武春银 柴小青 疏树华 章 敏 李传耀

(安徽医科大学附属省立医院麻醉科，安徽 合肥 230001)

不同阿片类受体对盐酸氢考酮引起小鼠高活动性和镇痛过程的影响

武春银 柴小青 疏树华 章 敏 李传耀

(安徽医科大学附属省立医院麻醉科，安徽 合肥 230001)

目的 探讨不同阿片类受体对盐酸氢考酮引起小鼠高活动性和镇痛过程的影响。方法 采用小鼠自主活动测定和小鼠热板镇痛的实验方法研究μ、δ、κ 3种阿片在盐酸氢考酮引起小鼠高活动性的不同作用。结果 不同剂量的盐酸氢考酮均能够诱发小鼠的自发活动明显增加，且呈显著的量效关系(P<0.05)。非选择性阿片受体拮抗剂能够剂量依赖性地降低盐酸氢考酮引起的小鼠自发活动增加(P<0.05)。选择性μ受体拮抗剂对盐酸氢考酮引起的小鼠自发活动增加无影响，而选择性δ受体拮抗剂能够剂量依赖性地降低盐酸氢考酮引起的小鼠自发活动增加(P<0.05)。选择性κ受体拮抗剂能够增强盐酸氢考酮引起的小鼠自发活动增加。选择性μ受体拮抗剂和选择性δ受体拮抗剂对小鼠无镇痛作用，而选择性κ受体拮抗剂能够拮抗盐酸氢考酮的镇痛作用。结论 盐酸氢考酮引起的小鼠自发活动增加的作用可能通过δ受体介导，而其镇痛作用则可能是通过κ受体介导。

盐酸氢考酮；阿片类受体；镇痛作用；自发活动

非甾体类抗炎药(NSAIDs)能够缓解轻度疼痛，却对中、重度疼痛无能为力，且禁忌证较多。WHO推荐阿片类药物可应用于恶性肿瘤导致的中、重度疼痛〔1〕。盐酸氢考酮是阿片类生物碱蒂巴因的衍生物〔2〕，作为强效阿片类镇痛药除了用于肿瘤导致的神经病理性的疼痛外，已广泛应用于术后疼痛、骨关节疼痛等领域〔3〕。几乎所有阿片类成瘾性药物均能通过促使纹状体内多巴胺含量升高，从而使动物的自发活动增加，而高活动性、行为过敏以及成瘾之间有密切的关系〔4〕。作为阿片类镇痛药，盐酸氢考酮究竟是通过哪种阿片类受体发挥镇痛作用，如何导致成瘾的机制，目前还未达成共识。本研究旨在探究不同阿片类受体对盐酸氢考酮引起小鼠高活动性和镇痛过程的影响。

1 材料与方法

1.1 药品与试剂 京四环制药有限公司生产的盐酸氢考酮；非选择性阿片类受体拮抗剂纳洛酮，选择性μ受体拮抗剂Naloxonazine，选择性δ受体拮抗剂Naltrindloe以及选择性κ受体拮抗剂Nor-Binltorphimine均购于Santa Cruz公司。所有用于本实验的药品均使用美仑生物生产的生理盐水进行溶解。

1.2 实验动物 昆明种小鼠，体重20～25 g，购于北京维通利华实验动物技术有限公司，雌雄各半。小鼠8只一组置于塑料箱中，饲养在SPF级动物中心，小鼠自由饮水进食，在实验前至少适应实验环境5 d。所有实验均在8∶00～18∶00内进行。

1.3 实验仪器 使用中国医学科学院药物研究所生产的小鼠自主活动测定仪进行小鼠自发活动的测定；使用美国Bioserve公司生产的热盘测痛仪7280进行镇痛实验。

1.4 自发活动实验

1.4.1 盐酸氢考酮对小鼠自发活动的影响 小鼠随机分为实验组(16只，雌雄各半)和对照组(16只，雌雄各半)，实验组分别皮下注射不同剂量的盐酸氢考酮(1.25、2.5、5.0 mg/kg)，对照组均注射等体积的生理盐水。随后将小鼠置于小鼠自主活动测定仪中，每10 min监测并记录小鼠的自主活动，共测定120 min。

1.4.2 非选择性阿片类受体拮抗剂纳洛酮对盐酸氢考酮引起小鼠自发活动增强的影响 实验小鼠随机分为盐酸氢考酮组(12只，雌雄各半)、盐酸氢考酮+纳洛酮组(12只，雌雄各半)和空白对照组(12只，雌雄各半)。盐酸氢考酮组皮下注射不同剂量的盐酸氢考酮(1.25、2.5、5 mg/kg)；盐酸氢考酮+纳洛酮组小鼠腹腔注射不同剂量的纳洛酮(0.125、0.25、0.5 mg/kg)，15 min后再于腹腔注射盐酸氢考酮5 mg/kg；空白对照组均腹腔注射等体积的生理盐水。注射后立即将小鼠置于小鼠自主活动测定仪中，每10 min监测并记录小鼠的自主活动，共测定120 min。

1.4.3 不同选择性阿片类受体拮抗剂对盐酸氢考酮引起小鼠自发活动增强的影响实验 小鼠随机分为干预组(根据不同的拮抗剂分3组，每组12只，雌雄各半)和空白对照组(12只，雌雄各半)。干预组小鼠首先脑室注射不同选择性阿片类受体拮抗剂，选择性μ受体拮抗剂Naloxonazine(0.4、1.0、2.5 nmol)，选择性δ受体拮抗剂Naltrindloe(0.5、1.0、2.5 nmol)以及选择性κ受体拮抗剂Nor-Binltorphimine(0.3、1.2、4.8 nmol)，15 min后再于腹腔注射盐酸氢考酮5 mg/kg；空白对照组小鼠脑室注射等体积的生理盐水。注射后立即将小鼠置于小鼠自主活动测定仪中，每10 min监测并记录小鼠的自主活动，共测定120 min。

1.5 镇痛实验

1.5.1 小鼠55℃热板法〔5〕本实验使用法国Bioserve公司生产的BIO-CHP型冷热盘测痛仪进行镇痛实验。将小鼠置于55℃的热金属板上，立即开始计时，小鼠第1次出现舔后足或跺后足则停止计时，时间计为基础痛阈。选择基础痛阈在5～15 s的小鼠进行试验。根据不同分组进行给药，给药后再次测定痛阈，比较前后痛阈的差别，实验结果用可能最大镇痛百分率(PMAP)进行表示，60 s不出现舔后足或跺后足计为镇痛率100%。PMAP=〔给药后痛阈(s)-给药前痛阈(s)〕/〔60-给药前痛阈(s)〕。

1.5.2 不同选择性阿片类受体拮抗剂对盐酸氢考酮镇痛作用的影响 小鼠随机分为干预组(根据不同的拮抗剂分为3组，每组12只，雌雄各半)和空白对照组(12只，雌雄各半)。干预组小鼠首先脑室注射不同选择性阿片类受体拮抗剂，剂量如下：选择性μ受体拮抗剂Naloxonazine(0.4，1.0，2.5 nmol)及选择性κ受体拮抗剂Nor-Binltorphimine(0.3，1.2，4.8 nmol)，24 h后再于脑室注射盐酸氢考酮10 nmol；选择性δ受体拮抗剂组于小鼠脑室注射Naltrindloe(0.5、1.0、2.5 nmol)后15 min脑室注射盐酸氢考酮10 nmol；空白对照组小鼠脑室注射等体积的生理盐水。5 min后测定各组小鼠的痛阈。

1.6 统计学方法 采用SPSS22.0软件，多组间比较用One-Way ANOVA分析，组间两两比较使用Student-Newman.Keuls检验或LSD检验。

2 结 果

2.1 盐酸氢考酮对小鼠自发活动的影响 盐酸氢考酮能够剂量依赖性地增加小鼠的自发活动(P<0.05)。盐酸氢考酮给药后10 min即可使小鼠自发活动达到最高点，5 mg/kg峰值可持续40 min并以较大影响作用持续至给药后120 min，与对照组相比，全程各时点差异有统计学意义(P<0.05)。1.25、2.5 mg/kg剂量组则在40 min时间点与对照组相比差异有统计学意义(P<0.05)。见图1。

图1 盐酸氢考酮对小鼠自发活动的影响

2.2 非选择性阿片类受体拮抗剂纳洛酮对盐酸氢考酮引起小鼠自发活动增强的影响 纳洛酮可明显抑制盐酸氢考酮(5 mg/kg)对小鼠自发活动增加的影响。在60 min以前的每个时间点，与盐酸氢考酮(5 mg/kg)组相比，其差异均具有统计学意义(P<0.05)。但随着时间延伸至80 min以后，不同浓度的纳洛酮影响效应相近(P>0.05)。见图2。

图2 纳洛酮对盐酸氢考酮引起小鼠自发活动增强的影响

2.3 选择性μ受体拮抗剂Naloxonazine对盐酸氢考酮引起小鼠自发活动增强的影响 不同剂量的选择性μ受体拮抗剂Naloxonazine对小鼠的自发活动均无明显影响，对盐酸氢考酮(5 mg/kg)引起的小鼠自发活动增强也无抑制作用(P>0.05)。见图3。

图3 选择性μ受体拮抗剂Naloxonazine对盐酸氢考酮引起小鼠自发活动增强的影响

2.4 选择性δ受体拮抗剂Naltrindloe对盐酸氢考酮引起小鼠自发活动增强的影响 选择性δ受体拮抗剂Naltrindloe自身对小鼠的自发活动无显著影响，但随其剂量增加，1.0 nmol的选择性δ受体拮抗剂Naltrindloe在40 min时点能够明显抑制盐酸氢考酮的作用(P<0.05)；2.5 nmol的选择性δ受体拮抗剂Naltrindloe在10、20、30、50、60 min均具有显著抑制盐酸氢考酮引起的小鼠自发活动增加的作用 (P<0.05)，见图4。

图4 选择性δ受体拮抗剂Naltrindloe对盐酸氢考酮引起小鼠自发活动增强的影响

2.5 选择性κ受体拮抗剂Nor-Binltorphimine对盐酸氢考酮引起小鼠自发活动增强的影响 不同剂量的选择性κ受体拮抗剂Nor-Binltorphimine对小鼠的自发活动均无显著影响，对盐酸氢考酮(5 mg/kg)引起的小鼠自发活动增强均无抑制作用，反而有一定的增强作用，表现为3个剂量的选择性κ受体拮抗剂组小鼠的运动计数水平均在盐酸氢考酮(5 mg/kg)组之上，见图5。

图5 选择性κ受体拮抗剂Nor-Binltorphimine对盐酸氢考酮引起小鼠自发活动增强的影响

2.6 选择性μ受体拮抗剂Naloxonazine对盐酸氢考酮镇痛作用的影响 不同剂量的选择性μ受体拮抗剂Naloxonazine注射后盐酸氢考酮5.00 mg/kg组PMAP为80.31%，盐酸氢考酮+Naltrindlone 0.4 nmol组为76.97%，盐酸氢考酮+Naltrindloe 1.0 nmol组为69.89%，盐酸氢考酮+Naltrindloe 2.5 nmol组为64.02%。结果对盐酸氢考酮的镇痛作用影响(P>0.05)。

2.7 选择性δ受体拮抗剂Naltrindloe对盐酸氢考酮镇痛作用的影响 选择性δ受体拮抗剂Naloxonazine的各剂量组注射后盐酸氢考酮5.00 mg/kg组PMAP为59.78%，盐酸氢考酮+Naltrindloe 0.5、1.0、2.5 nmol组分别为54.45%、50.17%、45.53%。各组对盐酸氢考酮的镇痛作用无显著性差异(P>0.05)。

2.8 选择性κ受体拮抗剂Nor-Binltorphimine对盐酸氢考酮镇痛作用的影响 不同剂量的Nor-Binltorphimine干预组对于盐酸氢考酮的镇痛作用均具有明显的抑制效果，盐酸氢考酮+Nor-Binltorphimine 0.3、1.2、4.8 nmol组PMAP分别为50.12%，39.89%、30.21%，与盐酸氢考酮5 mg/kg组(79.02%)相比差异有统计学意义(P<0.05)。

3 讨 论

作为半合成的纯阿片类受体激动药，盐酸氢考酮的药理作用与吗啡相似，主要是激动中枢神经系统内的阿片受体从而起到镇痛作用〔6〕。本研究结果表明，盐酸氢考酮能够明显增强小鼠自发活动。选择性μ受体拮抗剂Naloxonazine对盐酸氢考酮的作用无影响，而选择性δ受体拮抗剂Naltrindloe能够显著降低盐酸氢考酮引起的小鼠高活动性，选择性κ受体拮抗剂Nor-Binltorphimine则能够对盐酸氢考酮引起小鼠高活动性起到协同作用，μ、δ以及κ受体在阿片引起的动物高活动性的作用是不同的。Grung等〔7,8〕研究指出，μ、δ受体激动可引起动物高活动性，并参与了阿片类药物的成瘾过程。Tsuji等〔9〕在研究吗

啡引起的动物高活动性实验中发现，μ受体拮抗剂能够降低吗啡引起的高活动性，κ受体拮抗剂不仅能够降低动物活动性，还能抑制成瘾过程。而本研究发现，盐酸氢考酮与吗啡不同，其引起动物高活动性可能主要与δ受体相关。此外，盐酸氢考酮对κ受体的激动作用可能也参与了盐酸氢考酮引起的高活动性。综上，盐酸氢考酮引起的小鼠高活动性可能是对δ以及κ受体综合激动的作用结果。

已有研究证实，μ、δ以及κ受体激动剂均能产生镇痛作用，而吗啡对于μ受体的选择性远远大于δ和κ受体，且μ受体拮抗剂Naloxonazine能够降低吗啡产生的镇痛作用〔10〕。本研究结果提示盐酸氢考酮的镇痛作用可能是通过κ受体介导的。

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〔2017-01-17修回〕

(编辑 郭 菁/滕欣航)

柴小青(1962-)，男，主任医师，主要从事临床麻醉研究。

武春银(1972-)，男，硕士，主治医师，主要从事临床麻醉研究。

R614

A

1005-9202(2017)10-2376-03；

10.3969/j.issn.1005-9202.2017.10.013