曲婉莹 刘志伟 刘璐佳 王 欢 景伟超 王有鹏△

（1.黑龙江中医药大学，黑龙江 哈尔滨 150040；2.黑龙江中医药大学附属第二医院，黑龙江哈尔滨 150001）

肺炎支原体是儿童和青少年原发性非典型肺炎的常见病原菌［1-2］。研究显示，近年来肺炎支原体肺炎发病率逐年增高，且难治性肺炎支原体肺炎也有增多趋势［3］。目前，肺炎支原体感染的致病机制尚不十分明确，认为与直接侵入、细胞损伤以及免疫功能紊乱等机制密切相关［4］。本实验通过观察肺炎支原体感染大鼠血清中干扰素-γ（IFN-γ）、白细胞介素-4（IL-4）的表达趋势，探讨免疫功能紊乱在肺炎支原体肺炎发生发展中的作用。

1 材料与方法

1.1 实验动物 SPF级Wistar大鼠95只，雄性，体质量（200±20）g，由黑龙江中医药大学动物实验中心提供，动物合格证批号：SCXK（黑）2015003。饲养于室温（20±2）℃，湿度 40%～50%，SPF级实验室。

1.2 试药与仪器 抗支糖浆（黑龙江中医药大学附属第二医院制剂室生产，生产批号：黑药制字Z20131020，规格：每瓶装 250 mL）；阿奇霉素（辉瑞制药有限公司，生产批号：N37482，规格：0.1 g×6 袋）；大鼠IL-4、IFN-γ ELISA试剂盒 （南京建成生物科技有限公司）。研究型显微镜（OLYMPUS日本，仪器型号BX60）；电子天平（上海市梅特勒-托利多有限公司，仪器型号FA1104）；HH-S恒湿水浴锅（江苏金坛医疗仪器厂，仪器型号HH-S11.8）；-80℃超低温冰箱（德国Eppendorf公司，仪器型号Premium U570）；高速台式离心机（上海医用分析仪器厂，仪器型号TGL16G）；超纯水系统（香港Heal Force公司，仪器型号NW10LVF）

1.3 分组与造模 实验动物适应性饲养1周后，随机分为空白对照组、模型对照组、抗支糖浆组、阿奇霉素组。除空白对照组20只外，其余每组25只。模型制备采用10%水合氯醛腹腔麻醉，除空白对照组外，其余各组给予106CCU/mL的肺炎支原体菌液100 μL，缓慢滴入大鼠鼻腔，随呼吸自然进入肺部，空白对照组给予等量生理盐水滴鼻，共连续 4 d［5］。

1.4 给药方法 各组在肺炎支原体最后1次接种后1 d开始给予药物干预，抗支糖浆组每日予抗支糖浆0.54 mL/100 g灌胃，阿奇霉素组予阿奇霉素（首次给药量为每天4.5 mg/100 g，第2至5日为每日2.25 mg/100 g）灌胃给药，空白对照组和模型对照组灌胃等量生理盐水。

1.5 标本采集及检测 于给药后第1、3、5、8、10日采集标本，每个时间点各组分别取5只大鼠，空白对照组取4只，麻醉后腹主动脉取血，3000 r/min离心15 min，取离心后的血清保存于-80℃的环境中，作为待测样品用于检测IFN-γ、IL-4。取颈部、前胸正中皮肤切口，暴露气管及肺脏，分离气管，结扎右主支气管，于左侧主支气管进行气管插管，进行支气管肺泡灌洗。用针管抽取2.5 mL预热的37℃生理盐水，缓慢注入后保留20 s，然后回抽，同样操作重复5次。将每只大鼠收集的支气管肺泡灌洗液以1500 r/min离心10 min，取离心后的上清液保存于-80℃的环境中，作为待测样品［6］。

1.6 统计学处理 应用SPSS17.0统计软件。计量资料以（±s）表示。凡符合正态分布和方差齐性的数据，采用单因素方差分析，多组间两两比较采用LSD法，凡不符合正态分布和方差齐性的数据，采用非参数秩和检验。P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结 果

2.1 大鼠BALF中肺炎支原体PCR检测结果 于给药后第1日，除空白对照组外，模型对照组、抗支糖浆组、阿奇霉素组的大鼠支气管肺泡灌洗液中肺炎支原体-PCR检测均为阳性，证明各组大鼠成功感染了肺炎支原体。

2.2 各组大鼠血清中IFN-γ、IL-4表达水平比较 见表1。空白对照组、抗支糖浆组、阿奇霉素组分别与模型对照组比较，各时间点IFN-γ表达显著增高 （P＜0.05）、IL-4 表达显著降低（P＜0.05）；抗支糖浆组各时间点与阿奇霉素组各时间点间无显著性差异 （P＞0.05）。除空白组外，其余各组在第3日时，IL-4表达显著高于其他时间点（P＜0.05）。

表1 各组大鼠血清中 IFN-γ、IL-4及 IFN-γ/IL-4比较（±s）

表1 各组大鼠血清中 IFN-γ、IL-4及 IFN-γ/IL-4比较（±s）

与空白对照组同时期比较，*P＜0.05；与模型对照组同时期比较，△P＜0.05。

组 别 时间 IFN-γ/IL-4空白对照组 1 d 1.40±0.13（n=4） 3 d 1.27±0.14 5 d 1.35±0.12 196.00±13.76 99.40±6.53 10 d 195.22±17.42 99.53±5.18 1.49±0.11模型对照组 1 d 167.79±15.14*131.39±10.21*1.94±0.24（n=5） 3 d 112.58±18.17*172.27±11.57*1.99±0.25 5 d 117.66±15.55*166.61±11.28*1.99±0.25 8 d 124.97±13.96*166.86±10.86*1.98±0.19 10 d 157.49±10.58*158.31±9.33* 1.97±0.23抗支糖浆组 1 d 174.40±13.94△121.47±7.06△ 1.28±0.15*（n=5） 3 d 168.84±14.45△ 133.46±8.42△ 0.65±0.92*5 d 169.21±12.08△ 123.76±8.84△ 0.71±0.12*8 d 171.53±15.90△ 122.48±10.16△ 0.75±0.11*10 d 184.54±9.37△ 120.94±12.75△ 1.00±0.06*阿奇霉素组 1 d 171.94±11.50△ 123.55±4.75△ 1.44±0.15△（n=5） 3 d 166.50±14.00△ 132.14±6.62△ 1.27±0.11△5 d 168.29±9.24△ 125.12±6.95△ 1.37±0.12△8 d 168.47±10.93△ 124.70±10.47△ 1.41±0.17△10 d 181.50±13.14△ 122.03±6.66△ 1.54±0.18△IFN-γ（ng/L） IL-4（ng/L）195.11±15.96 101.51±8.28 198.35±15.92 100.49±6.17 198.09±15.06 99.97±7.11 8 d 1.36±0.16

2.3 各组大鼠血清中IFN-γ/IL-4比较 见表1。与模型对照组比较，IFN-γ/IL-4比值显著降低 （P＜0.05）；抗支糖浆组各时间点与阿奇霉素组各时间点间无显著差异（P＞0.05）。

3 讨 论

小儿肺炎支原体肺炎，多发于秋冬季，发病有区域流行的现象［7-8］。治疗上，鉴于小儿生理特点，临床较少应用四环素和喹诺酮类药物［9］，因此大环内酯类抗生素已成为小儿支原体肺炎一线药物。研究显示，阿奇霉素除具有确切抗菌活性外，还有一定免疫调节作用，可通过降低炎症细胞因子和吞噬细胞氧化产物浓度，对气道产生直接保护作用。该药疗效较好，且安全性高［10-11］。但需注意的是大环内酯类抗生素耐药问题也已凸显。鉴于此，合理用药是治疗小儿支原体肺炎的关键所在，中药在治疗本病上有其独特的优势，中西医结合治疗亦将逐步成为新的治疗趋势。

抗支糖浆是以王有鹏教授为首的课题组，总结多年临床经验，科学配伍而成的有效方剂。该方由蜜麻黄、射干、石膏、苦杏仁、蜜百部、桑白皮、川贝母、黄芩、鱼腥草、拳参、芦根、僵蚕、地龙等组成，配伍精当，制方严谨。方中蜜麻黄为君药，取其宣肺泄热之功；配伍善祛痰利咽，开痰结之射干，取其辛开苦降、宣降肺气之功，使痰祛气顺而咳止；配伍辛甘大寒之石膏，相制为用，使其宣肺而不助热，清肺而不留邪，肺气肃降有权，咳乃平，二者共为臣药。苦杏仁、蜜百部、桑白皮、川贝母化痰止咳；黄芩、鱼腥草、拳参等清热解毒；芦根清热生津；僵蚕、地龙开肺活血通络，共为佐药。全方配伍严谨，以宣肺清热为主，辅以化痰止咳，平喘通络，使肺热邪毒得以祛除，诸症得以改善，是为标本兼治之方，临床应用效如桴鼓［11-12］。

本次实验选取的指标IFN-γ、IL-4分别作为Th1及Th2类细胞的代表性细胞因子，二者的表达异常或比值异常，在一定程度上反映了机体细胞免疫功能的紊乱［13-14］。且IL-4增高和Th1/Th2比值降低对判断肺炎支原体感染病情轻重有着十分重要的意义，当病情越重时，IL-4增高越明显，Th1/Th2比值降低亦越明显。同时，当IL-4增高时，机体可通过B淋巴细胞分泌IgE，而IFN-γ对IgE的合成有一定抑制作用，所以当IL-4增高和Th1/Th2比值降低时，机体IgE增高，可引发气道高反应，诱发哮喘发作。从本次实验的结果看，在本实验周期内，肺炎支原体肺炎大鼠IFN-γ表达显著下降，IL-4表达显著升高，Th1/Th2表达失衡，在第3日时表现尤为显著，治疗上抗支糖浆和阿奇霉素均能促进肺炎支原体大鼠IFN-γ的表达，同时抑制IL-4的表达，且在纠正以上免疫指标失衡方面疗效相当，提示抗支糖浆、阿奇霉素均可调节IFN-γ、IL-4的表达，从而调节Th1/Th2失衡，以改善MPP感染大鼠免疫功能紊乱的状态，进而在一定程度上能减轻气道高反应，防止其演变为哮喘［15］。

大量文献报道，肺炎支原体肺炎其临床症状轻重不一，肺外并发症较常见，极易引起多器官、系统受损［8］。除上文提到的哮喘外，在MP感染肺外并发症中，常见的并发症为消化系统、心血管系统、神经系统、泌尿系统、血液系统和皮肤黏膜等多脏器的损害。由于消化系统与呼吸系统的发病率最高［16］，因此，本病的研究应更加深入，本课题组将基于抗支糖浆对MP感染模型大鼠免疫应答的调控，进一步探讨抗支糖浆对MP感染模型大鼠肺外组织是否有影响。

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