夏 楠 ， 张亚莉 ， 王仁虎 ， 朱明霞 ， 刘文强 ， 刘国荣

(1.聊城大学农学院 ， 山东 聊城 252059 ； 2.新希望临沂六和饲料公司 , 山东 临沂 276000)

鸡发生传染性腺胃炎后炎症因子的变化

夏 楠1， 张亚莉1， 王仁虎1， 朱明霞1， 刘文强1， 刘国荣2

(1.聊城大学农学院 ， 山东 聊城 252059 ； 2.新希望临沂六和饲料公司 , 山东 临沂 276000)

为了阐明鸡传染性腺胃炎(chickens infectious proventriculitis，CIP)的发病规律，研究了该病的病变特点和机体内炎症因子的变化规律。对于不同日龄的自然发病肉杂鸡分别进行腺胃肉眼病变计分，发现患病鸡在第21天时分值最高，病变最典型。采用ELISA对21日龄鸡血清中炎症因子和SIgA的含量进行检测。结果显示，与对照组相比，患病鸡IL-1分泌量增加，但差异不显著；IL-6、IL-8、TNF-ɑ的分泌量分别达到76.933 7±7.233 4 ng/L、62.206 3±7.869 3 ng/L和134.598 8±18.649 7，显著高于对照组(P<0.05)。SIgA分泌量为19.187 5±1.976 8 ng/L，明显高于对照组，差异极显著(P<0.01)。这些变化表明，机体发生了全身性或局灶性炎症，也表明机体产生了显著的免疫应答，并且有助于该病的辅助诊断。

肉杂鸡 ； 传染性腺胃炎 ； 炎症因子

鸡传染性腺胃炎(CIP)是一种由多种致病因素共同或者协同作用引起的一种传染性慢性消耗性疾病，主要侵害3～25日龄的雏鸡，发病鸡群采食量下降，生长缓慢，机体消瘦，羽毛杂乱[1-2]。大体剖检病变是腺胃肿大、腺胃乳头出血、水肿和分泌物增多[3-4]。该病流行范围广，病因复杂并且具有不确定性，发病率和病死率较高，对养禽业带来重大的经济损失。发生CIP的鸡体内发生一系列的病理变化，引起炎症反应，造成免疫抑制，例如，已经发现发生CIP的鸡体内IL-2 和IFN-γ含量明显降低，造成了免疫抑制，继发其他疾病[5-6]。

目前，鸡传染性腺胃炎的病原学研究较多[7-8]，但是感染后可量化的判断标准及体内炎症因子的变化规律研究较少。推测发生CIP后相应的炎症因子如IL-1、IL-6、IL-8、TNF-ɑ和SIgA的分泌量有可能发生变化。使用ELISA方法检测了这些细胞因子的变化规律及其与CIP的病变特点的关系，揭示了肉杂鸡体内的免疫学变化。

1 材料与方法

1.1 试验动物 817肉杂鸡来自山东省某规模化肉鸡场，于2016年6-8月监测其发病情况。按照CIP发病标准[6]选择发病鸡只作为发病试验组(A组)，在7、14、21、28日龄分别选取发病鸡各20只，选择同日龄健康鸡20只作为对照组(B组)。

1.2 主要试剂 包括Chicken IL-1、IL-6、IL-8、SIgA和TNF-ɑ的EILSIA检测试剂盒，购自美国Rapid-bio生物公司。

1.3 方法

1.3.1 腺胃病变计分 从第7天开始，每隔7 d剖检20只符合CIP标准的病鸡，根据其发病情况进行腺胃肉眼病变计分：分数为0～3分，代表无病变至严重病变。0分为正常腺胃；1分为发生肿大，无出血，无腺胃乳头脱落；2分为发生肿大，并且有出血，但无腺胃乳头脱落；3分为腺胃肿大，且有出血和腺胃乳头脱落。计算每组的病变计分。

1.3.2 炎症因子含量测定 对21日龄鸡进行翅静脉采血1.5 mL，5 000r/min离心10 min，收集血清用于炎症因子含量的检测。按照IL-1、IL-6、IL-8、TNF-ɑ和SIgA检测试剂盒的说明书，采用双抗体夹心ELISA法进行炎症因子含量的测定，使用Bio-Rad M680酶标仪测定其在450 nm波长下的OD值。

1.3.3 制定标准曲线 根据试剂盒中各标准品加样孔对应的细胞因子的浓度绘制标准曲线，此时曲线上纵坐标是标准物OD值，横坐标是其相应的浓度，根据标准曲线得出其线性的方程式，然后将测得的样品OD值代入方程式得到各孔细胞因子的浓度C1，实际浓度是样品浓度C1的5倍。

1.3.4 数据统计所有数据采用SPSS19.0软件处理分析，统计各组数据的差异性。

2 结果与分析

2.1 病变计分结果 经过连续病变计分，发现发病21 d的试验组鸡病变计分最高(图1)。剖检时发现该组鸡腺胃表面有明显的坏死灶，腺胃乳头出血、脱落甚至消失。腔上囊和胸腺已经发生萎缩并且胰腺坏死。判定该组为典型病变，对其进行炎症因子含量变化的测定。

图1 不同日龄的鸡病变计分

2.2 标准曲线的制定 以白细胞介素1(IL-1)为例检测标准品的OD值和浓度，建立标准曲线，经测算R2=0.9893表示曲线成立(表1和图2)。

表1 鸡群白细胞介素1(IL-1)的OD值和浓度

图2 IL-1的标准曲线

2.3 炎症因子的变化 由表2可知，与对照组相比，21日龄的CIP病鸡血清IL-1分泌量增加，但差异不显著；IL-6、IL-8、TNF-ɑ的分泌量分别达到76.933 7±15.233 4 ng/L、62.206 3±12.869 3 ng/L和134.598 8±18.649 7，明显高于对照组，且差异显著。SIgA分泌量为19.187 5±5.976 8 ng/L，明显高于对照组，差异极显著。这也表明，在21日龄测定CIP病鸡血清中细胞因子的含量具有显著的意义。

表2 21 d的CIP鸡血清中细胞因子含量测定结果

*：P<0.01，表示极显著；P<0.05表示显著；P>0.05表示不显著

3 讨论

参与炎性反应的细胞因子主要有Th1和Th2，其中，Th1细胞参与细胞免疫和迟发性超敏性炎症反应，如IL-10；Th2可辅助B细胞分化为抗体分泌细胞，参与体液免疫应答，如IL-2。IL-6又称前炎症细胞因子，是炎症反应中的中枢性调节因子，而且IL-6含量的高低与机体体液免疫功能呈正相关关系[9-10]。鸡群感染CIP后IL-6的含量明显增高，发生典型的炎症反应后，也通过受体介导B淋巴细胞的增殖，促进机体的体液免疫应答。IL-8是一种强有力的嗜中性粒细胞趋化和活化因子，可以趋化嗜中性粒细胞到炎症部位，加重炎症反应造成组织损伤[11]。当鸡群发生CIP后IL-8的分泌增加，证明机体已经发生了显著的炎症反应。TNF-ɑ是炎症反应中释放最早且具有广泛生物活性的炎症因子，正常情况下，TNF-ɑ的含量很低，一旦受到外界的刺激，其调控因子κB被激活，对TNF-ɑ进行调控使其含量增加。同时，TNF-ɑ对κB再刺激会发生级联反应，促进IL-1和IL-8 含量增加，发生炎症因子的瀑布效应，使炎症反应更加严重[12]。这几种炎症因子协同作用，促进了腺胃病变积分的升高，并于21 d到达最高。SIgA的合成与分泌主要受T淋巴细胞和白细胞介素的调节，主要分泌到外分泌液中发挥效应功能。作为黏膜免疫的主要成员，同时还可以产生全身性的体液免疫应答[13-14]。鸡群感染CIP后SIgA的含量增高，表明CIP导致了机体提高黏膜免疫应答水平，以抵抗病原微生物的感染。

许多研究集中于CIP的病因学分析，但是该病病因的复杂性，至今尚无定论。而且，实验室复制该病例较为困难。因此，本试验采集自然感染发病的临床病例作为样本进行了研究。对于IL-1、IL-6、IL-8、TNF-ɑ和SIgA五种炎症因子和肉杂鸡CIP关系的研究，从免疫学角度分析表明，这些炎症因子都有特异的功效，但是它们之间以及和其他炎症因子之间又是相互关联密不可分的。例如，TNF-ɑ、IL-1、IL-6诱发炎症反应在很大程度上是通过诱导产生以IL-8为代表的趋化因子所介导而产生的，且与病灶的大体炎症程度呈正相关。无论何种原因引起CIP采用病变积分的方式均能用于评估该病严重程度。发生CIP感染后，体内的IL-2和IFN-γ含量显著减少，表明产生了严重的免疫抑制[6]。本试验结果表明，随着病情的发展，IL-6、IL-8、TNF-ɑ和SIgA等炎症因子的含量也有显著变化，提示机体发生了全身性或局灶性的炎症反应。通过炎症因子的含量变化检测为CIP的防控和治疗提供理论依据，并且具有实际的临床意义。

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Changesofinflammatoryfactorsafterinfectiousproventriculitisinhybridbroilers

XIA Nan1， ZHANG Ya-li1， WANG Ren-hu1， ZHU Ming-xia1， LIU Wen-qiang1， LIU Guo-rong2

(1. College of agricultural of Liaocheng University ， Liaocheng 252059 ， China；2. New hope Liuhe Shandong Linyi co. ， Ltd ， Linyi 276000 ,China)

Pathological characteristics of the disease and the change of inflammatory factors were analyzed to clarify the pathogenesis of chickens infectious proventriculitis(CIP). The pathological changes of the proventriculitis in the broilers with different ages were scored, respectively. The highest score was found at 21 day with the most typical lesions. Inflammatory factors and SIgA in the serum of chickens of 21 days were detected with ELISA，The results showed that the secretion of IL-1 was increased but no significant difference in the diseased chickens compared with the control group. The secretion of IL-6, IL-8 and TNF-ɑ were 76.933 7±7.233 4 ng/L 62.206 3±7.869 3 ng/L and 134.598 8±18.649 7 ng/L，respectively,which were significantly higher than the control group(P<0.05). The secretion of SIgA was 19.187 5±1.976 8 ng/L, which was significanty differently higher than that of the control group(P<0.01).

hybrid broiler ; infectious proventriculitis ; inflammatory factor

LIU Wen-qiang

S852.4

A

0529-6005(2017)09-0020-03

2016-12-31

国家自然科学基金(81202306);山东省高等学校科技计划(J14LF03);聊城大学创新创业项目(cxcy2015072)

夏楠(1991-)，女，硕士，从事动物疫病发生机理与防治研究，E-mail: 1423445152@qq.com

刘文强，E-mail：liuwenqiang@lcu.edu.cn