陈 刚，李小伟

（太和县中医院，安徽 阜阳 236600）

HPLC测定参芪固本糖浆中薄层鉴别及苦参碱的含量测定

陈 刚，李小伟

（太和县中医院，安徽 阜阳 236600）

目的 建立参芪固本糖浆的质量标准。方法 采用TLC和HPLC。结果 TLC鉴别当归；HPLC测定山豆根中苦参碱的的含量，苦参碱0.03306～0.13224mg浓度范围内，线性关系良好（r=0.9999），平均回收率为96.2%，RSD=0.6%。结论 本方法简便可行，薄层鉴别和含量测定专属性和重现性均良好，结果可靠，可用于参芪固本糖浆的质量控制。

苦参碱；参芪固本糖浆；HPLC

参芪固本糖浆为我院自制中药制剂；主治益气补血、扶正固本、软坚散结、清热解毒、疏肝理气。已在临床使用多年，对于食管癌、喷门癌引起的噎嗝、痛、吐及食管癌放疗中有确切的疗效。为了更好的控制制剂参芪固本糖浆的质量，提高已批准的质量标准，对处方中药味进行含量测定实验研究。经反复实验，采用采用HPLC对药材山豆根中苦参碱进行含量测定，同时分别按处方、制法制备每一种药味的阴性对照，结果阴性无干扰。

1 材料与方法

1.1 材料与仪器

试剂与仪器：黄芪甲苷对照品（批号：110781-201314）；苦参碱对照品（批号：110805-200508）；色谱乙腈（美国天地）；当归对照药材（批号：120927-201014）LC-1220高效液相色谱仪（型号：LC-1220）；H.H型数显恒温水温锅（型号：H.H）；梅特勒电子天平（型号：AHW120D）；

1.2 薄层鉴别方法与结果

1.2.1 当归的鉴别

取本品20 mL，加乙醚20 mL振摇提取2次，合并乙醚液，挥干，残渣加乙醇1 mL，使溶解，作为供试品溶液。再取当归对照药材1 g，加乙醚10 mL，振摇5分钟，分取乙醚液，蒸干，残渣加乙醇1 mL使溶解，作为对照药材溶液。再按处方量配制缺当归的阴性对照样品，再按供试品溶液制备方法制备，得阴性样品供试品溶液。照薄层色谱法（中国药典2015版四部通则0502）试验，吸取上述两种溶液各5 uL，分别点于同一硅胶G薄层板上，以正己烷-乙酸乙酯（9:1）为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外灯（365 nm）下检视。结果，供试液色谱中，在与对照药材色谱相应位置上，显相同颜色的荧光主斑点，阴性样品处无干扰，专属性较强。见图1。

图1注：1.当归对照药材；2.阴性样品；3.样品

1.3 含量测定研究

1.3.1 测定波长的选择[1]

通过对苦参碱对照品甲醇溶液，以甲醇溶液作为空白液，在200～400 nm波长下进行扫描，在209 nm处有最大吸收，吸光度为0.628，再参照《中国药典》2015版一部山豆根药材中苦参碱的测定方法中波长的选择，本标准研究取210 nm作为苦参碱的测定波长。见图2。

图2 山豆根波长扫描图谱

1.3.2 方法学研究

1.3.2.1 色谱条件与系统适用性试验

以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以乙腈-0.02 mol/L磷酸二氢钾0.1%磷酸水溶液（10:90）为流动相；检测波长为210 nm。理论板数按苦参碱峰计算应不低于3000。

1.3.2.2 溶液的制备

对照品溶液的制备：取苦参碱对照品适量，精密称定，置于适量的容量瓶中，用流动相稀释、定容至刻度，制成浓度为0.03 mg/mL溶液。

供试品溶液的制备：精密量取本品10 mL，加氨水1 mL，用氯仿萃取5次（20 mL，20 mL，20 mL，20 mL， 20 mL），挥干氯仿，残渣用甲醇转移至50 mL的容量瓶中，用流动相稀释定容至刻度，用0.45 um的滤膜过滤，即得。

阴性供试品溶液的制备：按照处方比例及制备工艺配制不含山豆根的阴性对照样品，按照供试品溶液的制备方法制备阴性对照品溶液。

1.3.2.3 专属性试验

取对照品溶液、供试液、阴性对照溶液，按照上述色谱条件测定，记录色谱图。结果显示阴性对照液对苦参碱的测定无干扰，故该法用于测定参芪固本糖浆中的苦参碱专属性良好。结果见图3。

图3 参芪固本糖浆HPLC色谱图注：A.苦参碱对照品，B.样品，C.阴性样品（缺山豆根）

1.3.2.4 线性关系考察

取已制备的浓度为33.06μg/mL的对照品溶液，分别进样0.1 μL、0.2 μL、0.5 μL、2 μL、4 μL、。以苦参碱浓度（μg/ mL）为纵坐标（Y），峰面积为横坐标（X），进行回归分析，得回归方程：Y=35.351X－0.2445 ；R2=0.9999，结果表明，苦参碱在浓度为0.03306～0.13224 mg/mL的范围内与峰面积呈良好线性关系。

1.3.2.5 精密度考察

取浓度为33.06 μg/mL的对照品溶液，连续进样6次，苦参碱的平均峰面积是0.9514，RSD为0.19%（n=5），表明仪器的精密度良好。

1.3.2.6 重复性实验

取参芪固本糖浆（批号：20160107）6份，按照“2.2.3”项下方法制备供试液，分别进样测定。结果6次的峰面积平均值为0.989，RSD为0.35%。

1.3.2.7 稳定性实验

取参芪固本糖浆（批号：20160317），配制供试品溶液，在配制后0，2，4，8，10，12，24 h分别进样测定，结果苦参碱峰面积平均值为0.988，RSD为0.43%（n=6），表明供试液在24 h内稳定性良好。

1.3.2.8 加样回收率实验[2-3]

精密量取参芪固本糖浆（批号：20160317）6份各10 mL，分别加入50 mL的锥形瓶中，分别置于上述容量瓶中，按“2.2.3”项下方法制备供试液，再分别精密吸取供试品溶液和浓度为33.06 μg/mL的苦参碱对照品溶液各1 mL，按1:1混合。分别进样测定，计算回收率，平均回收率为96.2%（RSD=0.60%，n=6），可见此方法测定苦参碱回收率较高，准确度较高。见表1

表1 回收率测定结果

1.3.2.9 样品测定

取本品3批参芪固本糖浆（批号分别为20160317、20160318、20160319）样品，按“供试品溶液的制备”项下平行制备供试品溶液各3份，测定含量，结果3批样品中苦参碱含量分别为 0.1729 mg/mL，0.1708 mg/mL，0.1720 mg/mL，平均值为0.1719 mg/粒。

2 讨 论

本文对当归、黄芪进行薄层鉴别研究，斑点清晰，专属性强，方法重现性好。

本文针对不同流动相的选择[4-6]，通过反复的实验，以乙腈-0.02 mol/L磷酸二氢钾0.1%磷酸水溶液（10:90）为流动相最佳。

=通过以上实验，我们确定了参芪固本糖浆中苦参碱含量的测定方法，其专属性强，分离度较好，经过阴性及阳性对照试验，空白图谱无干扰。

本实验研究证明，该方法简单、准确，灵敏度高，重现性、稳定性好，回收率较高，可用于参芪固本糖浆中苦参碱的定量控制。

[1] 中国药典[M].2015版一部.

[2] 史银基,刘砥威,石 雪,等.HPLC测定阿娜尔妇洁液中苦参碱的含量[J].中国实验方剂学杂志,2012,18(14):119-120.

[3] 刘永胜,陈 华,金伟华,等.HPLC法测定抗病毒口服液中苦参碱的含量[J].中国药房,2012,23(4):371-372.

[4] 李厚洋,蔡其辉,田宏现,等.HPLC测定金归洗液中苦参碱的含量[J].中医药指南,2012,10(23):13-14.

[5] 王汉平,杨志灵.HPLC法测定强力定眩片中天麻素的含量[J].陕西中医学院学报,2008,31(4):87-88.

[6] 蔡 琨,魏 迎,马久太.肤清液中苦参碱含量测定方法学研究[J].陕西中医,2015,36(12):1669-1670.

本文编辑：吴玲丽

Identifcations and Quantitative Determination of Shenqi Guben Tangjiang

CHEN Gang，LI Xiao-wei
(Hospital of Tradmonal Chinese Medicine of Taihe County, Anhui Fuyang 236600, China)

Objective To establish of Shenqi Guben Tangjiang.Methods The TLC and HPLC were used. Results There was a good linearity within the range of 0.03306～0.13224mg(r=0.9999),the average recovery was 96.2% with RSD of 0.6%.Conclusion This method was proved to be simple,accurate and can be used for quality control of Shenqi Guben Tangjiang.

Matrine; Shenqi Guben Tangjiang; TLC; HPLC

R284.1

B

ISSN.2095-8242.2017.02.998.04