张新龙，刘海英

（阿克苏地区中心血站，新疆 阿克苏 843000）

少数民族地区RhD（-）血液冰冻保存洗涤复苏技术及临床应用

张新龙，刘海英

（阿克苏地区中心血站，新疆 阿克苏 843000）

目的 探讨少数民族地区RhD（-）血液冰冻解冻红细胞的制备方法，并对临床输注效果进行分析。方法 使用美国血液技术公司提供的ACP215全自动细胞洗涤仪和全密闭式成套耗材，先甘油化红细胞悬液，后置-65℃以下深低温保存，需要时去甘油复苏，采用9%NaCl和0.9%NaCl渗透压梯度递减方法洗涤，制备成冰冻解冻红细胞，按照国家卫生部规定的检测方法对该制品进行质量检测，并对临床上RhD（-）患者的输注效果进行跟踪调查。结果 应用该方法冰冻解冻RhD（-）血红细胞，其质量符合国家规定的相关标准，经临床输注后效果良好。结论 使用ACP215制备冰冻红细胞，低温保存后洗涤去甘油，操作安全快捷，回收率高，产品质量可靠，将为少数民族地区稀有血型血液的长期保存、及时有效供给以及自身储血、突发公共事件紧急大量用血创造有力条件。

RhD（-）血液；冰冻红细胞；冰冻解冻红细胞；洗涤；临床应用

新疆阿克苏地区是一个以维吾尔族为主体的多民族聚居的地区，RhD（-）在维吾尔族等少数民族的分布为5%，汉族仅占0.3%，属稀有血型。解决RhD（-）血型患者临床用血救治以及应对地方突发事件稀有血型血源储备是我们急需解决的问题。目前国内很多血站采用手工法制备RhD（-）冰冻解冻去甘油红细胞延长红细胞的有效期，我站引进ACP215全自动血细胞洗涤仪制备冰冻解冻去甘油红细胞技术，减少了人为因素影响，产品质量稳定可靠。现对制备方法和临床效果评价，报告如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料

选择来自2015年1月开始阿克苏地区街头自愿无偿献血者，经街头初筛为RhD（-）后，本站检验科进一步确认为RhD（-），血液复检合格后，在2～6℃冰箱保存6天以内的全血或去白细胞红细胞悬液，采用ACP215全自动血细胞洗涤仪制备成冰冻红细胞，临床需要时再解冻洗涤制备成去甘油红细胞悬液，随机跟踪40U该制品临床应用效果并予以评价。

1.2 耗材

235型去甘油耗材（美国血液技术公司），57%甘油耗材、三珠袋（北京博德桑特公司），9%NaCl（山东威高公司），0.9%NaCl、PVC血液转移袋（四川南格尔公司），一次性输血器（内蒙古赤峰公司）

1.3 仪器与设备

ACP215全自动血细胞洗涤仪（美国血液技术公司），Cryofuge-600i低温离心机（德国贺立氏公司），CompoDcK无菌接管机（德国费森尤斯公司），DW-86L386超低温冰箱（青岛海尔公司），CT-D4干式融化箱（美国克瑞特），振荡仪（苏州市医用仪器厂），BC-5800血细胞计数仪（深圳迈瑞公司），BD-9050全自动细菌培养系统（美国BD公司）。

1.4 方法

1.4.1 红细胞甘油化

将全血或去白悬浮红细胞4℃下离心（3500r/min×8min），目检合格分出上层血浆/添加剂和白膜层后，转移至三珠袋制备成压积红细胞，连接输血器和复方甘油溶液，把血袋固定在振荡仪上摇振（振幅60次/分），每U压积红细胞（200 ml全血制备） 血袋中由慢到快手工加入57%复方甘油溶液1袋160 ml（2U压积红细胞中加入2袋320 ml），时间控制在10-15 min内完成，放置室温平衡30分钟后，放入-65℃以下超低温冰箱快速冰冻保存，即制成冰冻红细胞。

1.4.2 解冻与洗涤去甘油

将冰冻红细胞从-65℃以下超低温冰箱中取出后，先在室温中平衡10分钟后再放置于37℃干式融化箱中，设定时间30min自动摇动并充分融化至解冻红细胞，将解冻红细胞转移至1000mlPVC空袋中，与235型去甘油耗材、无菌接管机连接，打开ACP215仪器，按照固定管路安装连接高渗、等渗盐水作为洗涤剂，检查无误后，选择去甘油程序，按开始键，机器按程序设定自动依次加入9% NaCl高渗溶液和0.9% NaCl低渗溶液，以梯度递减洗涤的方法逐渐去除红细胞内外的甘油，，最后再每U加0.9%NaCl溶液120ml重新悬浮洗涤红细胞，确保红细胞内外的渗透压平衡，制备成解冻红细胞[1]。

2 结 果

2.1 冰冻解冻去甘油红细胞质量抽检

按《血站技术操作规程》（2012版）和《全国临床检验操作规程》（第3版）中的检测方法和检测项目，抽取40U（20袋×2U）的冰冻解冻红细胞解冻后留样检测，均符合《全血成分血质量要求》[2]。见表1

表1 40 U冰冻解冻去甘油红细胞质量检测结果一览表

2.2 临床应用情况

将以上使用ACP215全自动红细胞处理机制备的40U（20袋*2U）冰冻解冻去甘油红细胞，用于临床输注，输注主要用于产科手术、外伤、血液病等13例患者，每位患者用量为2-8U不等，血液平均保存期为105天，查看《临床输血效果评价记录表》，描述输血过程顺利，输血中及输血后无不适反应，其中11例患者输注后血红蛋白有所上升，贫血状态得到改善，2例患者输注后血红蛋白上升不明显，其中1例活动性出血现象出现，1例为自身溶血性贫血患者。

3 讨 论

1）全血或去白悬浮红细胞在2-6℃储血冰箱可保存35天，随着保存时间的延长，红细胞内2，3-二磷酸甘油酸及ATP逐渐下降，从而影响了氧的释放能力和红细胞的活性，红细胞的变形能力和渗透脆性增加，红细胞的溶血程度也随着增加，故要选择保存6d以内（相对新鲜）的血液进行冰冻保存；2）选择甘油作为红细胞保护剂，是因为甘油无毒、中性、相对分子质量小，能渗透入细胞，与水结合力强，对细胞膜有良好的保存作用。将采集6天以内的全血或去白悬浮红细胞中的红细胞甘油化后置-65℃以下保存，红细胞耗能较少，红细胞的代谢活动降低或完全停止，避免了代谢毒性产物的积累，达到延长红细胞保存期的目的，最长保存期为十年；3）临床需要RhD（-）血时，将甘油化冰冻红细胞去甘油复苏，采用渗透压梯度递减（9%NaCl→0.9%NaCl）的方法，使用全自动ACP215血细胞洗涤仪，去除了细胞代谢产物及抗凝剂，全密闭管路，此方法约需1.5 h，产品人为因素影响较小，时间短，操作快捷安全；4）经质量抽检，洗涤后的红细胞生理形态及生化特性与液体保存的红细胞相似，产品质量可靠、较稳定；5）跟踪输血患者，经评价基本达到输血目的。冰冻红细胞保存期长，可大量储存，在少数民族地区稀有血型血源匮乏的情况下，对调节血液供需平衡，保障突发公共事件紧急大量用血[3]，维护社会稳定有着重要的战略意义。

[1] 中华人民共和国卫生和计划生育委员会.《血站技术操作规程》2012版[Z].北京:卫医政发[2012]1号附件,2012.

[2] 中国人民共和国卫生部,中国国家标准化管理委员会.GB18469-2012全血成分血质量要求[S].北京:中国标准出版社,2012

[3] 夏爱军,张献清,穆士杰,等.手术患者输注冰冻红细胞的安全性探讨[J],现代检验医学杂志,2007,22(2):26.

本文编辑：李 豆

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ISSN.2095-8242.2017.05.803.02