李 青 郭明义 - 梁 军ANG 袁 晓 李丽君 - 曹小彦 -

(1. 广电计量检测﹝湖南﹞有限公司，湖南 长沙 410205；2. 长春市食品药品监测中心，吉林 长春 130033)

氯噻啉(imidaclothiz)是中国农药技术公司自行研制开发的一种硝基亚甲基烟碱类杀虫剂[1]，在柑橘蚜虫、十字花科蔬菜蚜虫、水稻飞虱、温室白粉虱、茶树叶蝉等病虫防治方面有着很好的效果。目前新烟碱类杀虫剂对蜜蜂形成急性毒害，可能会对蜜蜂种群的生存和发展带来不可接受的影响[2]，欧盟已经开始对部分新烟碱类杀虫剂进行限制使用。目前对氯噻啉残留量测定的方法有高效液相色谱法[3-6]，高效液相色谱-串联质谱法[7-8]、气相色谱-串联质谱法[9]，其研究过程的前处理大部分需要经过固相萃取柱进行净化，有关提取试剂的研究都只比较了几种常规的单一提取试剂[10-12]。近年来QuEChERS[13-14]方法在农药中应用比较广泛，但是其成本也相对较高。本研究拟对茶叶中氯噻啉测定的前处理进行优化，分别采用正己烷、乙腈、丙酮3种纯试剂，以及正己烷-乙腈(体积比1∶1)、乙腈-丙酮(体积比1∶1)、正己烷-乙酸乙酯(体积比1∶1)3种混合试剂，作为萃取溶剂对茶叶中氯噻啉进行萃取，通过对萃取时间、萃取体积及萃取回收率几个方面进行分析，选择一种提取效率高、杂质干扰少的提取试剂。

1 材料与方法

1.1 仪器

超高效液相色谱仪：L-30A型，日本岛津公司；

氮吹仪：UGC-24C系列，北京优晟联合科技有限公司；

超声仪：KQ-300DB系列，昆山市超声仪器有限公司；

电子天平：BT125D系列，德国赛多利斯公司；

离心机：LD4-2D系列，北京京立离心机有限公司；

涡旋混合仪：Vortex Genie 2系列，上海芃奇科学仪器有限公司；

超纯水仪：Ultra-pure Wster Sytem系列，湖南科尔顿水务有限公司。

1.2 试验材料

甲醇、乙腈：色谱纯，德国默克公司；

正己烷、乙酸乙酯：色谱纯，上海安谱实验科技股份有限公司；

丙酮：色谱纯，上海阿拉丁生化科技股份有限公司；

磷酸：分析纯，国药集团化学试剂有限公司；

实验室用水：18.25 MΩ超纯水，超纯水仪制备。

1.3 标准品与配制

氯噻啉标准物质：纯度≥95.0%，上海安谱实验科技股份有限公司；

标准溶液的配制：取10.0 mg标准物质于10 mL容量瓶，加乙腈溶解并定容至刻度，配制成浓度为1.0 mg/mL的标准储备液。吸取不同体积的标准储备液用乙腈稀释成浓度为0.05，0.10，0.20，0.50，0.80 μg/mL的标准使用液。

1.4 色谱条件

色谱柱：Agilent C18(5 mm×25 mm×0.45 μm)；流动相：甲醇+乙腈+0.1%磷酸溶液=10∶25∶65(体积比)；检测波长：270 nm；柱温：35 ℃；进样体积：10 μL。

1.5 样品处理

准确称取1.00 g样品，加入20 mL正己烷-乙酸乙酯(体积比1∶1)混合溶剂，涡旋混合1 min，超声提取20 min，4 000 r/min 离心5 min，准确移取10 mL上清液于比色管，在40 ℃水浴条件下氮吹干，用乙腈溶解残留物并定容至1 mL，过0.22 μm滤膜，滤液供高效液相色谱测定。

2 结果与分析

2.1 色谱条件的优化

2.1.1 流动相选择 分别对比甲醇+水(体积比25∶75)、乙腈+水(体积比35∶65)、甲醇+乙腈+0.1%磷酸水溶液(体积比10∶25∶65)3种流动相组合的峰型和杂质分离效果，结果表明，在以甲醇+乙腈+0.1%磷酸水溶液(体积比10∶25∶65)作为流动相时，氯噻啉的峰型最好，在样品测定时其杂质的分离效果较佳，最终选择其作为氯噻啉测定的流动相，氯噻啉标准物质色谱图见图1。

2.1.2 检测波长的选择 通过对DAD二极管阵列检测器所得氯噻啉标准溶液的光谱进行分析，其在270 nm处具有最大吸收波长，杂质峰的干扰较少，比对270 nm附近多个波长下氯噻啉标准溶液峰面积(见表1)，结果表明，在270 nm波长下，氯噻啉标准溶液的峰面积最高，氯噻啉标准物质光谱图见图2。

图1 氯噻啉色谱图Figure 1 The chronatogram of imidaclothiz

图2 氯噻啉标准物质光谱图Figure 2 The spectrogram of imidaclothiz表1 氯噻啉标准溶液各波长峰面积响应值Table 1 Response value of peak area of each wavelength of imidaclothiz standard solution

波长/nm265266267268269270271272273274275峰面积4556847786490464962049869499884988749705497824926648304

2.2 萃取时间的影响

称取等质量的茶叶样品多份，加入相同质量浓度的标准溶液，用等体积的萃取剂分别超声5，10，15，20，25，30 min，测定的回收率数据见图3。试验结果表明，当超声时间超过15 min后，萃取效果会显著提高，但超声时间越长提取出来的杂质越多，溶液颜色变化也非常明显，综合考虑萃取效果和杂质干扰问题，最终选择超声20 min为最佳萃取时间。

2.3 萃取体积的影响

称取多份茶叶空白样品，分别加入1 mg/kg的氯噻啉标准溶液，各萃取剂分别移取5，10，15，20，25，30 mL的溶液进行提取，其回收率见表2。由表2可知，随着萃取剂体积的增加，回收率增加较快，当萃取体积为20 mL时，各萃取剂回收率最大，当萃取体积超过20 mL后，萃取回收率变化不大且有降低的趋势。因此，选择20 mL作为萃取剂的萃取体积。

图3 不同萃取时间回收率数据Figure 3 Different extraction time recovery rate data

2.4 样品的测定

选取绿茶作为试验样品，按照2.3和2.4的条件进行前处理提取后对样品空白和样品加标测定。从图4可以看出，各萃取剂萃取效果和杂质干扰差异较大，其中正己烷-乙酸乙酯(体积比1∶1)萃取剂萃取出的杂质最少，目标物的萃取效果最为理想。

2.5 回收率和精密度

称取一定质量的茶叶样品，样品中加入不同浓度的标准溶液，配制成0.5，1.0，1.5，2.0，3.0，5.0，10.0 mg/kg不同浓度加标样品，每个质量浓度的样品称取3份，分别用正己烷、乙腈、丙酮、正己烷-乙腈(体积比1∶1)、乙腈-丙酮(体积比1∶1)、正己烷-乙酸乙酯(体积比1∶1)进行提取，按2.1的方法测定，计算各质量浓度加标样品的回收率，见表3。由表3可知，各萃取剂不同浓度3份样品的回收率相对标准偏差均低于10%；各萃取剂的回收率都在80%～110%，其中正己烷-乙酸乙酯的平均回收率最高。

图4 样品加标色谱图Figure 4 Standard chromatogram of sample表2 各萃取剂不同萃取体积回收率数据Table 2 Recovery rate data of different extraction volume of each extractant

萃取剂/mL回收率/%正己烷乙腈丙酮正己烷-乙腈(体积比1︰1)乙腈-丙酮(体积比1︰1)正己烷-乙酸乙酯(体积比1︰1)543.542.146.744.941.843.61055.651.654.858.253.654.91578.681.382.380.379.277.32092.893.591.892.392.893.62591.290.389.190.590.190.73088.388.187.288.186.787.4

表3 各萃取剂不同加标浓度回收率数据Table 3 Different spiked concentration of extractant recovery data

3 结论

本试验对比了正己烷、乙腈、丙酮、正己烷-乙腈(体积比1∶1)、乙腈-丙酮(体积比1∶1)、正己烷-乙酸乙酯(体积比1∶1)6种萃取剂对茶叶中氯噻啉的萃取能力。以270 nm 为波长，甲醇+乙腈+0.1%磷酸溶液为流动相对氯噻啉进行测定，通过对萃取时间、萃取体积进行比对后选择20 mL萃取剂体积、超声萃取20 min对茶叶中氯噻啉进行提取试验，结果表明，6种萃取剂对氯噻啉都有较好的响应，并且杂质干扰较少，样品加标平均回收率分别为82.3%～100.7%，85.8%～101.1%，85.9%～95.2%，82.3%～101.3%，82.4%～100.5%，88.6%～102.3%。因此，6种萃取剂对氯噻啉都有较好的萃取能力，组合试剂萃取能力较优，其中正己烷-乙酸乙酯(体积比1∶1)萃取能力最强，稳定性较好。

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