吴汉钟

无偿献血旨在拯救他人生命，将自身血液无私奉献给社会公益事业。然而，血液传播是病毒传播的主要途径之一，一旦献血者血液中含有病毒，却未能经过筛查排除危险，将会导致血液传播病毒的风险提升[1]。血液病毒中HIV、HBV、HCV属于危险性较高的三类，针对这三种病毒的血液筛查一直是无偿献血过程血液标本检测的重点内容[2]。本次研究以汕尾市无偿献血者的血液标本18776份的HBV、HIV、HCV的筛查为课题，探究酶免检测联合核酸检测的应用效果。现报告如下。

1 资料与方法

1.1 标本来源研究的18776份标本均来自2016年1月—2017年5月汕尾市中心血站的无偿献血者，其中包括单采献血者与全血献血者。献血者的年龄18～53岁，平均(36.7±5.2)岁。所有献血者均经过严格的健康检查，要求对献血者进行体检和健康征询，经过初期筛查合格后才允许捐献，研究所用标本均在献血者知情同意后方可采集留取。

1.2 仪器与试剂

1.2.1 仪器主要采用包括：URANUS AE150全自动酶免仪一体机，设备购自深圳爱康；浩源血液核酸筛查系统，主要有ABI7500荧光PCR仪，购自美国ABI；EZbead自动核酸提取系统，购自美国TBG。所有设备均经过校验，处于校验合格期限内，方可使用。

1.2.2 试剂采用英科新创(厦门)生物科技有限公司与北京万泰药业股份有限公司生产的2种ELISA试剂进行HBsAg、抗-HIV、抗-HCV检测。使用的试剂在中国药品生物鉴定所检验合格批准后，方可投入使用。使用过程需要严格按照试剂盒的说明书执行操作，抗HIV阳性标本需要送交疾病预防控制中心进行再次确认。病毒核酸检测采用的HIV、HCV、HBV核酸检测试剂盒购自上海浩源生物科技有限公司。

1.3 方法

1.3.1 酶免检测18776份血液标本均依照我国《献血者健康检查要求》[3], 采用英科新创(厦门)生物科技有限公司与北京万泰药业股份有限公司生产的2种ELISA试剂进行HBsAg、抗-HIV、抗-HCV检测。

1.3.2 核酸检测所有酶免检测合格的标本再次进行核酸检测，采用EZbead自动核酸提取系统进行自动处理，取每份标本150 μL，每8份标本混合成1份汇集池标本(1.2 mL/份)。在经过EZbead自动核酸提取系统与ABI7500荧光PCR仪对血液标本采取核酸定性筛查，对血液标本进行HBV、HIV、HCV核酸检测。检测中的每批均设置1个阳性质控和1个阴性质控及1个外部阳性质控，汇集池中均含有DNA内对照与RNA内对照。病毒核酸检测采用的HIV、HCV、HBV核酸检测试剂盒购自上海浩源生物科技有限公司。

1.4 判定标准

1.4.1 酶免检测判定任一种试剂检测结果为阳性，重新取血样进行双孔复试，若复试任一孔表现为阳性，则判定不合格[4]。所有检测结果均根据试剂盒说明书通过迈科实验室管理系统和Liswell实验室管理软件自动判读，其中发现HIV阳性标本立即送交疾病预防中心进一步确认。

1.4.2 核酸检测判定若汇集检测结果表现为核酸阴性，汇集池中8份标本合格；若汇集检测结果表现为核酸阳性，则拆分检测汇集池中的8份标本，拆分检测结果若为表现出核酸阴性，则视为NAT检测阴性，若拆分检测结果表现出核酸阳性，则视为NAT检测阳性[5]。所有标本接受试验的结果均需要根据试剂盒说明书要求由浩源integOne实验室管理软件进行自动判读。

2 结果

2.1 酶免检测结果2016年1月—2017年5月采集的18776份献血者血液标本中，在酶免检测筛查下，存在单项阳性标本282份，占据15.02‰。这些单项阳性标本中，HBsAg单项阳性共计212份，占据11.29‰；抗-HIV单项阳性标本8份，占据0.43‰；抗-HCV单项阳性标本62份，占据3.30‰。所有样本中，有118份血液样本的其他检测指标不合格，因此，可进行核酸检测的HBsAg、抗-HIV、抗-HCV酶免检测合格血液样本数量为18376份。见表1、表2。

表1 各时间段酶免检测结果

2.2 核酸检测结果经常规检测合格的18376份血液标本，经过核酸检测后发现存在34份汇集检测阳性，阳性率为1.85‰。其中经拆分检测中病毒核酸阳性的有17份，另外17份拆分检测呈阴性。而拆分核酸检测阳性标本中，HBV DNA阳性17份，阳性率为1.85‰。见表3。

3 讨论

临床输血安全一直是人们关心的重点问题，直接关系着用血患者的生命健康。有关输血安全的研究有很多，大部分均在血液配型输送方面的探索，对血液来源的安全性考虑不够充分。我国血液质量管理在不断的完善，无偿献血质量管理也同样在不断完善，尤其是针对血液样本中的病毒筛查，更是成为血液检测合格与否的重点[6]。但病毒窗口期、免疫沉默、病毒变异等因素容易造成血液样本酶免检测发生漏检，导致血液样本存在病毒风险[7]。核酸检测技术的应用，在一定程度上弥补了ELISA法检测存在的不足，有助于进一步提升血液样本中HBV、HIV、HCV病毒的检出率，从而保证无偿献血血液样本安全，为临床输血安全打下基础[8]。

表2 各时间段常规检测合格份数

表3 各时间段核酸检测结果

采用酶免检测,可有效筛查献血者血液标本中的不合格血液标本,在本次研究中经酶免检测后发现,共有282份标本不合格,其他检测不合格血液标本有118份，因此，初步筛查样本HBV、HIV、HCV的酶免检测合格样本数为18376份。但实际上，经酶免检测后的样本中仍然可能存在含有HBV、HIV、HCV病毒的血液样本，主要是因对血液样本进行酶免检测过程可能产生漏检，造成血液样本中仍然包含不合格血样，这会对血液的使用造成严重影响，可能对临床用血安全带来极大隐患[9]。

核酸检测是检测血液中是否存在病毒核酸，采用PCR技术，通过扩增试剂及引物，覆盖常见病毒毒株，存在较高的灵敏度。该方法能够提升检测特异性，有助于降低假阳性的概率[10]。在酶免检测后结合使用核酸检测，有助于提升血液样本中HBV、HIV、HCV的检出率，降低漏检发生率。在本次研究中，酶免检测后采用核酸检测，仍然测得1.85%的病毒阳性血液样本，这说明采用酶免检测筛查中存在了漏检样本，给血液使用者带来了病毒传播风险。通过核酸检测将漏检的病毒样本检测出来，发现为17份HBV DNA阳性。研究结果说明，针对无偿献血者的血液标本采取核酸检测，有助于解决酶免检测漏检问题，提升了血液样本的病毒检出率，从而保证了临床用血的安全。

综上所述，汕尾市无偿献血者HBV、HCV、HIV的酶免检测联合核酸检测，在很大程度上提升了血液病毒检出率，降低了病毒传播的风险，提升了临床输血的安全性。

[1] 段学云，左江涛，焦东丽，等．输血传播人类免疫缺陷病毒及乙型肝炎病毒和丙型肝炎病毒的风险评估[J]．中国医药，2015，10(4)：606-608．

[2] 李微，温馨娜，郑慧丽．齐齐哈尔市无偿献血者血液HBV、HCV、HIV酶免检测联合核酸检测结果分析[J]．中国继续医学教育，2016，8(21)：35-36．

[3] 国家卫生和计划生育委员会，国家标准化管理委员会．GB18467-2011献血者健康检查要求[S]．北京：中国标准出版社，2012．

[4] 林诗雅，王淏，李仲平，等．2015年广州地区无偿献血者核酸和ELISA检测结果分析[J]．临床输血与检验，2017，19(2)：137-141．

[5] 王立林，卢亮，聂冬梅，等．2种核酸筛查系统对血清学阳性献血者检测结果的分析[J]．中国输血杂志，2015，28(9)：1090-1093．

[6] 陈锦艳，黄伯全，黎世杰，等．开展HBV和HCV核酸检测条件下献血者ALT筛查的意义探讨[J]．中国输血杂志，2015，28(6)：669-671．

[7] 王霞，许晓绚，吴桂丹，等．深圳地区2003—2014年献血者 HIV 血液筛查结果及其窗口期确认[J]．国际检验医学杂志，2016(3)：299-302．

[8] 王胜蓝，吉克春农，魏禄川，等．开展核酸检测后凉山地区献血者HIV/HBV/HCV筛查策略探讨[J]．中国输血杂志，2016，29(7)：679-681．

[9] 刘祎，傅立强，朱守兵．无偿献血者血液病原体ELISA与核酸检测结果分析[J]．预防医学，2017，29(6)：579-581，584．

[10] 杨刚，马晓军，杨文勇，等．核酸检测技术在基层血站血液筛查中的应用[J]．中国输血杂志，2016，29(11)：1249-1251．