张立光， 尤彩芬， 刘雪梅

（1.苏州卫生职业技术学院药学院，江苏 苏州 215009；2.苏州市检验医学生物技术重点实验室，江苏 苏州 215009）

MC-1568，化学名为(E)-3-﹛(5-[(E)-3-(3-氟苯基)-3-氧代丙基-1-烯基]-1-甲基-1H吡咯-2-基﹜-N-羟基丙烯酰胺，于2005年首次被报道[1]，是新型的II型选择性人组蛋白脱乙酰化酶2（HDAC2）抑制剂，现多作为生物工具药用于肿瘤及心脏疾病方面的研究[2-3]。

有关MC-1568的合成，文献报道主要有两条路线[1,4]，都以N-甲基吡咯-2-甲醛为起始原料，与磷酰基乙酸三乙酯缩合，通过Vilsmeier-Haack反应引入醛基，再与3-氟苯乙酮缩合，水解，得到共同的中间体 （E）-3-﹛(5-[（E）-3-（3-氟苯基）-3-氧代丙基-1-烯-1-基]-1-甲基-1H-吡咯-2-基﹜丙烯酸（化合物5）。其中路线1[4]再以化合物5与O-（四氢-2H-吡喃-2-基）羟胺（NH2OTHP）缩合，脱去保护得化合物1。路线2[1]则以化合物5与O-（2-甲氧基-2-丙基）羟胺缩合，再脱去保护得化合物1。路线2所用中间体O-（2-甲氧基-2-丙基）羟胺价格较为昂贵，脱保护工艺较为复杂，因此我们采用了路线1。但路线1中合成化合物4和化合物5两步反应，都采用了微波反应，工业化难以实现，在合成化合物3和最终化合物1的过程中，均使用了柱层析进行纯化目标化合物，也难以实现工业化。本文参照路线1[4]，对合成工艺进行了优化，开发出一条具有较好应用前景的工业化路线：合成化合物3时，不经纯化，直接用于下一步反应；合成化合物4时，用乙酸乙酯作为溶剂，加入当量DMF，在室温下进行反应，不需要采用微波条件；合成化合物5时，用氢氧化钾作碱，乙醇作溶剂，室温下反应，也避免了微波反应；合成化合物1时，用盐酸代替对甲苯磺酸脱保护，减少了杂质的生成，避免了柱层析纯化。具体合成路线见图1。

1 实验部分

1.1 主要仪器与试剂

质谱采用Waters Xevo G2 QTOF质谱仪测定；核磁共振氢谱采用Bruker ARX 300核磁共振仪测定；高效液相采用Agilent 1100高效液相色谱仪。实验所用试剂均为市售化学纯或分析纯，除特别说明外，不经处理直接使用。

1.2 制备方法

1.2.1 （E）-3-（1-甲基-1H-吡咯-2-基）丙烯酸乙酯（3）的制备

图1 1的合成路线

在1000 mL三颈瓶中，加入四氢呋喃500 mL，在搅拌下，加入磷酰基乙酸三乙酯56.5 g（252 mmol），降温至0℃，加入叔丁醇钾26.5 g（238 mmol），室温下继续搅拌30 min。再加入N-甲基吡咯-2-甲醛 18.6 g（化合物 2，170 mmol）于100 mL四氢呋喃中的混悬液中。在室温下搅拌反应液16 h。反应完毕，加入水500 mL，再加入乙酸乙酯500 mL，搅拌，静置分层。水层用乙酸乙酯萃取（150 mL×3），合并有机相，用饱和食盐水 300 mL洗涤。有机相减压蒸馏，得到黄色油状物（化合物 3）29.8 g（收率 98.0%），纯度 93.0%，不经纯化直接投入下一步。

1.2.2 （E）-3-（5-醛基-1-甲基-1H-吡咯-2-基）丙烯酸乙酯（4）的合成

在氮气保护下，向500 mL三颈瓶中依次加入干燥二氯甲烷50 mL、草酰氯 22.84 g（180 mmol），搅拌冷却到0℃，将DMF 13.16 g（180 mmol）在50 mL二氯甲烷中的溶液缓慢滴加到反应瓶中，滴加完毕后继续搅拌30 min，在0℃～5℃下，将化合物（3）10.7 g（60 mmol）在 50 mL 二氯甲烷中的溶液滴加入反应瓶中，升温到室温继续搅拌1 h。反应完全后加入水250 mL淬灭反应，搅拌，分层，有机相用饱和食盐水（50 mL×3）洗涤，减压浓缩有机相得到红色固体11.59 g（收率92.9%），纯度92.0%，不经纯化直接投入下一步。ESI-MS（m/z）： 208.0942[M+H]+;1H NMR（400 MHz， CDCl3）：δ 1.33 （t，J=8.0 Hz， 3H，CH2CH3），4.05（s，3H， NCH3），4.27 ～4.38 （m， J= 7.2 Hz， 2H，CH2CH3），6.42 （d， J=16.0Hz， 1H， CH=CHO），6.67（s， J=4.5 Hz，1H，pyrrole H-3），6.92（d， J=4.0 Hz， 1H， pyrrole H-4）， 7.62 （d， J=16.0 Hz，1H， CH=CHO）， 9.59（s， 1H， CHO）.

1.2.3 （E）-3-﹛（5-[（E）-3-（3-氟苯基）-3-氧代丙基-1-烯-1-基]-1-甲基-1H-吡咯-2-基﹜丙烯酸（5）的合成

在500 mL三颈瓶中依次加入甲醇150 mL，3-氟苯乙酮 13.4 g（97 mmol），2 mol/L KOH 溶液97 mL（194 mmol），化合物（4） 20.1 g（97 mmol），在室温下搅拌8 h。反应结束后加入水200 mL，用1 mol/L盐酸调pH值至7，有大量橙色固体析出，过滤，滤饼用水洗涤，干燥得到橙色固体25.8 g（收 率 88.9%）， 纯 度 94.8%。 ESI-MS （m/z）：300.1583[M+H]+；1H NMR（400 MHz,DMSOd6）：δ 3.82 （s， 3H，NCH3），6.42 （d，J=16.0 Hz，1H，CH=CHOOH），6.92 （d， J=4.0Hz， 1H， pyrrole H-3），7.30 （d， J=4.0 Hz，1H，pyrrole H-4），7.52 （d，J=8.0Hz， 1H， CH=CHOOH），7.55 （m，2H， ArH-2，5）， 7.74 （m， 2H， COCH=CH， COCH=CH），7.89 （d， J=8.1 Hz， 1H， ArH-4）， 7.97 （d， J=8.1 Hz，1H，ArH-6）.

1.2.4 （E）-3-｛5-[（E）-3-（3-氟苯基）-3-氧代丙基-1-烯基]-1-甲基-1H-吡咯-2-基｝-N-（四氢-2H-吡喃-2-基氧代）丙烯酰胺（6）的合成

在氮气保护下，向1000 mL三颈瓶中依次加入二氯甲烷 500 mL，化合物（5）22 g（74 mmol），O-（四氢-2H-吡喃-2-基）羟胺（NH2OTHP）10.3 g（88 mmol），EDCIHCl 45.6 g （294 mmol），HOBt 19.9 g（147 mmol），三乙胺 52.6 g（520 mmol）。 在室温下搅拌16 h。反应完全后加入水和饱和食盐水各300 mL洗涤反应液，减压蒸干有机相得橙色固体25.5 g（收率87.0%），纯度 91.3%，不经纯化直接用于下一步反应。

1.2.5 MC-1568 （1）的合成

将上一步得到的粗品化合物 （6）14.2 g（35.6 mmol），溶于 200 mL 甲醇，加入浓盐酸 3 mL（36 mmol），在室温下搅拌3 h。反应过程中有橙色固体析出。反应完全后，过滤，滤饼用水洗涤，再用乙腈/甲醇（1∶1混合溶剂）重结晶得橙色固体8.4 g（ 收 率 75.0%）， 纯 度 99.3%。 ESI-MS（m/z）：315.1163[M+H]+；1H NMR （400 MHz， DMSO d6）：δ 3.75 （s， 3H，NCH3），6.35 （d，J= 15.5 Hz，1H，CHCHONHOH）， 6.72（d，J=4.0 Hz，1H，pyrrole H-3），7.26 （d， J=4.0 Hz， 1H， pyrrole H-4）， 7.43～7.52 （m，2H， ArH-2，5），7.60-7.62 （m，1H，CH=CHONHOH），7.70～7.80 （m，2H，COCH=CH，COCH=CH），7.90 （d，J=8.0 Hz，1H，ArH-4），7.97（d，J=8.0Hz，1H，ArH-6），10.74～10.76 （br s，1H，NHOH）。

2 结果与讨论

（1）MC-1568作为工具药广泛运用于肿瘤及心脏疾病方面的研究，其合成工艺未见国内外文献报道。

（2）对化合物3的合成工艺进行了优化，尝试不经纯化，直接将化合物3粗品用于下一步反应，避免了柱层析纯化过程，利于工业化生产。

（3）对化合物4的合成工艺进行了优化，用乙酸乙酯作为溶剂，加入当量DMF，在室温下进行反应，避免了微波反应条件，使工业化生产得以实现。

（4）对化合物1的合成工艺进行了优化，用盐酸代替对甲苯磺酸脱保护，降低了生产成本，减少了杂质的生成，避免了柱层析纯化，并开发了化合物1的结晶工艺，得到高纯度的目标化合物。

参考文献：

[1] Mai A，Massa S，Pezzi R，et al.Class II （IIa）-selective histone deacetylase inhibitors.1.Synthesis and biological evaluation of novel （aryloxopropenyl） pyrrolyl hydroxyamides[J].J Med Chem，2005，48：3344-3353.

[2]彭君.MC1568对脑出血大鼠的神经保护作用及其机制的研究[D].武汉：华中科技大学，2015.

[3] Duong V，Bret C，Altucci L，et al.Specific activity of class II histone deacetylases in human breast cancer cells[J].Mol Cancer Res.， 2008， 6（12）：1908-1919.

[4] Fleming C L，Ashton T D，Gaur V，et al.Improved synthesis and structural reassignment of MC1568：a classⅡa selective HDAC inhibitor[J].J Med Chem， 2014， 57：1132-1135.