阮 强，余金海，李 琪

（1.龙川东瑞农牧发展有限公司，广东 河源 517000；2.广东省动物源性人兽共患病预防与控制重点实验室，广东 广州 510642）

流行性腹泻近年在国内众多养殖场发生，给养殖场带来巨大损失。对于哺乳仔猪，7日龄内一旦发生流行性腹泻，死亡率高达95%～100%。被动乳汁免疫被认为是保护新生哺乳仔猪免受猪流行性腹泻（PED）等肠道疾病危害的最有希望和有效的方法[1]。已有研究证明微生态制剂具有增加免疫器官指数以及增强机体对疫苗的抗体应答的功能[2]。“丰强生泰”是一种四联活菌微生态制剂，含双歧杆菌、乳酸菌、粪链球菌、酵母菌。本次试验，在腹泻疫苗免疫期间，添加“丰强生泰”，通过测定母乳中IgA的含量，用于评价使用微生态产品对于PED免疫效果的提升作用，为PED免疫提供新的思路和方法。

1 材料与方法

1.1 试验动物

20头经产2～3次已妊娠3个月的长大二元杂种猪流行性腹泻病毒阴性母猪，由广东省河源东瑞公司提供。试验于2017年11—12月在广东河源市龙川县丰稔镇十二排村龙川东瑞农牧发展有限公司猪场进行。

1.2 试验药品

微生态制剂“丰强生泰”由江苏恒丰强生物技术有限公司提供；猪传染性胃肠炎病毒（TGEV）-猪流行性腹泻病毒（PEDV）-猪轮状病毒（PoRV）三联弱毒疫苗（简称“TPR”三联弱毒疫苗）由哈尔滨维科生物技术开发公司提供；猪传染性胃肠炎病毒（TGEV）-猪流行性腹泻病毒（PEDV）二联灭活疫苗（简称“PT”二联灭活苗）由武汉科前生物股份有限公司提供。

1.3 主要试剂

猪PED-IgA抗体酶联免疫吸附试验（ELISA）检测试剂盒购自韩国安捷公司。

1.4 试验母猪群分组及免疫程序

PED免疫组母猪20头，每组10头分为两组。试验组与对照组一免接种PED二联灭活苗1.5头份，二免接种PED三联弱毒疫苗1头份，三免接种PED二联灭活苗1头份。试验组在二免和三免注射疫苗前2 d开始至注射后5 d饲喂“丰强生泰”2 g/（头·d）。对照组不饲喂“丰强生泰”。试验期间，试验组与对照组的饲养管理条件相同。

1.5 乳汁及血液采集

PED免疫组中的试验组和对照组母猪分娩后0、1、2、3、5、7、10、14 d 收集乳汁，放入密封瓶内，-20 ℃保存备用。

1.6 PEDV组乳汁中IgA测定

使用前，先将采集的乳汁样品和试剂盒进行回温，回温结束，并轻轻混匀乳汁和试剂，乳汁样品10 000 r/min离心2 min。参照说明书进行测定。

1.7 数据分析

试验数据用Excel 2010软件进行初步统计及整理，用其SPSS22.0软件进行统计分析，利用ANOVA、LSD进行差异显著性检验和多重比较，SAS软件进行协方差分析（analysis of covariance），试验结果以平均值±标准差表示[3]。

2 结果

按试剂盒说明书判断推荐S/P值大于0.6认为是有保护力的乳汁，低于或等于0.6是不具备保护力。按每个处理组为因子，各个采集天数为因变量进行方差分析，两组在 0、1、3、5、7、10、14 d 组群之间，丰强生泰组PEDV-IgA的S/P值均高于对照组，但经单因素方差分析显示差异不显著（图1）。但丰强生泰组 0、5、7、10、14 d 的 S/P 值均高于 0.6 的保护阈值，而对照组的S/P值仅在5 d时高于0.6的保护阈值，其它时间均低于0.6的保护阈值。

图1 丰强生泰组和对照组IgA变化

3 讨论与小结

PED疫苗免疫期间使用微生态制剂丰强生泰能够提高母乳中PEDV的IgA的抗体水平，说明丰强生泰能明显促进免疫过程中IgA抗体的产生，增强对仔猪的免疫保护。

近年来，由于病毒的变异，PED疫苗的保护力逐渐降低，流行性腹泻的防控越来越棘手，需要提高PED免疫效果，从而增强猪群对于流行性腹泻病毒的抵抗力。而使用微生态制剂丰强生泰可以提高母猪母乳中IgA抗体水平，仔猪获得更高水平的母源抗体，降低流行性腹泻暴发可能性。此次试验证明免疫流行性腹泻疫苗期间添加微生态制剂可以提高免疫效果，可为临床上防控流行性腹泻提供一种新的方法和思路。

[1]陈静，刘德清，张宁，等.7种常用猪流行性腹泻疫苗临床免疫效果观察和评估[J].养猪，2013（2）：106-108.

[2]Langel Stephanie N,Paim Francine Chimelo,Lager Kelly M,et al.Lactogenic Immunity and Vaccines for Porcine Epidemic Diarrhea Virus (PEDV)：Historical And Current Concepts[J].Virus Research,2016,226(11)：93-107.

[3]Lilly D M,Stillwell R H.Probiotics-Growth promoting factor produced by microorganisms[J].Science,1965(147)：747-748.