几个品牌的黄曲霉毒素胶体金快速检测卡的质量评价

2017-05-10罗俊霞范知贾冬刘萃赵建波河南省郑州市农产品质量检测流通中心450006河南省郑州市农业信息中心河南省郑州市园艺工作站

上海农业科技 2017年2期

罗俊霞范知贾冬刘萃赵建波(河南省郑州市农产品质量检测流通中心 450006；河南省郑州市农业信息中心；河南省郑州市园艺工作站）

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为了解市面上销售的黄曲霉毒素B1胶体金快速检测卡的质量，对几个品牌的检测卡的最低检测限、操作步骤和胶体金质量以及最终的检测效果等进行了比较和评价。结果显示：A公司的产品最好、B公司的产品次之、C公司的产品第三；虽然A公司和C公司的产品显色效果较好，但在进行氮吹时对检测人员的身体损害较大；B公司的检测卡显色不清晰，究其原因可能是该公司的抗原抗体质量较差或者研发技术不成熟。

黄曲霉毒素；胶体金快速检测卡；质量评价

黄曲霉毒素（Afaltoxin，简写为AF）是黄曲霉菌和寄生曲霉菌的代谢物，目前已经确定黄曲霉毒素有A F B1、AFM1等18种［1，2］，其中以AFB1的致癌性最强［3,4］。黄曲霉毒素广泛存在于发霉的玉米、小麦等粮食作物和花生、菜籽等油料作物中以及饲料中［1,5］，牛奶和羊奶中也有发现黄曲霉毒素［6］。因为黄曲霉毒素强烈的致癌性、致畸性，世界卫生组织将其列为Ⅰ类致癌物［7］，世界各国纷纷制定了各类食品（包括饲料）中黄曲霉毒素的限量标准［8-9］。据联合国粮农组织调查，截止1995年，全球已有77个国家和地区针对真菌毒素设立了限量法令［9］，中华人民共和国卫生部于2011年发布的GB 2761标准中重新修订了食品中真菌毒素AFB1、AFM1的限量指标，并分别规定了粮食作物、坚果级油料、油脂、豆类及其他食品中黄曲霉毒素的限量［10］。正因如此，粮食中黄曲霉毒素的检测也成为了科研工作者的关注焦点。目前，黄曲霉毒素常用的检测方法有薄层色谱法、液相色谱法、液相色谱-质谱联用技术、荧光分光光度法［11］、生物学方法、免疫学方法［12-14］等，另外，邓省亮、陈笑笑、王督等人分别开展了胶体金免疫层析法快速检测AFB1的研究［15-17］，但上述方法均存在诸多缺陷，如操作复杂，耗费时间长、对检测人员的要求较高等，且生物学方法还只能用于定性检测而无法进行定量检测。

目前，胶体金免疫层析技术已广泛应用于粮油作物中的黄曲霉毒素检测，但市场上黄曲霉毒素的胶体金快速检测卡林林总总，缺乏有效的监督监管机制来检查或衡量这些检测卡的检测效果，同时也缺乏统一的质量标准，所以，在使用这些检测卡时有必要对它们进行阴阳性样品的比较测试，筛选出质量较优的检测卡用于日常检测。为此，笔者特开展了本次试验，以期对日常检测的产品购置有所帮助。

1 材料与方法

1.1 试剂和材料

AFB1标准溶液购于Sigma公司，实验过程中所用的有机溶剂均为色谱纯，实验用水均为纯净水，黄曲霉毒素B1胶体金免疫层析快速检测卡分别购于北京、深圳、杭州、无锡、武汉，具体情况见表1。玉米为市场上购买，经液相色谱检测AFB1为阴性的玉米糁。

1.2 仪器和设备

表1 几种品牌的黄曲霉毒素胶体金快速检测卡的基本情况

天平为余姚纪铭称重校验设备有限公司的感量为0.01g、型号为JM 2102的天平；旋涡混合器品牌为华利达，型号为WH-861；离心机是德国生产、品牌为Hettich、型号为Uniwersal 320R；氮吹仪是美国生产、品牌为Organomation Associates、型号为N-EVAPTM 112；移液器为美国热电的Finnpipette的不同规格的单道可调移液器。

1.3 检测方法

本试验根据国标［10］给出的粮食作物的限量标准选取满足要求的A、B、C、D四家公司的产品，分别就各公司检测卡说明书所给出的称样量于第1天下午称取玉米糁样品各40个，其中20个样品不添加AFB1的标准品，为阴性样品；20个样品添加AFB1的标准品，制备成浓度为5?g/kg的阳性添加样品；于第2天上午根据各公司说明书中的步骤进行检测、分析；根据分析结果计算出假阳性率和假阴性率；判读后将图片发给厂家工程师，让厂家工程师进行判读，也据此计算出假阳性率和假阴性率。同时就各品牌检测卡的最低检测限、操作步骤和胶体金质量各方面进行比较和评价。

2 结果与分析

2.1 说明书的检测限

A、B、C、D四家公司的产品都满足国家粮食作物中AFB15 μg/kg的限量要求，而E公司的检测卡的最低检测限是12 μg/kg，不能满足国家对粮食作物中AFB1限量的要求。

2.2 从前处理的操作步骤方面评价

A公司、B公司和D公司的检测卡的操作方法比较简便，A公司的产品需要提取、离心、取上清液进行稀释后点卡；B公司的检测卡提取之后需要与复溶液或缓冲溶液按照一定比例进行混合、混匀后进行点卡；D公司的检测卡的前处理只需提取、离心就可以点卡；C公司的产品则需要提取、离心、氮吹、复溶、稀释之后进行点卡。

2.3 胶体金的质量方面

胶体金的质量评价是从T线和C线的显色效果进行评价的，A公司和C公司的检测卡显色均匀、清晰，未出现断断续续、若隐若现的情况，说明他们的抗原抗体质量好或技术过硬；B公司的检测卡显色不清晰，有断断续续、若隐若现的情况发生，其原因可能是该公司的抗原抗体质量较差或研发技术不够成熟；D公司的检测卡显色非常不均匀，质量最差。

2.4 检测效果方面

由表2及实际检测效果可知，A公司的产品采用消线法，40个样品的检测结果是20个阳性样品的T线均消线，而20个阴性样品则呈现T线比C线颜色浅，拍了图片发给厂家工程师，厂家工程师判定结果和添加实际完全符合，说明样品里可能含有黄曲霉毒素，只是含量较低，小于5 ppb，所以阴性样品均表现为T线比C线颜色浅。

B公司的产品采用T线与C线比较的方法，图片发给厂家工程师，厂家的判定结果和添加实际完全符合，符合率是100%；因为有阴性样品作为对照，笔者自己判定结果有15%的不符合率,也就是说假阴性率为15%。

C公司的产品采用消线法，但从40个样品的检测结果看，所采用的不是消线法，而是T线、C线比较的方法，阴性样品的C线均比T线颜色深，而阳性样品的T线均比C线颜色浅。如果没有阴、阳性样品做对照，单单按照说明书的要求进行判定，5 ppb的添加样品均是阴性的，厂家工程师的判断也是如此，也就是说按照试剂盒说明书判断假阴性率和厂家工程师判定假阴性率均是100%。

D公司的产品采用T线、C线比较的方法，20个阴性样品的C线均比T线颜色浅，20个添加样品中有14个样品的T线和C线颜色一样深浅，只有6个样品的T线比C线颜色浅。也就是说有70%的假阴性率。

E公司的产品，因说明书上的检出限很高，为12μg/kg，同时称样量也比较大，所以制备阳性样品所需要的标准品量很大，未进行测试。