刘海涛 汪承润 刘玲 郑勇奇 张川红

摘要 [目的]为了研究抗虫转基因欧洲黑杨对小鼠的急性毒性，为其生物安全性评估提供依据。[方法]以转基因欧洲黑杨鲜叶和非转基因欧洲黑杨鲜叶作为受试物，采用限量法测定小鼠的急性经口毒性反应。[结果]灌胃后7 d时间内所有处理组无小鼠死亡，一般状况观察和大体解剖也未见明显异常和毒性反应，小鼠LD50>10.0 g/kg体重，表明其属于“实际无毒”级别。组织病理学切片检查发现转基因灌胃组中有一雌性小鼠肺部出现间质性炎症及一雄性小鼠肝部出现局部胞浆淡染、细胞轮廓不清及空泡样变的现象，具体原因需进一步深入研究。[结论]转基因欧洲黑杨和非转基因欧洲黑杨鲜叶对小鼠均无明显急性毒性作用。

关键词 抗虫转基因欧洲黑杨；急性毒性；小鼠；动物试验

中图分类号 S859.82文献标识码 A文章编号 0517-6611（2018）01-0094-02

Abstract [Objective] Acute toxicity of fresh leaves of Populus nigra to mice were studied to evaluate the biological safety.[Method]Taking transgenic Populus nigra and non-transgenic Populus nigra as test substance， unintended effects of insect-resistant transgenic Populus nigra was studied. [Result] There was not any death of mice after treating for 7 days， and no obvious acute effect in general condition and general dissecting. The half lethal dose （LD50） was greater than 10.0 g/kg·bw， result showed that it was classified as no toxicity. Interstitial inflammation of lung in a female mice and local pale cytoplasm， indistinct cytoplasmic borders and vacuolation of liver in a male mice have been found in the transgenic Populus nigra group by using histopathology histopathologic biopsy examine. Specific reasons still need further study. [Conclusion]It suggested that there was no obvious acute toxicity effect of transgenic Populus nigra and non-transgenic Populus nigra to the test mice.

Key words Insect resistant transgenic Populus nigra ；Acute toxicity；Mice；Animal experiment

自1986年Parsons等[1]證实杨树（Populus spp.）可以进行遗传转化和外源基因在木本植物细胞中表达以来，木本植物遗传转化工作已经取得了巨大的进展[2，3]。我国是较早从事转基因林木研究的国家之一，目前转抗虫基因欧洲黑杨（ Populus nigra ）和741杨[ P.alba×（P.davidiana+P.simonii）×P.tomentosa] 已经进入商业化阶段，其中抗食叶害虫转基因欧洲黑杨是世界上释放面积最大的转基因林木，栽培面积已超过8.99万 hm2[4]。在转基因林木对人类做出巨大贡献的同时，其向环境释放后的生态安全性问题也越来越受到人们的关注[4-6]。其中，转基因植物或其产品的毒理学方面检测是其安全性评估非常重要的一个方面，目前的研究基本集中在转基因农作物的毒理学评价[7-9]。而杨树一个非常重要的特征是其可作为农业动物饲料而被广泛应用[10-11]，动物如果取食含有转基因成分的杨树叶片后，是否产生毒性效应的相关研究鲜有报道。因此，参照食品安全性毒理学评价方法[12-13]，对转基因杨树欧洲黑杨的急性毒理试验进行初步研究，以期为其安全性评估提供科学依据。

1 材料与方法

1.1 材料

1.1.1 受试样品。

抗虫转基因欧洲黑杨鲜叶及非转基因欧洲黑杨鲜叶，均采自中国林科院北京玉泉山下转基因欧洲黑杨实验苗圃地。

1.1.2 试验动物。

清洁级ICR小鼠，雌雄兼用，由首都医科大学基础医学院实验动物学系提供，许可证SCXK（京）2005-0006。每只小鼠的初始体重不超过或低于所有小鼠平均体重的20%。饲喂环境为IVC屏蔽系统，温度（20±3）℃，相对湿度为30%～70%，人工照明12 h，注意通风。在实验室内适应性饲养5 d后进行试验处理。

1.1.3 试验仪器。

电子秤、小鼠笼、1 mL灌胃器、莱卡LeciaDME型光学显微镜、Motic 5000照相系统。

1.2 方法

1.2.1 样品配置及灌胃。

将样品鲜叶称量加液氮彻底研磨粉碎后加蒸馏水配制为0.68 g/mL（最大使用浓度）的液糊状物质。所有供试小鼠随机分成3组：转基因叶片灌胃组、非转基因叶片灌胃组和空白对照组（蒸馏水），每组12只，雌雄各半。灌胃前禁食16 h，不禁水，在预试验的基础上，根据食品安全国家标准[12-13]，以限量法（limit test）设计研究的灌胃急性毒性试验，灌胃剂量为10.0 g/kg体重进行单次灌胃。