江余明 曾峰 李志鸿★

高胆红素血症足月新生儿血清NSE临床分析

江余明 曾峰 李志鸿★

目的分析不同日龄及不同程度高胆红素血症足月新生儿血清神经元特异性烯醇化酶（NSE）水平的变化。方法选择2015年9月至2016年1月因高胆红素血症住院的足月新生儿共192例。入院当天进行第一次采血检测血清NSE、总胆红素、间接胆红素，根据黄疸程度给予光疗及益生菌等退黄治疗；纳入病例在第一次采血72h后进行第二次采血检测NSE。分别比较分析在相同日龄、不同胆红素水平以及相同胆红素水平、不同日龄两组中各亚组NSE有无差异。结果相同日龄范围内，血清NSE1水平随着胆红素的升高而升高，NSE1在A1与A3、B1与B3、B2与B3之间差异具有统计学意义（P＜0.05），NSE2在两组中各亚组之间差异均无统计学意义（P＞0.05）。在相同胆红素水平，NSE1在轻中度胆红素水平随日龄增加而降低，在重度胆红素水平，NSE1随日龄增加明显升高，且二者差异具有统计学意义（P＜0.05）；NSE2则随日龄增加而降低，且在各对应亚组差异具有统计学意义（P＜0.05）。结论高胆红素血症足月新生儿血清NSE水平随日龄及胆红素程度存在不同的变化，在早期预测胆红素脑损伤具有一定的价值。

新生儿高胆红素血症 神经元特异性烯醇化酶 脑损伤

目前诊断胆红素所致脑损伤的标准尚未统一，主要依赖临床表现及头颅MRI、BAEP等，但脑损伤通常在出现临床表现前即已发生，轻微的临床表现常不易察觉，而出现典型症状时说明脑损伤程度重，预后差，故依赖临床表现有一定的滞后性。神经元特异性烯醇化酶（NSE）作为一种预测脑损伤的生物标志物，具有标本容易获得、价格低廉、且可进行动态检查等优点，适合在基层医院开展。本研究共纳入2015年9月至2016年6月收治的高胆红素血症新生儿共192例，并对其血清NSE、血清总胆红素（TSB）进行检测，探讨在不同日龄、不同胆红素水平新生儿血清NSE的变化及其临床意义，现报道如下。

1 临床资料

1.1 一般资料 本研究所纳入病例均来自2015年9月至2016年1月在本院新生儿科因新生儿高胆红素血症住院的新生儿共192例，其中男99例，女93例。按照日龄将192例新生儿分为A组（24～72h）（88例）和B组（73～168h）（104例）。根据TSB水平定义轻度高胆红素血症（220.6～257μmol/L），中度高胆红素血症（257～342μmol/L）和重度高胆红素血症（＞342μmol/L）。根据TSB水平对A组和B两组进一步分组。A组：A1：220.6μmol/L＜TSB≤257μmol/L（轻度）；A2：257μmol/L＜TSB≤342μmol/L（中度）；A3：TSB＞342μmol/L（重度）。B组：B1：220.6μmol/L＜TSB≤257μmol/L（轻度）；B2：257μmol/L＜TSB≤342μmol/L（中度）；B3：TSB＞342μmol/L（重度）。A组和B组、A组各亚组之间、B组各亚组之间患儿日龄、性别、胎龄、出生体重及分娩方式等方面比较差异均无统计学意义（P＞0.05）。

1.2 纳入标准 足月新生儿：37周≤胎龄＜42周；24h≤日龄≤168h；新生儿高胆红素血症诊断标准采用《实用新生儿学》第四版的标准：（1）生后24h内出现黄疸，TSB＞102 μmol/L。（2）足月儿TSB＞220.6 μmol/L。（3）血清直接胆红素＞26 μmol/L。（4）TSB上升＞85 μmol/（L·d）。

1.3 排除标准 出现明显惊厥及肌张力改变等神经系统受累症状者；存在家族视听力障碍史者；母孕期存在任何疾病及妊娠合并症者；围生期使用耳毒性药物史；新生儿溶血病者；出生有窒息缺氧史，1min及5min Apgar评分≤7分者；存在颅内出血、缺氧缺血性脑病或颅内感染者；先天性畸形及遗传代谢性疾病者；有宫内感染TORCH者；严重心肺疾病者。

1.4 研究方法 所有纳入研究的新生儿在入院当天进行第一次采血检测NSE（NSE1）、TSB、间接胆红素，并根据黄疸程度给予光疗及益生菌等治疗；所有病例在第一次采血72h后进行第二次采血检测NSE（NSE2）。采用美国RB公司生产的酶联免疫试剂盒，血清NSE以酶联免疫吸附法严格按照试剂盒说明操作进行检测。

1.5 统计学方法 采用SPSS 22.0统计软件。计量资料以（±s）表示，组间均数比较采用两独立样本t检验，计数资料组间比较采用χ2检验。连续变量三组均数比较采用单因素方差分析，多重比较采用Bonferroni校正法，调整检验水准α=0.0167。其他所有检验均为双侧检验，检验水准α=0.05。

2 结果

在相同日龄范围内，血清NSE1水平随着TSB的升高而升高，NSE1在A1与A3、B1与B3、B2与B3之间差异具有统计学意义（P＜0.05），NSE2在两组中各亚组之间差异均无统计学意义（P＞0.05）。在相同TSB水平，NSE1在轻中度胆红素水平随日龄增加而降低，在重度胆红素水平，NSE1随日龄增加明显升高，且二者差异具有统计学意义（P＜0.05）；NSE2则随日龄增加而降低，且在各对应亚组间差异具有统计学意义（P=0.000）。见表1、2。

表1 各组间NSE1的比较[ng/ml，（±s）]

表1 各组间NSE1的比较[ng/ml，（±s）]

注：与轻度组比较，*P＜0.05；与中度组比较，#P＜0.05

组别n轻度中度重度FP值A组8829.30±8.50 34.65±8.3139.96±9.24*11.3500.000 B组10423.65±9.65 25.26±9.06 48.59±10.21*#67.2130.000 t值2.3704.4593.433 P值0.0210.0000.001

表2 各组间NSE2的比较[ng/ml，（±s）]

表2 各组间NSE2的比较[ng/ml，（±s）]

组别n轻度中度重度FP值A组8822.19±4.52 22.65±5.90 23.98±4.850.9920.375 B组10416.29±4.56 17.32±5.21 19.12±4.892.4640.090 t值4.9464.0593.865 P值0.0000.0000.000

3 讨论

动物实验表明，高胆红素血症脑病模型脑脊液中NSE水平较正常高30 倍，同时血清中NSE较正常高3～4倍，可以将NSE作为胆红素脑损伤的潜在生物标志物[1]。本组资料显示在相同日龄范围内，A组及B组内各亚组血清 NSE1水平均随着TSB水平的增加而升高，应用单因素方差分析，NSE1在A组和B组中各亚组之间差异均有统计学意义（P＜0.05），但多重比较结果显示A1-NSE1与A2-NSE1、B1-NSE1与B2-NSE1差异不具有统计学意义（P＞0.05），TSB≤342μmol/L时NSE水平的这种变化，提示在此水平的TSB发生胆红素脑损伤的机会较小；A1-NSE1与A3-NSE1、B1-NSE1与B3-NSE1差异具有统计学意义（P＜0.05），提示随着胆红素水平的增高，TSB＞342 μmol/L时发生胆红素脑损伤的机会将会增加。NSE是神经元损伤的特异性标志物，血液中 NSE的变化能够灵敏的反映中枢神经损伤，故在本研究中NSE水平随TSB水平的增加而升高，胆红素水平越高发生脑损伤的几率越大。但TSB达到何种水平可以引起脑损伤至今尚无定论，中等程度的高胆红素血症已经足够引起神经功能障碍，姜舟等[2]研究指出血清TSB ≥221 μmol/L时，脑干听觉诱发电位（BAEP）就已经发现了听力损害，且黄疸程度越重，BAEP 异常发生率越高，听力损害也越重，而在胆红素水平＞500 μmol/L 时，部分患儿并未发生胆红素脑病，血清TSB高低不是决定胆红素脑病发生的唯一条件，即可以将TSB作为诊断新生儿高胆红素血症的标准，但不是诊断胆红素脑损伤的标准，而NSE是神经元损伤的标志物，在排除缺氧、窒息等其他原因引起的脑损伤时，高胆红素血症新生儿出现NSE水平异常升高，就可考虑是否存在胆红素所致的脑损伤，已有研究指出NSE水平和头颅MRI阳性检出率呈正相关[3]，且在研究新生儿缺氧缺血性脑损伤时，有作者指出NSE的异常可能早于MRI及躯体感觉诱发电位发现脑损伤[4]，即NSE可以在大脑出现不可逆损伤前被检测到，故相对于TSB，NSE作为神经特异性蛋白在预测胆红素脑损伤时是具有优势的。

在相同胆红素水平，随着日龄的增加，轻中度胆红素水平的NSE1随着日龄的增加而降低，但降低的幅度随着胆红素水平的升高而减少，NSE1在A1和B1之间差异具有统计学意义（P＜0.05），而NSE1在A2和B2之间差异则无统计学意义（P＞0.05）；NSE2在轻、中、重度胆红素水平均随着日龄的增加而降低，且在对应各亚组之间差异具有统计学意义（P＜0.05），这也提示无脑损伤的新生儿娩出后NSE水平处于高水平状态，随后若无脑损伤发生，NSE水平会随日龄增加逐渐降低。NSE生后出现高峰原因可能有：（1）脑组织中NSE的含量是反映中枢神经分化成熟的有用指标[5]，成人脑组织发育成熟，NSE水平处于相对的稳定状态，而新生儿中枢神经仍处于发育阶段，脑组织合成NSE是增加的，脑组织中的NSE处于高水平状态，故脑脊液中NSE的生理浓度理论上高于成人。（2）脑脊液内的NSE是通过血脑屏障进入血液，故血脑屏障的功能状态及完整性同样可以决定血液中NSE水平，而新生儿血脑屏障发育不成熟，其通透性较成人高，NSE容易通过不成熟的血脑屏障进入血液中。（3）NSE在神经细胞中的活性最高，但一些非神经组如红细胞、肝脏、平滑肌细胞、淋巴细胞、血小板等也含有NSE[6]；新生儿在宫内处于相对缺氧状态，红细胞数量处于高水平状态，出生后有大量红细胞破坏，这样红细胞内的NSE会释放出来，引起血清中NSE水平升高。但上述这种新生儿血清NSE水平随日龄的增加而降低的现象，会因胆红素水平的增加而不明显，在重度胆红素水平，B3-NSE1高于A3-NSE1，且差异具有统计学意义（P＜0.05），说明重度胆红素水平需警惕胆红素脑病的发生；而B3-NSE2小于A3-NSE2，说明经过光疗干预，随着胆红素水平的降低，NSE水平明显降低，并趋向正常。这是因为NSE半衰期约为24h，若无脑损伤，NSE在短期内会迅速降低，而NSE在短期内的动态升高，则提示脑损伤的可能性更大，故短期内动态监测NSE水平将更有利于早期发现胆红素脑损伤。

[1] Bortolussi G,Codarin E,Antoniali G,et al．Impairment of enzymatic antioxidant defenses is associated with bilirubin-induced neuronal cell death in the cerebellum of Ugt1 KO mice．Cell Death amp;Disease,2015,6(5):e1739．

[2] 姜舟,宋葳,胡文广,等．新生儿黄疸38例听力阈值及BAEP分析．癫痫与神经电生理学杂志,2010,19(2):125-126．

[3] 陈凌,苏晓娟,陈煜,等．血清NSE水平联合头颅MRI检查在新生儿高胆红素血症脑损伤评价中的价值．白求恩医学杂志,2013,13(5):491-492．

[4] Cronberg T,Rundgren M,Westhall E,et al．Neuron-specific enolase correlates with other prognostic markers after cardiac arrest．Neurology,2011,77(7):623-630．

[5] Sarnat HB．Clinical neuropathology practice guide 5-2013:markers of neuronal maturation．Clin Neuropathol ,2013,32(5):340-369．

[6] Lvab HY,Wanga QL,Wuab SJ,et al．Neonatal hypoxic ischemic encephalopathy-related biomarkers in serum and cerebrospinal fluid．Clin Chim Acta,2015,450:282-297．

ObjectiveTo analyze the change in serum NSE of full-term neonates with hyperbilirubinemia in varying degrees and different ages.MethodsA total of 192 full-term neonates hospitalized for hyperbilirubinemia between September 2015 and January 2016 were selected. The blood serum NSE，total bilirubin，indirect bilirubin were measured for the first time on the day of admission according to the degree of jaundice phototherapy and given probiotics treatment；blood samples were collected to detect NSE in the first 72h after blood sampling. The differences of NSE were compared between the two groups at the same age，different bilirubin levels，the same bilirubin level and different age.ResultsThe same age range，the serum level of NSE1 increased with the increase of bilirubin，NSE1 had a statistically significant difference between A1 and A3，B1 and B3，B2 and B3（P＜0.05），NSE2 in the two groups between sub groups showed no significant difference（P＞0.05）. In the same level of bilirubin，NSE1 in mild to moderate levels of bilirubin decreased with the increase of age，the severe level of bilirubin. NSE1 increased significantly with the increase of age，and there was a significant difference between the two NSE2（P＜0.05）；with the increase of age decreased，and there was statistical significance in each corresponding subgroup differences（P＜0.05）.ConclusionThe level of serum NSE of full-term neonates with hyperbilirubinemia varies with the age in days and the degree of bilirubin，which is of a certain significance to the early prediction of bilirubin cerebral injury.

Newborn hyperbilirubinemia NSE Cerebral injury

314000 浙江省嘉兴市妇幼保健院新生儿科（江余明） 242000 安徽省宣城市中心医院新生儿科（曾峰） 241000 皖南医学院第一附属医院弋矶山医院（李志鸿）

*通信作者