齐鹤

摘 要：本实验以5-O-甲基维斯阿米醇苷为指标对防风提取工艺进行研究。5-O-甲基维斯阿米醇苷最佳提取工艺为加入10倍量70%乙醇，超声提取35分钟，连续提取2次。本工艺稳定、可行、收率高。

关键词：防风；提取；工艺

防风是中药材，是伞形科多年生草本植物防风的根。防风主要用于外感风寒、头痛、骨节酸痛、四肢挛急、目眩、风寒湿痹、破伤风等。《日华子本草》记载：“治三十六般风，男子一切劳劣，补中益神，风赤眼，止泪及瘫缓，通利五脏关脉，五劳七伤，羸损盗汗，心烦体重，能安神定志，匀气脉。”防风具有解热、镇痛、镇静、抗菌、抗炎作用等药理作用[1-4]。本实验以5-O-甲基维斯阿米醇苷为指标对防风提取工艺进行研究。

1 仪器与试药

KQ250DE超声波清洗器超声波检测仪器（烟台鑫康商贸有限公司）；EX1600四元低压梯度液相色谱仪（南京皓而普分析设备有限公司）；FA1204CFAC型全自動內校電子分析天平（北京同德创业科技有限公司）；PHS-550智能型台式酸度计（杭州陆恒生物科技有限公司）；实验室用高纯水制备器（北京科誉兴业科技发展有限公司）；TMSH-6050B超级恒温水槽（上海添时科学仪器有限公司）；UV1600紫外可见分光光度计（西安华辰乐天实验室设备有限公司）。5-O-甲基维斯阿米醇苷对照品（中国药品生物制品检定所提供）。乙腈（广州市西陇化工有限公司）；甲醇（北京亚太龙兴化工有限公司）；乙醇（北京亚太龙兴化工有限公司）。

2 方法与结果

2.1 单因素考察

2.1.1 提取次數

分别取药材，粉碎为20目，精密称定，至于圆底烧瓶内，分别提取四次，第一次加10倍70%乙醇，超声提取25分钟，过滤，减压浓缩；第二次加10倍70%乙醇，超声提取25分钟，连续提取两次，过滤，合并滤液，减压浓缩；第三次加10倍70%乙醇，超声提取25分钟，连续提取三次，过滤，合并滤液，减压浓缩。第四次加10倍70%乙醇，超声提取25分钟，连续提取四次，过滤，合并滤液，减压浓缩。采用高效液相测定浓缩膏中5-O-甲基维斯阿米醇苷含量并计算5-O-甲基维斯阿米醇苷收率。

2.1.2 药材粉碎目数

分别取药材，分别粉碎为10目、20目、40目，精密称定，至于圆底烧瓶内，加10倍70%乙醇，超声提取25分钟，连续煎煮三次，过滤，合并滤液，减压浓缩。采用高效液相测定浓缩膏中5-O-甲基维斯阿米醇苷含量并计算5-O-甲基维斯阿米醇苷收率。

2.1.3 加醇倍数

分别取药材，粉碎为20目，精密称定，至于圆底烧瓶内，分别提取四次，第一次加14倍70%乙醇，超声提取25分钟，连续四次，第二次加12倍70%乙醇，超声提取25分钟，连续四次，第三次加10倍70%乙醇，超声提取25分钟，连续四次，第四次加8倍70%乙醇，超声提取25分钟，连续四次，分别过滤，合并滤液，减压浓缩。采用高效液相测定浓缩膏中5-O-甲基维斯阿米醇苷含量并计算5-O-甲基维斯阿米醇苷收率。

2.1.4 提取时间

分别取药材，粉碎为20目，精密称定，至于圆底烧瓶内，分别提取三次，第一次加10倍70%乙醇，超声提取25分钟，连续四次，第二次加10倍70%乙醇，超声提取30分钟，连续四次，第三次加10倍70%乙醇，超声提取35分钟，连续四次，分别过滤，合并滤液，减压浓缩。采用高效液相测定浓缩膏中5-O-甲基维斯阿米醇苷含量并计算5-O-甲基维斯阿米醇苷收率。

2.2 正交试验设计

实验结果表明，粉碎目数对5-O-甲基维斯阿米醇苷收率影响不大，提取次数、加醇倍数和提取时间对5-O-甲基维斯阿米醇苷收率影响较大。选择提取次数、加醇倍数和提取时间作为考察因素，采用正交试验法对影响提取效率的其它工艺条件进行优选。采用3个考察水平，用L9（34）正交表进行试验，因素水平表见表1。

3 含量测定

3.1 色谱条件：依据查阅文献及考查的结果 ，确定色谱条件如下[5]。色谱柱为安捷伦Cl8规格为（4.6mm×250mm，5μm）；流动相以甲醇：水（4：6）；检测波长为254nm；流速1.0mL·min-1；柱温：35℃。理论板数按5-O-甲基维斯阿米醇苷峰计算应不得低于2000。

3.2 供试品溶液的制备

取提取膏适量，精密量取，置50mL量瓶中，加50%乙醇适量，超声处理十分钟，放置至室温，加50%乙醇稀释至刻度，过滤，精密吸取25mL续滤液，蒸干，残渣加水20mL分次充分溶解，转移至分液漏斗中，用水饱和的正丁醇提取3次，每次20mL，合并正丁醇液，用正丁醇饱和的氨试液洗涤3次，每次10mL。分取正丁醇液，置水浴上蒸干，残渣用50%甲醇分次溶解，转移到10mL量瓶中，加50%甲醇至刻度，摇匀，用微孔滤膜（0.45μm）滤过，即得。

3.3 对照品溶液的制备

分别精密称取5-O-甲基维斯阿米醇苷对照品5mg，置250mL容量瓶中，用甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，即得。

3.4 标准曲线的制备

将浓度为5μg/ml，10μg/ml，15μg/ml，20μg/ml，25μg/ml，30μg/ml，35μg/ml的对照品溶液分别吸取20μL注入HPLC，以进样量（μg）为横坐标，峰面积积分值A为纵坐标，绘制标准曲线。试验表明，5-O-甲基维斯阿米醇苷对照品在5～35μg/ml范围内线性关系良好。

3.5 回收率试验

取已知含量的同一批供试品各6份，分别精密添加一定量的5-O-甲基维斯阿米醇苷对照品，测定含量，计算回收率。平均回收率为96.3%，RSD为0.89%。

4 实验结果

按照L9（34）正交设计表条件进行试验，得到最佳提取工艺为加入10倍量70%乙醇，超声提取35分钟，连续提取2次。本工艺稳定、可行、收率高。

参考文献

[1]李莉，周勇，张丽，陆蕴如，王旭丹，葛东宇，邓巧虹.防风多糖增强巨噬细胞抗肿瘤作用的实验研究[J].北京中医药大学学报，1999（03）.

[2]朱惠京，张红英，吴光，刘艳奎，吴祯久，金光洙，郑云花.防风正丁醇萃取物对大鼠血液流变学的影响[J].中草药，1998（12）.

[3]周勇，马学清，严宣佐，张丽，牛建昭，赵离原，陆蕴如，葛东宇.防风多糖JBO-6体内对小鼠兔疫功能的影响及抗肿瘤作用[J].北京中医药大学学报，1996（04）.

[4]于斐，贾秋桦.防风水煎剂对肺炎克雷伯菌和大肠埃希菌生长的影响[A].中华医学会第七次全国检验医学学术会议资料汇编[C].2008.

[5]黄月纯；尹雪；魏刚.玉屏风煎剂不同配伍对毛蕊异黄酮苷、升麻素苷、5-O-甲基维斯阿米醇苷含量的影响[J].2010年广东省药师周大会论文集.