张俊英,杨叔哲，邓 耀，贺苇军

(成都市妇女儿童中心医院 检验科，四川 成都610031)

人类乳头状瘤病毒(HPV)是一种小分子双链DNA病毒，对人皮肤、黏膜有高度亲嗜性。目前，已经鉴定出的HPV约有150种亚型，根据其致病性大小分为低危型和高危型。低危型HPV6和HPV11致尖锐湿疣最主要的基因型，尖锐湿疣治愈后容易复发，随着病程迁延，复发次数增多[1]，尖锐湿疣患者也可能导致癌变；高危型中的HPV16、18在世界范围内始终是引起宫颈癌变的最重要的亚型。HPV16在感染率和致病率上均占有绝对优势，被认为具有完全的细胞转化功能和致瘤性[2]；虽然HPV18在国内的检出率不高，但HPV18感染者并发高危亚型HPV的持续或反复感染已被确认为宫颈癌发生的最主要原因。宫颈癌是威胁到女性生命的重要杀手，筛查和疫苗是防治宫颈癌的主要手段[3]。我国对于宫颈癌的筛查缺乏完全统一的方案，疫苗在我国大陆地区还没有普及，本文力求从大量的患者中寻找威胁女性健康的重要两类基因型HPV(6/11)和HPV(16/18)的感染情况、感染模式及其年龄特点，旨对宫颈癌的筛查和以后相关疫苗的使用起到一定的作用。本文标本来自于2012年6月至2016年5月成都地区58650例女性宫颈脱落细胞，采用亚能生物公司试剂盒检测出人乳头瘤病毒基因分型23型，其中HPV 18种高危亚型和5种低危亚型，本文重点研究其中的HPV(6/11)和HPV(16/18)，结果如下。

1 资料与方法

1.1一般资料同期来我院做孕前检查或常规体检女性，年龄13-81岁，平均年龄34.62岁，按年龄分为<20岁、20-29岁、30-39岁、40-49岁、50-59岁、>60岁共6个组。

1.2仪器与试剂仪器包括Hema9600梯度基因扩增仪、YN-H16恒温杂交仪，采用亚能生物公司人乳头瘤病毒基因分型(23型)检测试剂盒(PCR-反向点杂交法)。

1.3方法严格按照试剂说明书进行操作。

1.4统计学处理应用EXCEI软件处理数据。组间率的比较采用χ2检验分析数据，以P<0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.158650例宫颈脱落细胞HPV总体感染情况

58650例标本中感染HPV12399例数，总感染率21.14%，其中 HPV6、11、16、18四种基因型占阳性感染率的26.33%；18种高危型HPV排例前八位的依次是52、16、58、53、51、68、56、18，HPV16和HPV18顺序分别为第二位和第八位，感染率分别为9.86%和3.93%；五种低危型HPV感染的顺序为81、43、42、6、11,HPV6和HPV11位居第四位和第五位，感染率分别3.10%和1.92%。

2.258650例宫颈脱落细胞低危型HPV(6/11)和高危型HPV(16/18)检出结果。

从表1中看出12399例感染标本中，四种基因型中高危型HPV(16/18)的阳性率为73.32%(2394/3265)，HPV16占HPV(16/18)的71.51%(1712/2394)；四种基因型中低危型HPV(6/11)阳性率为26.68%(871/3265)，而HPV6占HPV(6/11)的61.77%(538/871)。

表1 低危型HPV(6/11)和高危型HPV(16/18)检出结果(n=12399)

2.3不同年龄段四种基因型感染情况

从表2 中可得出HPV6在<30岁年龄组高于其他年龄组(P均<0.01)，HPV18在<20岁年龄组高于其他年龄组，差异有统计学意义，其他年龄感染率差异没有统计意义(P>0.05)； HPV11和HPV16感染率随年龄曲线呈U型分布，具有两个感染高峰年龄段是<20岁和≥60岁(P均<0.01)，差异有统计学意义。

表2 不同年龄组HPV(6/11)和HPV(16/18)检出结果

*P<0.01

图1 不同年龄组HPV(6/11)、(16/18)感染率

2.4HPV(6/11)和HPV(16/18)的感染模式

从表3得知HPV(6/11)一重感染率为43.97%(383/871)，二重感染率为28.13%(245/871)，三重感染率16.65%(145/871)；HPV(16/18)一重感染率为52.30%(1252/2394)，二重感染率为28.49%(682/2394)，三重感染率11.49%(275/2394)。一重感染率和多重感染几乎50%，二重感染占多重感染的一半，多重感染随合并感染的型别数增加逐渐下降。

表3 HPV(6/11)和HPV(16/18)的感染模式

2.5多重感染出现频率最多的前五位基因型

从表4可算出HPV6、HPV11、HPV16、HPV18的合并多重感染频率最多前五位基因型比重分别是85.16%、84.83%、71.04%、85.93%；HPV6和HPV18的前五位基因型顺序皆是52、16、58、51、81，HPV11前五位依次是16、81、52、59、58，HPV16前五位依次是52、58、81、53、51， HPV16最常与HPV52、HPV58构成多重感染,HPV18和HPV6最常与HPV52、HPV16构成多重感染,HPV11最常与HPV16和HPV81构成多重感染；多重感染中最常见的基因型HPV(6/11)是52，16，58，81，51，59，33；而HPV(16/18)是52，16，58，81，51，53，33。

表4 HPV(6/11)和HPV(16/18)的多重感染模式

3 讨论

四种基因型感染率与新疆[4]HPV16、HPV18检出率为10.9%和1.7%相比， HPV(16/18)检出率均比之高与无锡市[5]HPV6、HPV11、HPV16、HPV18检出率分别为2.43%、1.35%、13.99%、6.74%相比，HPV(6/11)比之高，HPV(16/18)基本一致，这说明四种基因型有地区差异。

四种基因型感染率随年龄有差异，HPV6、HPV18感染高峰分别为<30岁和<20岁(P<0.01)，差异有统计意义。HPV11、HPV16感染随年龄呈U型分布，<20岁和≥60岁是感染的两个高峰期(P<0.01)。HPV18感染高峰年龄段为<20岁与新疆[4]研究结果一致，HPV11和HPV16感染高峰年龄段与Lazcano[6]报道一致，在普通人群中，年龄小于25岁(16.7%)和大于65岁的女性(23.10%)HPV的检出率最高。<20岁HPV较高的感染率与性行为活跃相关，中老年人较高的感染率认为与机体免疫力下降有关[7]，我们应该抓住每个年龄段HPV感染的特征，加强对女性预防HPV知识的培训和筛查，降低HPV感染率。

HPV(6/11)和HPV(16/18)一重感染率和多重感染几乎50%，二重感染占多重感染的一半，说明HPV(6/11)和HPV(16/18)都以单独感染为主，二重感染也占很高比例。多重感染中最常见的基因型HPV(6/11)是52，16，58，81，51，59，33；而HPV(16/18)是52，16，58，81，51，53，33，说明52，16，58，81，51，59，33，53与四种基因型高频率合并多重感染，这种模式在宫颈病变的发生发展中起着不可忽视的作用。关于多重感染的原因，Keith等[8]指出由于HPV不同亚型编码外壳蛋白的基因变异较大，不同亚型HPV间基本无交叉保护性抗体，易造成HPV多重感染或多次感染。多重感染是否增加宫颈癌的发生率，目前说法不一。Teresa S M[9]宫颈病变严重程度与HPV多重感染不相关，与HPV亚型密切相关，2/3的CIN患者的HPV16阳性；但也有研究[10]认为，多重HPV感染是宫颈上皮内低级别病变向高级别病变和宫颈癌发展的重要危险因素；赵爱华[11]研究指出从正常组织到CINII的不同病变中，多型别感染比例随病变级别上升逐渐增加，多型别感染对宫颈病变以及宫颈癌的发展起促进作用；Sang A L等[12]研究显示，单一HPV感染可使宫颈癌患病风险增加19.9倍，而多重HPV感染使其风险增加31.8倍；楼微华[13]指出HPV16单一感染者中发生宫颈高级别病变的比例最高，HPV18多重感染者中发生宫颈高级别病变的比例显著高于HPV18单一感染者，这可能提示HPV18亚型在CINⅠ-Ⅲ进展阶段感染的病程短暂且进展较快，Fragoso等[14]指出HPV18相关的宫颈癌通常以整合的形式存在于宿主细胞中，具有高E6/E7表达性，能迅速活化细胞内信号通路和促进相关癌基因转录表达。尽管HPV6、HPV11在低危型中感染率最低但严重引起尖锐湿疣，HPV18感染率位居高危第八位但严重引起宫颈癌，可能多种基因型相互促进起了一定的作用。

关于HPV6、HPV11与生殖道尖锐湿疣，有很多的研究报道。刘红杏[15]研究指出生殖道尖锐湿疣主要与HPV6、11、42、43、44等低危型有关，少数为高危型或混合感染，混合感染以HPV6+11型为主,其次是HPV11+16型；LIU XG[16]研究指出在近100种HPV亚型中有30余种与尖锐湿疣相关，其中HPV6、11、16型和HPV18型4个亚型是引起尖锐湿疣的常见亚型；周权[17]指出尖锐湿疣患病率有2个高峰：20-24岁和35-39岁，并指出处于性活跃期的女性是尖锐湿疣的高危人群。

我国是宫颈癌高发国家，近年来年轻的宫颈癌患者有明显上升趋势。有性行为的女性80%曾感染HPV病毒，但大多数人可自然清除病毒，只有HPV持续性感染才是导致宫颈上皮恶性转化的最重要的危险因素[18]。HPV高危亚型持续感染由宫颈上皮内瘤变发展为浸润癌可长达8-12年[19]。HPV基因型似乎是感染持续及进展最重要的决定因素，其中HPV16亚型致癌风险最高，约占全球宫颈癌病例的55%-60%，其次是HPV18亚型，约占10%-15%，另有其他12个亚型与其余病例相关。刘北陆[20]调查研究HPV16，18感染女性3年转阴率≥36.4%，HPV16，18感染的转阴率随时间推移逐渐下降，而转阴性后没有再转阳的情况发生。早筛查，及时有效的干预治疗将对宫颈癌的防治具有重要意义。

人乳头瘤病毒疫苗的成功研制和运用，开启了人类一级预防宫颈癌的新的篇章，美国食品和药物管理局研究出预防宫颈癌为主的高危型HPV三种疫苗，第一种二价疫苗，包括HPV16 和HPV18型;第二种四价疫苗，包括HPV16、HPV18、HPV6、HPV11亚型，第三种九价疫苗四种高危HPV基因亚型外还覆盖了另5种高风险基因亚型，由于不同国域、地区，HPV流行基因型不同，研究出适合我国的疫苗是当务之急。

参考文献：

[1]王 琼,吴 迪.51例尖锐湿疣患者潜在性癌变的临床实验研究[J].中国麻风皮肤病杂志,2006,22(06)：472.

[3]Wang L，Dai S Z，Chu H J，et al.Integration sites and genotype distributions of human papillomavirus in cervicalintraepithelial neoplasia[J].APJCP，2013，14(6)：3837.

[4]王丽娜，任 艳，牟路萌，等.新疆北疆部分地区HPV的流行情况及高危型HPV16，18与宫颈病变的关系[J].石河子大学学报，2016，34(1)：58.

[5]蔡静芬，杨幼易.无锡市113207名妇女宫颈人乳头瘤病毒感染状况分析[J].中国医药导报，2014，11(7)：104.

[6]Lazcano-ponce E，Herrero R，Mu O N，et al.Epidemiology of HPV infection among Maxican women with normal cervical cytology[J].Int J Cancer，2001，21：412.

[7]李永川，徐含青，赵娜，等.重庆地区32882例女性宫颈人乳头瘤病毒的感染状况调查[J].第三军医大学学报，2016，38(9)：1031.

[8]Lo KW,Wong YF,Chan MK,et al．Prevalence of human papillomavirus in cervical cancer:A multicenter study in China[J]．IntJ Cancer，2002，100(3)：327.

[9]Teresa S M,Daniela R,Michela S,et al.Typing of human papillomavirus in women with cervical lesions:prevalence and distribution of different genotypes.[J].Journal of Medical Virology,2009,81(2)：271.

[10]Spinillo A,Bello B D,Gardella B,et al.Multiple human papillomavirus infection and high grade cervical intraepithelial neoplasia among women with cytological diagnosis of atypical squamous cells of undetermined significance or low grade squamous intraepithelial lesions[J].Gynecologic Oncology,2009,113(1)：115.

[11]赵爱华,张红华.多重人乳头瘤病毒感染与宫颈癌 及癌前病变的相关研究[J].宁夏医学杂志，2009，31(8)：684.

[12]Sang A L,Kang D,Sang S S,et al.Multiple HPV infection in cervical cancer screened by HPVDNAChip?[J].Cancer Letters,2003,198(2)：187.

[13]楼微华，洪祖蓓，狄文，等.不同人乳头瘤病毒高危亚型与宫颈病变发生的关系[J].上海医学，2013,36(9)：805.

[14]Fragoso-Ontiveros V,Alvarez-García R M,Contreras-Paredes A,et al.Gene expression profiles induced by E6 from non-European HPV18 variants reveals a differential activation on cellular processes driving to carcinogenesis[J].Virology,2012,432(1)：81.

[15]刘红杏,庞伟鸿,宁学玲,等.生殖道尖锐湿疣患者HPV的基因分型检测及评价[J].检验医学与临床,2009,6(13):1079.

[16] LIU XG,LIU Z,TIAN HW.Human Papillary Virus Infection and Control [M].Beijing:People’s Medical Publishing House,2009:：107.

[17]周 权,黄民主,向辉标,等.某区已婚妇女尖锐湿疣患病状况及其影响因素的研究[J].中国现代医学杂志,2011,21(17):2059.

[18]Woodman CB，Collins S，Winter H，et al.Natural history of cervical Human papilloma virus infection in young women：along a longitudinal cohort study[J]．Lancet，2001，357(9271)：1831.

[19]Xu XX,Zhou JS,Yuan SH,et al.Distribution of HPV genotype in invasive cervical carcinoma and cervical intraepithelial neoplasia in Zhejiang province,Southeast China:Establishing the baseline for surveillance [J].Int J Environ Res Public Health,2015,12(9)：10794.

[20]刘北陆,栾建兵,郭文潮,等.女性HPV16,18长期感染与其性伴侣感染相关性的研究[J].现代预防医学,2013,40(17):3307．