周颖

摘 要：本文采用高校液相测定了复方双花利咽合剂中绿原酸的含量，固定相为：安捷伦Cl8（4.6mm×250mm，5um），甲醇-乙腈-4%磷酸水（2：10∶88）为流动相，检测波长为327nm，流速1.0mL·min-1，柱温：30℃。绿原酸在5～80μg·mL-1范围内呈良好的线性关系。绿原酸的平均回收率为99.3%，RSD为0.83%（n=6）；此方法简便、准确、重现性好，可用于复方双花利咽合剂中绿原酸的含量测定。

关键词：复方双花利咽合剂；绿原酸；含量

金银花为复方双花利咽合剂主要成分之一。金银花名出自《本草纲目》，由于忍冬花初开为白色，后转为黄色，因此得名金银花。金银花自古被誉为清热解毒的良药。金银花既能宣散风热，还善清解血毒，用于各种热性病。《本经逢原》记载：“金银花，解毒去脓，泻中有补，痈疽溃后之圣药。但气虚脓清，食少便泻者勿用。痘疮倒陷不起，用此根长流水煎浴，以痘光壮为效，此即水杨汤变法。”金银花伤寒杆菌、副伤寒杆菌、溶血性链球菌、大肠杆菌、变形杆菌、绿脓杆菌、百日咳杆菌、霍乱弧菌、链球菌、肺炎双球菌、脑膜炎球菌等均有抑制作用。金银花主要包括黄酮类、有机酸类、环烯醚萜类、三萜及三萜皂苷类、挥发油等多种类型成分，绿原酸是其主要有效成分之一。金银花具有抗菌、抗肿瘤、降脂、抗生育、增强免疫、抗炎、利胆、保肝、抗病毒、止血、抗溃疡等多种药理作用。本文采用高校液相测定了复方双花利咽合剂中绿原酸的含量。

1 仪器与试药

美国必能信超声波清洗机（北京星越天成科技有限公司）；EX1600四元低压梯度液相色谱仪（南京皓而普分析设备有限公司）；Aurora-F1实验室自动洗瓶机（杭州喜瓶者生物技术有限公司）；FA1204CFAC型全自動內校電子分析天平（北京同德创业科技有限公司）；SUPREMA高速大容量离心机（天美（中国）科学仪器有限公司）；HH-601超级恒温水浴锅（常州市华怡仪器制造有限公司）；实验室用高纯水制备器（北京科誉兴业科技发展有限公司）；美析紫外可见分光光度计（美析（中国）仪器有限公司）。绿原酸对照品由中国药品生物制品检定所提供。乙腈（北京亚太龙兴化工有限公司）、冰醋酸（青岛市金宏鑫化工有限公司）、三乙胺（广州市西陇化工有限公司）、甲醇（广州市西陇化工有限公司）、磷酸（北京亚太龙兴化工有限公司）、醋酸钠（北京亚太龙兴化工有限公司）。

2 含量测定

2.1 色谱条件：依据查阅文献及考查的结果，确定色谱条件如下[3-5]。色谱柱为安捷伦Cl8规格为（4.6mm×250mm，5um）；甲醇-乙腈-4%磷酸水（2：10∶88）为流动相；检测波长为327nm。理论板数按绿原酸峰计算应不得低于2000。

2.2 供试品溶液的制备

取复方双花利咽合剂，研细，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加人70%乙醇50ml，稱定重量，超声处理（功率250W，频率40kHz）25分钟，放冷，再称定重量，用70%乙醇补足减失的重量，摇匀，滤过，精密量取续滤液20ml蒸至近干，残渣用50%甲醇溶解，转移至5ml量瓶中并稀释至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，即得。

2.3 对照品溶液的制备

精密称取绿原酸对照品约5mg，用甲醇溶解并稀释成每1ml中含20？g的溶液，作为对照溶液。

2.4 阴性溶液的制备

依照处方除金银花以外药材，按样品制备工艺制成阴性对照样品，照供试品溶液的制备方法制成阴性液，依上述方法测定，结果在绿原酸出峰处阴性液无色谱峰，结果阴性试验没有干扰，表明本方法专属性良好。

2.5 准曲线的制备

制备浓度为5、10、20、40、60、80μg·mL-1的对照品溶液，分别精密吸取10μL注入HPLC，记录色谱图。以峰面积积分值A（μg）为横坐标，进样量为纵坐标，绘制标准曲线，计算回归方程。试验表明，绿原酸对照品在5～80μg·mL-1范围内线性关系良好。

2.6 精密度试验

依照2.4项下制备对照品溶液，精密吸取绿原酸对照品溶液10μL重复进样6次，测定峰面积积分值，对照品峰面积积分值的RSD为0.73%。结果表明，本实验精密度良好。

2.7 重现性试验

分别称取同批复方双花利咽合剂样品6份，分别依照2.3项下供试品制0.76%，结果表明，此含量测定方法的重现性良好。

2.8 稳定性试验

依照2.3项下供试品制备方法制备供试品溶液，分别在0，10，20，30分钟精密吸取供试品溶液注入液相色谱仪，进样测定，供试品绿原酸峰面积积分值的RSD为0.67%。结果表明绿原酸至少在30分钟内稳定。

2.9 回收率试验

采用加样回收试验，取已知含量的同一批供试品各6份，精密称定，分精密添加一定量的绿原酸对照品，按供试品制备所述方法制备供试品溶液，测定含量（同时测定样品含量），计算回收率。6次测定的平均回收率为99.3%，RSD为0.83%。

2.10 样品含量测定

依照上述含量测定方法，测定复方双花利咽合剂三批样品中绿原酸的含量，含量为7.56mg/g、7.67mg/g、7.92mg/g。

3 讨论

分别考察乙腈-水（35：65），甲醇-水（20：80），水-乙腈-三乙胺（82∶18：0.01），甲醇-水-冰醋酸（20∶80∶1）；甲醇-乙腈-4%磷酸水（2：10∶88），乙腈-1%冰醋酸溶液（20∶80）不同比例的流动相，结果以甲醇-乙腈-4%磷酸水（2：10∶88）为流动相，供试品各峰分离效果最好，故选用甲醇-乙腈-4%磷酸水（2：10∶88）为流动相。此方法简便、准确、重现性好，可用于复方双花利咽合剂中绿原酸的含量测定。复方双花利咽合剂中绿原酸的含量不少于7.0mg/g。

参考文献

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