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1.福建中医药大学药学院，福建 福州 350122；2.福建省中医药研究院，福建 福州 350003

太子参根际土壤酚酸类自毒物质的分析测定

吴丹1赵立2庞文生1周美兰2胡娟1.2*

1.福建中医药大学药学院，福建 福州 350122；2.福建省中医药研究院，福建 福州 350003

目的对太子参根际土壤中酚酸类自毒物质进行分析测定。方法1 mol/L的NaOH溶液超声提取样品，过滤；HCl调节滤液pH至2.5，乙酸乙酯萃取，有机相挥干；甲醇定容，高相液相色谱检测。结果太子参种植后的土壤中对羟基苯甲酸、香草酸、丁香酸、对香豆酸等物质含量高于种植前土壤。结论太子参种植后的土壤中酚酸类自毒物质含量升高。

太子参；根际土壤；酚酸；自毒物质

太子参为石竹科植物孩儿参Pseudostellariaheterophylla(Miq.)Pax ex Pax et Hof f m.的干燥块根，有益气健脾、生津润肺的功效[1]。从太子参中提取的多糖在抗T2DM降糖作用中具有潜在的实用价值[2]。目前太子参在福建、贵州、江苏、安徽、山东等地区均有种植，道地产区福建柘荣县产量较大[3]。在同一块土壤中连续栽培同种或同科的作物时，即使在正常的栽培管理状况下，也会出现生长势变弱、产量降低、品质下降、病虫害严重的现象即为连作障碍[4]；酚酸类自毒物质已经被证明是导致连作障碍的主要原因之一[5]。太子参种植的连作障碍导致的病虫害频发、土壤恶化等问题，使得药材产量和品质严重降低。笔者采用HPLC方法，对太子参根际土壤中羟基苯甲酸、香草酸、丁香酸、对香豆酸进行测定，考察酚酸类自毒物质在太子参种植前后土壤中的变化趋势。

1 仪器与材料

1.1 仪器 U-3000高效液相色谱仪(U-3000 DAD检测器、Chromeleon 7数据处理系统，Dionex公司)；AE240S型电子分析天平(梅特勒-托利多有限公司)；KQ3200DE数控超声清洗器(昆山市超声仪器有限公司)；Orbital shaker水平振动脱色摇床(海宁市其宁贝尔仪器公司)；pHS-3B精密 pH 计(上海雷磁仪器有限公司)；RE-201D旋转蒸发仪(巩义市予华仪器有限公司)。

1.2 材料 太子参土壤样品采集于福建省柘荣县。香草酸(批号：110776-201503，中国食品药品检定研究所)；丁香酸(批号：MUST-16041901)、对香豆酸(批号：MUST-16060613)购自成都曼思特生物科技有限公司；对羟基苯甲酸(批号：SH8200，北京索莱宝科技有限公司)。氢氧化钠(批号：160516，西陇科学股份有限公司)，盐酸(批号：20141125，衡阳市凯信化工有限公司)，乙酸乙酯(批号：20160413，国药集团化学试剂有限公司)，冰乙酸(批号：20101026，国药集团化学试剂有限公司)。

2 方法

2.1 样品 采集选取太子参种植地块，采集种植前后土壤样品。五点取样法取样，除去表层土壤(0～5 cm)，抖根法收集。除去细根、石块等杂物，风干，研磨，过2 mm筛，密封保存。共采集样品8份，样品信息见表1。

2.2 溶液制备

2.2.1 对照品溶液的制备 精密称取对羟基苯甲酸1.09 mg、香草酸1.05 mg、丁香酸1.02 mg、对香豆酸1.04 mg，置于100 mL容量瓶中，加甲醇并定容至刻度，得混合对照品溶液。

表1 太子参土壤样品详细信息表

注：1.以h命名的样品为太子参收获期采集的根际土壤样品，q命名的样品为未种植太子参土壤样品。2.H1为太子参开花期采集的根际土壤样品，Q1为未种植太子参土壤样品。

2.2.2 供试品溶液的制备 分别称取8份样品各25 g，置于500 mL锥形瓶中，记为q3、h3、q4、h4、q5、h5、Q1、H1。分别加入1 mol/L NaOH溶液200 mL，振荡，超声30 min，置于摇床上振摇2 h。过滤，滤液用盐酸调节pH至2.5，静置过夜，离心。上清液转移至500 mL分液漏斗，加入200 mL乙酸乙酯溶液萃取两次，收集有机相。回收乙酸乙酯，残渣用甲醇溶解，定容至5 mL。0.45 μm微孔滤膜过滤，即得供试品溶液。

2.3 色谱条件 色谱柱：SinoChrom ODS-BP(4.6 mm×250 mm，5 μm)；检测波长：280 nm；流速0.6 mL/min；柱温：30 ℃；进样量：10 μL。流动相A为1%冰乙酸水溶液，流动相B为甲醇，0～17 min(A：75%～75%，B：25%～25%)，17～45 min(A：75%～60%，B：25%～40%)。

2.4 方法学考察

2.4.1 精密度实验 精密吸取同一供试品溶液，按“2.3”项下的色谱条件，连续进样6次，比较色谱峰保留时间，结果表明6次进样色谱峰相对保留时间和相对峰面积的RSD值在0.12%～0.35%，说明仪器精密度良好。

2.4.2 重复性实验 取同一样品，按“2.2.2”项下方法，平行制备6份供试品，按“2.3”项下色谱条件测定，结果表明6次进样色谱峰相对保留时间和相对峰面积RSD值在1.06%～1.88%，表明此方法重复性良好。

2.4.3 稳定性实验 取同一供试品溶液，分别在0、12、24、36、48 h进样分析，色谱峰相对保留时间和相对峰面积的RSD值0.24%～1.31%。结果表明供试品溶液在48 h内稳定。

2.5 样品测定 太子参种植前后土壤中各酚酸物质检测结果见图1、表2。太子参种植前后土壤中均存在对羟基苯甲酸、香草酸、丁香酸、对香豆酸，但这四种酚酸类物质在种植前后土壤中含量存在差异，种植后土壤中四种酚酸物质的峰面积约是种植前土壤的5.5倍。收获期土壤h3中，丁香酸、对香豆酸峰面积较种植前q3增加；收获期土壤h4中，对羟基苯甲酸、香草酸、丁香酸峰面积较种植前q4均增加；收获期土壤h5中，对羟基苯甲酸、香草酸、丁香酸、对香豆酸峰面积依次比种植前q5增加了2.2、2.7、1.1、3.7倍；开花期土壤H1中，四种酚酸峰面积依次比种植前Q1增加了2.9、4.0、4.6、9.0倍。

表2 酚酸类物质峰面积表

3 讨论

3.1 中药材种植前后土壤中酚酸类物质含量的变化 由检测结果可以看出，4个采样点太子参根际土壤中检测出4种酚酸物质，分别为对羟基苯甲酸、香草酸、丁香酸、对香豆酸，其含量太子参种植后比种植前增加。有文献报导，人参、三七、玉竹等药用植物种植后土壤中均检测出多种酚酸类物质，其含量随连作年限的增加而累积[6]。

3.2 酚酸类物质对土壤和中药材种植的影响 酚酸类物质是植物生命活动过程中产生的重要次生代谢产物，通过根系分泌释放到根际土壤中。酚酸类自毒物质会损伤作物根系，改变土壤理化性质，使土壤中病原菌含量增大[7]。酚酸类自毒物质含量增加，会引发中药材生长缓慢、土壤酸化、病毒病严重等，产生连作障碍。

3.3 克服太子参连作障碍的措施 连作障碍导致的太子参产量降低、品质下降等问题日益严重，探索克服太子参连作障碍的有效措施刻不容缓。恰当的消减措施如土壤热处理、稻参轮作模式、微生物菌肥修复等[8]，既能加速太子参土壤中酚酸类物质降解，又可以有效抑制病原菌生长，改善土壤结构、修复土壤环境，从而缓解太子参连作障碍的发生。

综上所述，利用HPLC法检测太子参根际土壤中存在对羟基苯甲酸、香草酸、丁香酸、对香豆酸，种植后土壤含量变化呈增加趋势；根据酚酸类自毒物质的性质及特征，探索消减方法，为克服作物种植连作障碍提供理论依据。

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福建省中青年教师教育科研项目(JK2016019/JAT160222)，福建省属公益类科研院所基本科研专项(2015R1035-1)。

吴丹(1992-)，女，土家族，硕士研究生在读，研究方向为中药活性成分与质量标准研究。E-mail：wudan.112@qq.com

胡娟(1962-)，女，土家族，博士研究生，教授，研究方向为中药活性成分与质量标准研究。E-mail：huj@fjtcm.edu.cn

R284.1

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1007-8517(2017)24-0032-03

2017-11-07 编辑：程鹏飞)