任艳娥

（辽宁省朝阳县畜产品安全监察所，辽宁 朝阳 122000）

随着我县畜产品安全检验室的建立和完善，基层检验人员通过不断的理论学习并在实际操作中不断摸索经验，检验水平不断提高，本人也在工作之余总结了ELISA试剂盒在“瘦肉精”检测分析操作中几个关键环节的应注意的问题，现归纳如下：

1 连续加液环节的关键问题

1.1 加液环节建议“吸二打一”方式

加酶标工作液、抗体工作液洗板、底物及终止液等环节，属于连续加液操作，建议采用“吸二打一”的方式，“吸二打一”的方法：也就是吸液时移液器按到底，打液时，按到移液器第一个停止位置，慢吸液体，快速打下液体，枪头需垂直于板孔，不可插入板孔，避免溶液挂壁和交叉污染。这种操作方法优于“吸一打一”加样过程中，在板孔内不出现或者很少出现气泡，同时提高了加样速度，缩短前后样本反应的时间差

1.2 在加样的过程中还应注意问题

1.2.1 加样的过程中避免漏加或者重加

1.2.2 避免加样的过程中忘记更换枪头

1.2.3 避免忘记记录样本的加样顺序

1.2.4 如果样本量大于4条酶标板条时，建议使用多道移液器操作，避免时间差导致结果不准确

2 洗板操作的关键问题

2.1 准确加液

按说明书操作，确保每孔所加洗涤液量的准确和均一，间隔30s，人工清洗需4～5次，机洗3次即可，调好针头与孔底的距离，过多会溢出板孔，污染其它样本，过少则达不到洗涤的效果。

2.2 快速甩板

快速甩尽板孔内的液体。防止板孔里的液体对流，产生交叉污染，拍板最后一次洗板后，用吸水纸垫厚毛巾拍干。拍干后观察板孔，未被清除的气泡用未使用过的枪头戳破或洗耳球轻轻吹破。

3 反应显色环节，判断反应时间是关键

ELISA试剂盒原理属性决定了“温度”和“操作”会影响实验OD值，所以试剂盒的试剂显色时间需要根据实验室的室温环境、反应温度决定，试剂盒要求是反应温度是25±2℃显色15min，OD值读数会控制在1.5～2.5区间。如果室温及反应温度不在25±2℃区间，可以反应10 min时把显色酶标板取出，放到空白纸上观察，如显色较深，则立刻终止反应，如显色较浅，需要延长反应时间，但最长不能超过30min。

4 读数环节中的关键问题分析

县级检测机构普遍配备了酶标仪，可对样本进行定量及半定量的分析，在最后一步向加完板孔中加完酸性终止液后，读数时间严格控制在5min内。

4.1 OD值偏低问题分析

4.1.1 试剂盒可能变质；

4.1.2 试剂盒操作中漏加或者错加液体；

4.1.3 实验时间未按照实验要求记录；

4.1.4 混用不同批次的试剂；

4.1.5 试剂盒未按要求回温。

4.2 OD值偏高问题分析

4.2.1 实验时间记录不正确；

4.2.2 实验室温度高于要求温度；

4.2.3 混用不同批次的试剂；

4.2.4 洗板操作不彻底；

4.2.5 洗液配置不正确。

如果是由于以上原因导致OD值的不准确，影响了检验结果的准确性需重新检验。

以上仅为本人近几年在“瘦肉精”及药物残留检验工作中总结的几点经验，供同行参考。