，标记为A、B、C，并将每个平板平均分为三部分（Ⅰ，Ⅱ，Ⅲ），做好标记，静置5min。在A平板上的Ⅰ部分放置万古霉素纸，将无菌牛津杯放置于Ⅱ部分，用微量移液器吸取配置好的黄芩水煎液200μL放入牛津杯内，Ⅲ部分放置无菌对照纸片。B平板Ⅰ、Ⅲ部分放置同A平板，Ⅲ部分药液换为黄芩水提取液。C平板Ⅰ、Ⅲ部分放置同A平板，Ⅲ部分药液换为黄芩醇提取液。置于37℃恒温箱24h，重复3次实验，测量抑菌圈的直径。

2.2 结果

黄芩提取物对MRSA的抑菌圈直径分别是黄芩水提液（23.167±3.884）mm，黄芩水煎液（18.167±2.843）mm，黄芩醇提液（19.500±1.414）mm；敏感度分别为极敏感、高敏。

2.3 微量稀释法

采用96孔板将配置药液作二倍递减浓度稀释（即每一行1～8孔内药物浓度依次为0.5g/mL、0.25g/mL、0.125g/mL、0.0625g/mL、0.0308g/mL、0.016g/mL、0.008g/mL、0.004g/mL），每孔分别加入菌液0.1mL、肉汤0.1mL，每种药物重复三次实验，阴性对照加肉汤0.2mL；阳性对照加入肉汤0.1mL、菌液0.1mL。置于37℃培养箱内24h，用酶标仪检测OD值，计算药物的最低抑菌浓度（MIC）。

2.4 结果

阳性对照无明显细菌生长，阴性对照有细菌生长，可见明显浑浊。黄芩提取物对MRSA的MICg/mL分别为黄芩水提液（0.016g/mL、0.016g/mL、0.008g/mL）；黄芩醇提液（0.0625g/mL、0.0308g/mL、0.0625g/mL）；黄芩水煎液（0.125g/mL、0.125g/mL、0.0625g/mL）

3 结语

黄芩为中药，始载于《神农本草经》，性寒味苦，归心、肺、胆、大肠经。化学成分主要有黄芩苷（aicalin C21H18O11）、汉黄芩甙（cuogono side C22H20O11）、汉黄芩素（wogonin C16H12O8）等。近年来，有研究其煎剂对金黄色葡萄球菌、溶血性链球菌等多种革兰阳性菌和大肠杆菌、绿脓杆菌等革兰阴性菌生长均有抑制作用。但是，黄芩不同提取物对MRSA的抑菌效果的比较未见报道。所以笔者比较不同的黄芩提取物对耐甲氧西林金黄色葡萄球菌的抑制作用的效果，我们采用牛津杯法、微量稀释法对MRSA进行定量检验，通过比较黄芩水煎液，水提液和醇提液三者分别作用于MRSA所产生的作用效果进行的比较，从而得出结论。实验结果表明黄芩水煎液，水提液和醇提液三者对MRSA都有不同程度发抑制作用。黄芩水提液的抑菌圈大小为（23.167±3.884）mm，为极敏感，醇提液和水煎液的抑菌圈大小分别为（19.500±1.414）mm，（18.167±2.843）mm，为高敏，黄芩水煎液、水提液和醇提液在体外对MRSA都有明显的抑菌作用，且黄芩水提液的抑菌作用最明显，醇提液次之，水煎液最差。在第二个实验中黄芩水提液MIC分别为0.016g/mL、0.016g/mL、0.008g/mL；黄芩醇提液MIC分别为0.0625g/mL、0.0308g/mL、0.0625g/mL；黄芩水煎液MIC分别为0.125g/mL、0.125g/mL、0.0625g/mL。可以看出水提液抑菌效果最佳，优于醇提液，水煎液，这组实验的结果与第一组一致，可以看出水提液确实有良好的抑菌效果。为临床研究开发新药提供了新思路，也为临床用药提供了依据。

参考文献

[1] 闻平，俞晓丽，陈蕾，等.黄芩素对耐甲氧西林金黄色葡萄球菌的体外抗菌活性研究[J].抗感染药学，2007，12（4）：161.

[2] 仇微红，张盼锋，郭世宁.副猪嗜血杆菌的分离鉴定及中药药敏试验[J].动物医学进展，2009，30（2）：53-55.

[3] 李俊超，赵迎虎，李伟奇，等.黄连提取物对耐药金黄色葡萄球菌的体外抑菌试验[J].中兽医医药杂志，2009，28（3）：34-36.